Способ определения фагоцитарной активности нейтрофилов

 

СОЮЗ COBETCHHX . СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИК (19) (1!) (5 )5 G 01 N 1/28

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

1. jl Г l(3kDJl у1 °

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

flO H306PETEHHSIM H 0тНРЫТИЯЦ

ПРИ П(НТ СССР

К А ВТОРСКОМЪГ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21 ) 4345976/1 4 (22) 18.12.87 (46) 30.05.91. Бвл. Р 20 (71) Научно-исследовательский институт трансплантологии и искусственных органов (7-) А.Б.Цыпин и Б.N. Мануйлов (53) 616-0.89. 9 (088 ° 8) (56,) Петрова И. В. и др. Стандартизированные методы обследования иммунной системы человека. М., 1984. (54) (ЛЧООО)> ОПРКЛ1,ПЕНИЯ ФАГОЦИТАРНОЙ

АКТИВНОСТИ НВИТРОФИЛОВ (57) Изобретение относится к области

Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии.

Цель изобретения — повыщение точности способа.

Способ осуществляется следующим образом.

Выращенную на агаре Хотингера однодневнув культуру микроорганизмов смывавт физиологическим раствором, доводят концентрацию микробов с помощьв физраствора по стандарту мутности микробов до 1х10 в 1,0 мл и

9 центрифугирувт 35 мин при 3000 об/мин.

Надосадочнув жидкость удаляют, à осадок ресуспендируют в 5,0 мл физиологического раствора. Затем к суспензии микроорганизмов добавляют формалин до конечной концентрации 10Х и выдерживают при комнатной температуре

3-4 ч.

После этого суспензив убитых формалином микроорганизмов центрифугимедицины, а именно к иммунологии.

Целью изобретения является повышение точности способа. Цель достигается тем, что инкубацию нейтрофилов про водят с предварительно инактивированными микроорганизмами. При этом для инактивации используют 10Õ-ный раствор формалина, который смешивают с суспензией микроорганизмов в соотношении 1:10. Затем микроорганизмы перед инкубацией обрабатывают раствором анилинового черного в течение

58-60 мин при 96-98 О. Спос.об повышает точность определения фагоцитоза до 1Х. рувт 35 мин при 3000 об/мин, К осадку микробов добавляют 5,0 мл дистиллированной воды, тщательно перемешивают и отмывявт путем центрифугирования (35 мин нри 3000 об/мин).. Надосадочнув жидкость удаляют, я к осадку убитых и отмытых микроорганизмов .добавляют 5,0 мл дистиллированной воды и ресуспендирувт. Затем к суспензии микробов добавляют 1,0 мл насыщенного водного раствора анилинового:черного, тщательно перемешивают и ставят в водяную баню на 60 мин при +98 О, перемешивая 1 раз в

10 мин. После этого суспензию микробов выдерживают еще 30 мин при комнатной температуре, а затем центри*угир вт 30 мин при 3000 об/мин.

Осадок окрашенных микробов трижды отмывают от лишней краски дистиллированной водой с помощьв центрифугиро-. вания (при 3000 об/мин в течение

1652871 яктив осTF нейтроАилов оценивают IIQ

«роценту Аягоцитоза (количество Алгоцитирующих нейтроАилов из 100), Аа5 гоцитарному числу (среднее количество микробов, поглощенных одним нейтроАилом), Аагоцитарной емкости (число активных нейтроАилов в 1 мкл крови) и абсолютному Аагоцитярному показателю (общее число микроорганизмов, поглощенных всеми нейтрофилами в

1 млк крови), Пример 1. Кровь от больного инкубируют с суспенэией микроорганизмов, подготовленных указанным способом. Готовят мазки, которые микроскопируют, и определяют показатели 1,>агоцитоза. Количество лейкоцитов равно 8570> нейтроАилов — 7/13

20 процент Аагоцитозя равен 75+0,08, фагоцитлрное число 6+0,01, фягоцитарная емкость 53354 0,107 и абсолютный

Аагоцитарный показатель 32009+0,151, Таким образом, предлагаемый способ повышает точность до 17, по сравнению с прототипом (201). ологический раствор до первоначального объема, восстанавливая тем самым начальную концентрацию микробов (1х10 в 1,0 мл), и ресуспендируют. Приготовленную таким образом суепензию окрашенных микроорганизмов используют в дальнейшем для постановки реакции Алгоцитоза. Хранят ее в холодильнике при +4-+боС или в мо( ро.1илке (при температуре ниже нуля) в течение длительного времени (до б мес и бол е), Проведение реакции Аагоцитоза сладую> 1ее.

В силоконовую стерильную пробирку наливают О, 15 мл стабилизированной KpoHH H добавляют I< HE Й О, 05 MJI суСпензии окрашенных микроорглнизмоя с концентрацией 1х10 микробных тМ и 1,0 мл, Прй этом соотношение

Ал1оцитов и микробов соответствует

1:1>0-80. Смесь инкубируют в водяной бане, периодически перемешивая, встряхивая пробирки, в течение 30 мин прй +3/ С. После этого каплю смеси наносят ня предварительно обезжиренное смесью НикиАорова предметное 30 стЕкло н делают мазок. Мазок высушивают ня воздухе и Аиксируют метиловым спиртом. Мазки можно окрашивать. Окрашивание мазка проводят

27-ным водным раствором метилового

35 зеленого в течение 15 мин. При подаче ядра Аагоцитов становятся ярко-зеле>1ого цвета, цитоплазма — бледно-серо1о, а микробы — черного цвета, ОкРашенные мазки тщательно «ромы- 40 вают проточной водой, а затем докряшивают О, 1 -ным водным раствором эозина в течение 3 с, в результате чего цитоплазма Алгоцитл становится бледно-розового цветя, ядра клеток остаются ярко-зеленого, а мнкробы— черного цвета. После этого мазок промывают проточной водой и высушивают ня воздухе. Учет полученных резупьтатов проводят под иммерсионной системой MHKpocKA1IR, Фагоцитарную

Составитель Л.Стеб

P ВдактоР И. КасаРда ТехРед Л.Олийнык

4>ормуллиз обретения

Корректор Н.Ревская

Заказ 1768 Тираж 397 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. ц/5

Производственно-издательский комбинат "Патент, г.Ужгород, ул. Гагарина,101

35 сут). К осадку окрашенных и ATмытых микроорганизмов добавляют АизиСпособ определения фагоцитарной активности нейтроАилов путем забора крови, ее инкубации с микроорганизмами, предварительно инактипированными, приготовления мазка, его окраски и определения активности по наличию микроорганизмов в клетке, о т л и ч я ю шийся тем, что, с целью повышения точности способа, инактивацию микроорганизмов проводят в течение 3-5 ч в среде, содержащей

10У,-ный раствор Аормалинл и суспензию микроорганизмов в соотношении

1:10, ири этом перед инкубацией микроорганизмы дополнительно обрабатывают Раствором анилинового черного в течение 58-60 мин при 9Г>-98 С, а заАиксированные мазки крови последовательно окрашивают 27.-ным водным раствором метилового зеленого в течение 15-20 мин и 0,1Х-ным водным раствором эозина B течение 3-5 с. аева