Штамм хламидий снlамydiа рsiттасi, используемый для изготовления биопрепаратов для диагностики и профилактики хламидиоза серебристо-черных лисиц

 

Изобретение относится к ветеринарной микробиологии, в частности к средствам лабораторной диагностики и специфической профилактики. Целью изобретения является штамм CHLAMYDIA PSITTACI "БЛ - 84", обладающий высокой антигенной и иммуногенной активностью, что позволяет его использовать для изготовления биологических препаратов для диагностики и профилактики хламидийных инфекций серебристо-черных лисиц. Штамм "БЛ - 84", впервые выделенный от абортированного плода серебристо-черной лисицы, адаптирован к размножению в желточном мешке куриных эмбрионов (КЭ), вызывает их гибель на 4 - 10 день после заражения. Для КЭ инфекционный титр составляет 10<SP POS="POST">-5</SP> - 10<SP POS="POST">-6</SP> ЭДЛ<SB POS="POST">50</SB>/0,3 мл. Штамм нетоксичен, патогенен для серебристо-черных лисиц, норок и лабораторных животных (белых мышей и морских свинок). Антиген из штамма "БЛ - 84" обладает выраженной активностью при изучении в реакциях связывания комплемента и энзиммеченных антител в сравнении с эталонным биофабричным хламидийным антигеном, изготовленным из штамма орнитоза "Лори". Штамм обладает высокой иммуногенной активностью и вызывает невосприимчивость к заражению у 90 - 100% белых мышей через 14 - 20 дней после их иммунизации. Размеры возбудителя, его морфологические, тинкториальные, физиологические, иммунохимические и антигенные свойства подтверждают, что штамм "БЛ - 84" относится к бактериям рода CHLAMYDIA, виду CHLAMYDIA PSITTACI. Штамм депонирован в банке штаммов Всесоюзного научно-контрольного института ветеринарных препаратов и имеет регистрационный N8. 2 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

ГОСУДАРСТВЕ ННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР вйЦЩЩЯ

ilk i й) ), :", = р, ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

1 (ь (Ь V

О (21) 4744538/13 . (22) 09.08.89 (46) 07.08.91. Бюл. М 29 (71) Всесоюзный научно-исследовательск. и ветеринарный институт (72) P.Х,Равилов, P.À.Øaôèêoaa, К П.Бобрышев, А.Ç.Равилов, В.С,Угрюмова и А.Ю.Беклешова (53) 616,981.71:615.371/372.373 (088,8) (56) Червонский В,Н. Выявлен;е комплементсвяэывающих антител у некоторых видов птиц и млекопитающих в РСК с антигенам вируса орнитоза, — Воп,>осы вирусологии, 1960, М 1, с.80

Червонский В.H., Попов О.М.Антиген для PCK при орнитозе-пситтакозе. — Вопросы вирусологии, 1959, N. 1, с.68, (54) ШТАММ ХЛАМИДИЙ CHLAMYDIA

PSITTACI, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ИЗГОТОВЛЕНИЯ БИОПРЕПАРАТОВ ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ И ПРОФИЛАКТИКИ

ХЛАМИДИОЗА СЕРЕБРИСТО-ЧЕРНЫХ

ЛИСИЦ. (57) Изобретение относится к ветеринарной микробиологии, в частности к средствам лабораторной диагностики и специфической профилактики, Целью изобретения является штамм Chiamydia pslnacl БЛ-84, обладающий высокой антигенной и имунногенной активностью, что позволяет его испольэовать для изготовления биологических преИзобретение относится к ветеринарной микробиологии, в частности к средствам лабораторной диагностики и специфической профилактики. Цель изобретения — штамм сЫатуб!а pslttaci БЛ-84, обладающий высокой антигенной и иммуногенной активностью, что позволяет его использовать для

„„ Ы„„1667870 А1

s А 61 К 39/118 С 12 N 1/20 паратов для диагностики и профилактики хламидийных инфекций серебристо-черных лисиц. Штамм БЛ-84, впервые выделенный оТ абортированного плода серебристо-черной лисицы, адаптирован к размножению в желточном мешке куриных эмбрионов (КЭ), вызывает их гибель на 4-10-й день заражения. Для КЭ инфекционный титр составляет

10 -10 ЭЛД50/0,3 мл, Штамм нетоксичен, патогенен для серебристо-черных лисиц, норок и лабораторных животных (белых мышей и морских свинок). Антиген из штамма

БЛ-84 обладает выраженной активностью при излучении в реакциях связывания комплекта и энзиммеченных антител в сравнении с эталонным биофабричным хламидийным антигеном, изготовленным из штамма орнитоза "Лори". Штамм обладает высокой иммуногенной активностью и вызывает невосприимчивость к заражению у

90-100% белых мышей через 14-20 дн после их иммунизации. Размеры возбудителя, его морфологические, тинкториальные, физиологические. иммунохимические и антигенные свойства подтверждают, что штамм

БЛ-84 относится к бактериям рода

chlamIdia, виду chlamidia pslttaci. Штамм депонирован в банке штаммов Всесоюзного научно-контрольного института ветеринарных препаратов и имеет регистрационный

N 8, 2 табл. изготовления биологических препаратов для диагностики и профилактики хламидийных инфекций серебристо-черных лисиц, Штамм выделен от абортированного плода серебристо-черной лисицы в хозяйстве, где наблюдаются случаи абортов, мертворождения и слаборождения у пушных

1667870 4 ции связывания комплемента путем сравнения титров антител в гипериммунн ых сыворотках морских свинок, полученных к штаммам хламидий: ВГНКИ ¹ 8 и "Лори", а также антигенов из этих штаммов. Характеристика антигенности штамма в сравнении со штаммом "Лори" представлена в табл. 2, Приведенные данные показывают, что по антигенной активности при исследовании с гомологичной сывороткой штамм

ВГНКИ N. 8 в 16 раз превосходит штамм орнитоэа "Лори", а с иммунной орнитозной

50 зверей; адаптирован к размножению в куриных эмбрионах (КЭ), прошел 42 пассажа при последовательном культивировании на желточных оболочках КЭ.

