Питательная среда для выращивания колибактерий

 

Изобретение относится к медицинской микробиологии и касается выращивания колибактерий. Цель изобретения - увеличение выхода бактериальных клеток и удешевление среды. Для глубинного культивирования колибактерий используют питательную среду, содержащую белковый гидролизат жмыха легких 0,5 - 1,5 мас.%, крахмал осахаренный 0,5 - 1,5 мас.% и воду - остальное. Жмыхи легких являются отходом производства эндокринных препаратов. Жмыхи легких гидролизуют ферментным препаратом из STREPTOMYCES SPECIES 197. Для этих целей можно также использовать протеазу из BACILLUS SUDTILIS. Выход колибактерий составляет 10 - 26<SP POS="POST">.</SP>10<SP POS="POST">9</SP> кл/мл среды. 3 табл.

СОК)3 СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИК (51)5 С 12 И 1/ 0

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К А BTOPCKOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИРМ

ПРИ ГКНТ СССР (21) 4698217/13 (22) 31.05.89 (46) 23.08.91. Бюл 1,"- 31 (71) Всесоюзный научно-исследовательский институт прикладной энзимологии (72) B.И.Грибаускене, Т.IO.Ïàäårèìàñ, А.Б.Павиленене, А.-П.П.Ужкуренас, А.-О.П.Шпокене и А.А.Лаляан (53) 576.8.093(088.8) (56) Патент Франции II 2466251, кл . А 6 1 К 39/00, опублик. 19 79. (54) ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ВЪ|РА1ЦИВАНИЯ КОЛИБАКТЕРИЙ (57) Изобретение относится к медицинской микробиологии и касается выращивания колибактерий. Цель изобретеИзобретение относится к медицинской микробиологии и касается выращи— вания колибактерий.

Цель изобретения — увеличение выхода бактериальных клеток и удешевление среды.

Питательную среду готовят следующим образом.

Осахаривание крахмала.

10 г нерастворимого кукурузного крахмала заливают 100 мл водопровод— ной воды, подогревают до 40 С, добавляют 50 мг амилосубтилина ГЗх, рН доводят до 6,6, подогревают до 85 С и выдерживают при переме|иивании в течение 30 мин. Далее кипятят в водяной ванне в течение 1 ч, охлаждают до

75 С, добавляют 25 r амилосубтилина

ГЗх, проверяют качество осахаривания с йодом (не должен дать синего окраши„„Я0„„1671685 А 1 ния — увеличение в хода бактериальных клеток и удешевление среды. Для rnv— бинного культивирования колибактерпй используют питательную среду, содер— жащую белковый гидролизат жмыха лег— ких 0,5 — 1,5 Мас.7, крахмал осахаренный О, 5 — 1,5 мас .7 и воду — остальное. Жмыхи легких являются отходом производства эндокринных препаратов. Жмыхи легких гидролизуют ферментным препаратом из Б гер ошусes зрес1ез 197.; ля этих целей можно также использовать протеазу из

Bacillus subtilis. Выход колибактерий составляет 10-26 10> кл/мп среды.

3 табл. ания), рН доводят до 5,0 при помощи ортофосфорной кислоты, охлаждают до о

58 С, прибавляют 2 мл глюкаваморина

Гх с активностью 50 ед/мл и выдержи— вают при 58 С в течение 6 ч.

Получение белкового гидролизата жмыха легких.

При получении гидролизата жмыха легких для данной среды в реактор емкостью 0 5 м загружают 140 кг жмыха легких и 340 л воды, пеоемешив.лют, рН смеси доводят до 8,5 раствором едкого натрия, смесь нагревают до 45 С н вносят 1,5 кг Ьерментного препарата из Streptomyces species 197. Гидролизуемую смесь однократно консервируют добавлением 2,5 л хлороформа или то— луола. Процесс ведут при постоянном перемешивании и температуре 45 С в тео чение 8 ч, рН гилролизуемой смеси

167! 685 готовят питательную срепч слепуюшего состава. мас.7: белковый гидролиэат жмыха легких 1,5 осахаренный крахмал

1,5; водопроводная вода 97,0. Количество клеток на выходе 26х109 кл/мл.

Сравнительные данные выхода количества клеток F.,coli 88 при росте на средах с другими мясными гидролизата- 40 ми представлены в табл.2и 3, иэ которых видно,что наибольшее количество клеток получено при росте на предлагаемой питательной p де, в состав которой входит гидролнэат жмнха легких с использованием Streptomyces species 197.

