Штамм хламидий снlамydiа рsiттасi, используемый для изготовления биопрепаратов для диагностики и профилактики хламидиоза песцов

 

Изобретение относится к ветеринарной микробиологии, в частности к средствам лабораторной диагностики и специфической профилактики. Целью изобретения является штамм CHLAMYDIA PSITTACI "ПП - 87", обладающий высокой антигенной и иммуногенной активностью, что позволяет его использовать для изготовления биопрепаратов для диагностики хламидиозов серологическими реакциями (РСК, РНГА, ИФА, РИА и др.), а также специфической профилактики хламидийных инфекций. Штамм "ПП - 87" впервые выделен от абортировавшей самки песца, адаптирован к размножению в желточном мешке куриных эмбрионов (КЭ), вызывает их гибель на 4 - 10 день после заражения. Для КЭ инфекционный титр составляет 10<SP POS="POST">-5</SP> - 10<SP POS="POST">-6</SP> ЭЛД<SB POS="POST">50</SB>/0,3 мл. Штамм нетоксичен, патогенен для песцов, норок и лабораторных животных (белых мышей и морских свинок). Антиген из штамма "ПП - 87" обладает выраженной активностью при изучении в реакциях связывания комплемента и энзиммеченных антител в сравнении с эталонным биофабричным хламидийным антигеном, изготовленным из штамма орнитоза "Лори". Штамм обладает высокой иммуногенной активностью и вызывает невосприимчивость к заражению у 90 - 100% белых мышей через 14 - 20 дней после их иммунизации. Размеры возбудителя, его морфологические, тинкториальные, физиологические, иммуногенные и антигенные свойства подтверждают, что штамм "ПП - 87" относится к бактериям рода CHLAMYDIA, виду CHL. PSITTACI 2 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

ГОСУДАРСТВЕННЫИ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4731156/13 (22) 24.08.89 (46) 07.08.91. Бюл. М 29 (71) Всесоюзный научно-исследователь кий ветеринарный институт (72) P.Х.Равилов, P.А,Шафикова, А.З.Равилов и А.Ю.Беклешова (53) 616.981.71:615.371б72.373 (088.8) (56) Червонский В.Н. Выявление комплементсвязывающих антител у некоторых видов птиц и млекопитающих в РСК с антигеном вируса орнитоза. — Вопросы вирусологии, 1960, М 1, с.80.

Червонский В.Н., Попов О,M. Антиген для РСК при орнитозе-пситакозе. — Вопросы вирусологии, 1959, М 1, с.68. (54) ШТАММ Х Л АМ И Д И Й C W LA M D I A

PSITTACI, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ИЗГОТОВЛЕНИЯ БИОПРЕПАРАТОВ ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ И ПРОФИЛАКТИКИ

ХЛАМИДИОЗА ПЕСЦОВ. (57) Изобретение относится к ветеринарной микробиологии, в частности к средствам лабораторной диагностики и специфической профилактики, Целью изобретения является штамм Chlamydla pslttacl ПП-87, обладающий высокой антигенной и иммуногенной активностью, что позволяет его использоИзобретение относится к ветеринарной микробиологии, в частности к средствам лабораторной диагностики и специфической профилактики, Цель изобретения — штамм Chlamydla

pslttacl ПП-87, обладающий высокой антигенной и иммуногенной активностью, что позволяет его испольэовать для изготовления биологических препаратов для диагностики хламидиозов серологическими реакциями (РСК. РНГА, ИФА, РИА и др,), а.. Ж 1667869 А1

tst)s А 61 К 39/118, С 12 N 1/20 вать для изготовления биопрепаратов для диагностики хламидиозов серологическими реакциями(РСК, РНГА, ИФА, РИА идр.), а также для специфической профилактики хламидийных инфекций. Штамм ПП-87 впервые выделен от абортировавшей самки песца, адаптирован к размножению в желточном мешке куриных эмбрионов (КЭ), вызывает их гибель на 4-10-й день после заражения. Для КЭ инфекционный титр составляет 10 — 10 ЭЛДм/0,3 мл.

Штамм нетоксичен, патогенен для песцов, норок и лабораторных животных (белых мышей и морских свинок), Антиген иэ штамма ПП-87 обладает выраженной активностью при изучении в реакциях связывания комплемента и энзиммеченых антител в сравнении с эталонным биофабричным хламидийным антигеном, изготовленным из штамма орнитоэа "Лори".

Штамм обладает высокой иммуногеннойактивностью и вызывает невосприимчивость к заражению у 90-100 g белых мышей через 14-20 дн после их иммунизации. Размеры возбудителя, его морфологические, тинкториальные, физиологические, иммуногенные и антигенные свойства подтверждают, что штамм ПП-87 относится к бактериям рода СЫавуб!а, виду

Chlamydla pslttaci. 2 табл. также для специфической профилактики хламидийных инфекций, Штамм выделен от абортировавшей самки песца в хозяйстве, где наблюдаются случаи абортов, мертворождений и слаборождений у клеточных пушных зверей, адаптирован к размножению в куриных эмбрионах (КЭ), прошел 31 пассаж при последовательном культивировании на желточной оболочке КЭ.