Штамм депонирован в банке штаммов

Всесоюзного научно-контрольного института ветеринарных препаратов и хранится под ¹ 8 в коллекции специальной лаборатории штаммов Всесоюзного научно-исследовательского института (г. Казань).

Штамм С sittaci ВГНКИ № 8 имеет следующие морфологические и физиологические характеристики.

Элементарные тельца штамма имеют округлую форму размером 200-300 нм, по методу Стэмпа окрашиваются в красный цвет. Возбудитель находится внутри и вне клеток, располагаясь одиночно или группами. В мазках-отпечатках из паренхиматозных органов (печень, селезенка, легкие)

20 лабораторных животных (морских свинок, белых мышей) и норок, инфицированных этим штаммом, в реакции непрямой иммунофлуоресенции обнаружены цитоплазматические включения в виде полиморфных

25 одиночных и множественных желто-зеленых образований.

Штамм хорошо культивируется в эпителиальных клетках желточных оболочек КЭ, вызывая их гибель на 4-10 день после зара- 30 жения в зависимости от дозы вводимого инфекционного материала, Для КЭ инфек-5 -б ционный титр составляет 10 — 10

ЭЛД5о/0,3 мл.

Штамм устойчив к действию стрептоми- 35 цина; чувствителен к действию антибиотиков тетрациклинового ряда, в меньшей степени — пенициллина.

Штамм chlamydla psittaci ВГНКИ ¹ 8 (БЛ-84) не токсичен, патогенен для серебри- 40 сто-черных лисиц и норок. Характеристика патогенности штамма для лабораторных животных представлена в табл,1, Штамм обладает выраженной антигенной активностью, которую изучают в реак- 45 сывороткой е 5 раз уступает эталойному штамму.

Антиген из штамма ВГНКИ М 8 выявляет специфические хламидийные антитела в реакции энзиммеченых антител в сыворотках крови больных, переболевших и экспериментально зараженных лабораторных животных и пушных зверей в титрах 1:10—

1: 10240.

Штамм обладает высокой иммуногенной активностью и вызывает невосприимчивость к заражению у 90-100% белых мышей через 14-20 дн после их иммунизации.

Пример 1, Исходным материалом для получения специфического хламидиозного антигена служит 20%-ная взвесь, приготовленная на 0,2 М фосфатно-буферном растворе (рН 7.2) из 300 желточн ых оболочек

КЭ, инфицированных штаммов ВГНКИ № 8.

Очистку и концентрацию возбудителя хламидиоза лисиц производят путем центрифугирования дифференциального и в ступенчатом градиенте сахарозы. Затем элементарные тельца обрабатывают смесью. содержащей додецилсульфат натрия (ДСН) и зтилмеркаптан (ЭМ) в конечной концентрации 0,1 и 1% соответственно. Непрореагировавшие ДСН и ЭМ удаляют, диализируя суспензию против 0,15М хлористого калия в течение 48 ч Получено 30 мл антигена, который е РСК имеет титр 1:128.

Пример 2. Для изучения иммуногенны„свойств выделенного штамма очищенный и сконцентрированный, как указано в примере 1, инфекционный материал штамма, содержащий 30 мг/мл белка, инактивированный 0,4-ным (в конечной концентрации) формалином в течение 5 сут при ЗООС, вводят белым мышам внутрибрюшинно в дозе 0,5 мл. В качестве контроля используют неиммунизированных белых мышей. По истечении 20 дн опытных и контрольных белых мышей заражают интраназально 10%-ной взвесыю желточных оболочек КЭ, инфицированных штаммом

БЛ -84 с инфекционным титром 10

ЭЛД5о/0,3 мл в дозе 0,05 мл. В результате опыта выявлено, что однократное внутрибрюшинное введение инактивированных хламидий штамма ЬГНКИ N 8 защищает

90% белых мышей от интраназального заражения этим же штаммом.

Формула изобретения

Штамм хламидий Chlamydla pslttacl

ВГНКИ-8, используемый для изготовления биопрепаратов для диагностики и r рофилактики хламидиозФ серебристо-черных лисиц. 667870

Таблица 1

Таблица 2

П р и м е ч а н и е . * — обратная ьеличина титров антител.

Составитель В. Романова

Техред M.Ìoðãåíòàë Корректор М, Кучерявая

Редактор А. Козориэ

Заказ 2600 Тираж М5 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101

П р и м е ч а н и я. в/в — внутривенно, и/н — интраназвлыо: и/ц — интрацеребрально; в/б — внутрибрюшно; п/к — пэдкожно: н.и. — не исследовано.