45 поддерживают раствором едкого натрия на уровне 8, 5 . .11о окончании гидролиэа смесь подкнсляют до рН 5,0-5,5, нао гревают дс 1ОЧ С и выдерживают в те- чение 10 мин, затем фильтруют на ва— куум-барабанном фильтре с фильтроперлитом. ФильТрат упаривают и полученный концентрат сушат на распылительной сушилке. 10

Общий азоТ 10, 2 — 10, 57, аминный азот 4,1 — 4,37,, Содержание свободных аминокислот в гидролиэате жмыха легких, предлагаемого для данной среды, и в других 15 мясных гидролиэатах представлено в табл. 1.

Пример 1 . Для глубинного культивирования колибактерий используют питательную среду следующего состава, мас.7.: белковый гидролизат жмыха легких 1,0; осахаренный крахмал 1,0, водопроводная вода 98,0 ° Количество клеток на выходе 2 5х 1 09 кл /мл .

Пример 2. Аналогично приме- 25 ру 1 готовят питательную среду следую.4его состава мас.7.: белковый гидролизат жмыха легких 0 5; осахаренный крахмал 0,5 водопроводная вода 99,0. .Количество клеток на выходе 10х 30 х 109 кл /мл

Пример 3. Аналогично примеру 1

Количество клеток E.coli 88 при росте на питательной среде с пептоном приведено в табл. 2.

Количество клеток F,.coli 88 при росте на питательной среде с гидролизатом жмыха легких, полученного с использованием щелочной протеазы из Вас.

subtilis, приведено в габл .3.

Применение предлагаемой питательной среды для выращивания колибактерий обеспечивает ускорение роста и в результате ускоренного роста в 2,5 раза (на 1507) повышает выход количества клеток по сравнению с выращиванием йа известной питательной среде.

Компоненты предлагаемой питательной среды являются простыми, легкодоступными и дешевыми, что обеспечивает удешевление и упрощение состава среды и технологического процесса в цепом и дает воэможность применять данную питательную среду в полупроиэводственных и производственных масштабах изготовления коливакцины. формула изобретения

Питательная среда для выращивания колибактерий, содержащая источники углерода и азота, воду, о т л и ч а ю щ а я с я тем, что, с целью повышения выхода бактериальных клеток и удешевления среды, в качестве источника азота она содержит жмых легкого — отход производства зндокринных препаратов, подвергнутый гидролиэу ферментным препаратом из

Streptomyces species 1 97; а в качестве источника углерода — осахаренный крахмал при следующем соотношении компонентов, мас,.7: жмых легкого — отход производства эндокринных препаратов, подвергнутый гидролизу ферментным препаратом из Streptomyces species 197

0,5-1,5, осахаренный крахмал 0,5- 1,5, вода — остальное.

) 671685

Таблица 1

Аминокислоты

Гилро— лизат жмыха легких

Преллагаемый

Пептон с щелочной про1 еазой

0,660

0,315

0,217

Лизин

Гистидин

Аргинин

Аспарагиновая кислота

Треонин

Серин

Глутаминовая кислота

Пр олин

Глицин

Аланин

Валин

Метионин

Иэолейцин

Лейцин

Тирозин фе нилаланин

Цистеин

Триптофан

1,000

0 010

0,270

О, 773

О, 131

О, 220

0,520 0,200

0,479 0,240

0,464 0,350

О, 100

О, 150

0,254

0,670

0,510

0,500

1,100

1,520

0, 710

0,920

0,710

2,010

0,250

0,200

0,170

0,230

О, 112

0,410

0,420

1, 100

0, 710

0,300

Таблица2

Г j Г j

Параметры

1 2 3 4 5

0,25 2,0

1,5

0,5

0,5 клеток, 1097, 0,5 10

0,3 10,5

Пептон, мас.Ж 1,0

Крахмал кукурузный нерастворимый, мас.7 1,0

Количество

Солеэжя ние аминокислот в гидролизате 7

0,880

1,800

0,860

1, 700

О, 770

1,950

1, 144

1,543

0,400

1,5 0,25, 2,0

1 1/1685

ТаблцпаЗ

Параметры

1 7

1 2

Гидр оли зат жмыха легких с щелочной протеаэой, мас.X

Крахмал кукурузный нерастворимый, мас.7

Количество

1,0

0 5

1,5

0,25

2,0

1,0

0,5

0,25

1,5

2,0 клет ок, 109/„

14

0,8 14,8

Составитель А.Завадская

Редактор И.щербак Техред M.Äèäûê Корректор Л.Патай

Заказ 2803 Тираж 363 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г.ужгород, ул. Гагарина, 101