1667869

Таблица 1

П р и м е ч а н и я . в/в — внутривенно; и/и - иитранаэально; и/ц — интрацеребрально; в/б — виутрибрк)ы ииио. I1/к подкожно.

Штам дегюнирован в банке штаммов Всесоюзного научно-контрольного института ветеринарных препаратов и хранится под М 9 в коллекции специальной лаборатории штаммов Всесоюзного научно-исследовательского ветеринарного института (г. Казань).

Штамм имеет следующие морфологические и физиологические характеристики.

Элементарные тельца штамма имеют округлую форму размером 200-300 им, по методу Стемпа окрашиваются в красный цвет. Возбудитель находится внутри и вне клеток, располагаясь одиночно или группами. В мазках-отпечатках из пареихиматозных органов (печень, селезенка, легкие) лабораторных животных (морских свинок, белых мышей) и норок, инфицированных штаммом ПП-87, s реакции непрямой имму. нофлуоресценции обнаружены цитоплазматические включения в виде полиморфиых одиночных и множественных ярких желтоэеленых образований.

Штамм хорошо культивируется в зпителиальных клетках желточных оболочек КЭ, вызывая их гибель на 4-10-й день после заражения в зависимости от дозы вводимого инфекционного материала. Для КЭ инфекционный титр составляет 10 — 10

-5 . -б

ЭЛД5о/0,3 мл.

Штамм устойчив к действию стрептоми— цина, чувствителен к действию антибиотиков тетрациклинового ряда, в меньшей степени — пенициллина, Штамм Chlarnydla psittaci ВГНКИ N 9 (ПП-87) нетоксичен, патогенен для песцов и норок. Характеристика патогенности штамма для лабораторных животных представлена в табл.1, Пример 1 . Исходным материалом для получения специфического хламидийного антигена служит 20=,ь-ная взвесь, приготовленная на 0,2М фосфатно-буферном растворе (рН 7,2) из 20 желточных оболочек

КЭ, инфицированных штаммом ПП-87. Очистку и концентрацию возбудителя хламидиоза производят путем центрифугирования дифференциального и в ступенчатом градиенте сахарозы. Затем элементарные тельца обрабатывают смесью. содержащей додецилсульфат натрия (ДСН) и зтилмеркаптаи (ЭМ) в конечной концентрации 0 1 и 1 (, со5

50 ответственно, Непрореагировавшие ДНС и

ЭМ удаляют, диалиэуя суспенэию против

0,15 M хлористого калия в течение 48 ч.

Получено 20 мл аитигена, который в РСК имеет титр 1:128.

Пример 2. Для изучения иммуногенных свойств штамма очищенный и сконцентрированный, как указано в примере 1, инфекционный материал, содержащий 30 мг/мл белка ииактивироваиный 0,4ф,-ным (в конечной концентрации) формалином в течение,5 сут при 37 С вводят белым мышам виутрибрюшииио в дозе 0,5 мл. В качестве контроля используют иеиммунизированных белых мышей. По истечении 20 дн опытных и контрольных белых мышей заражают интраназально 10, -ной взвесью желточных оболочек КЭ, инфицированных штаммом ПП-87, -5,5 с инфекционным титром 10, ЭЛД5о/0,3 мл в дозе 0,05 мл. В результате опыта выявлено, что однократное виутрибрюшинное введение ииактивированиых хламидий штамма ПП-87 защищает 95 (, белых мышей от интранаэального заражения этим же штаммом.

Пример 3 . Штамм обладает выраженной антигенной активностью, которую изучают s реакции связывания комплемента путем сравнения титров антител в гипер ",м уииых сыворотках морских свинок, получен..мх к штаммам хламидий; ПП-87 и Лори", а также антигеиов иэ этих штаммов.

Характеристика аитигенности указанного штамма в сравнении со штаммом "Лори" представлена в табл.2.

Приведенные данные показывают, что по антигеииой активности при исследовании с томологической сывороткой штамм

ПП-87 превосходи-. штамм орнитоза "Лори"

B 64 раза, а с имунной орнитозной сывороткой в 5 раз уступает эталонному штамму, битиген иэ штамма ПП-87 выявляет специфические хламидийные антитела в реакции энзиммечеиных антител в сыворотках крови больных, переболевших и экспериментальиг> зараженных лабораторных животных и пушных зверей в титрах 1:10 — 1:10240.

Формула изобретения

Штамм хламидий Chlamydla psittaci

ВГНКИ М 9, испо ь;-:уемый для изготовления биопрепаратов для диагностики и профилактики хламидиоза песцов. . 67869

Таблица 2

Гипериммунные сыворотки, полученные к штаммам

Тит антител пои иссле овании с внтигеном из штамма

ВГНКИ М9 ПП-87

"Лори"

П р и м е ч а н и е . * обратная величина титров антител, Составитель В. Романова

Техред М.Моргентал Корректор М. Максимишинец

Редактор А. Козориз

Заказ 2600 Тираж /4/3 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035. Москва. Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101

ПП-87

"Ло и"

640*