Способ моделирования холерной инфекции

 

Изобретение относится к экспериментальной микробиологии и может быть применено при моделировании кишечных инфекций. Цель изобретения - приближение к клиническому течению за счет удлинения процесса. Предложенный способ моделирования заключается в том, что взрослым линейным и беспородным мышам проводили предварительную обработку желудочно-кишечного тракта путем внутрижелудочного введения (по 0,5 мл на каждое введение) 3 - 4%-ного содового раствора NA<SB POS="POST">2</SB>CO<SB POS="POST">3</SB> за 5 ч и 1 ч до заражения. Непосредственно перед заражением в прямую кишку вводили тугой ватный тампон и пространство между тампоном и анальным отверстием заполняли медицинским клеем. Холерные вибрионы вводили внутрижелудочно в дозе 10<SP POS="POST">2</SP> - 10<SP POS="POST">6</SP> в 0,25 мл 3 - 4%-ного содового раствора. За животными наблюдали в течение 3 сут. Критериями оценки развития инфекции служили количество павших животных, сроки их гибели, наличие и степень выраженности холерогенного эффекта (по коэффициенту накопления жидкости в кишечнике, ее характеру и количеству вибрионов в содержимом кишечника). Авторами впервые была создана высокочувствительная стойкая и легко воспроизводимая модель холерной инфекции. Способ прост в исполнении, не требует специальной подготовки.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (я)л G 09 B 23/28

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛ6СТВУ

1 (21) 4741818/14 (22) 06.10.89 (46) 30.08.91. Бюл. N 32 (71) Днепропетровский медицинский институт и Ростовский научно-исследовательский противочумный институт (72) Г.В.Божко, M.Л.Горбунова. Ю,M,Ëîìîâ, В.Л.Луковская и И.Д.Бардых (53) 615.475 (088,8) (56) Richardson S.Н. et al. Infection immur}lty, 1984, vol. 43, М 1, 432-486. (54) СПОСОБ МОДЕЛИРОВАНИЯ ХОЛЕРНОЙ ИНФЕКЦИИ (57) Изобретение относится к экспериментальной микробиологии и может быть применено при моделировании кишечных инфекций. Цель изобретения — приближение к клиническому течению за счет удлинения процесса. Предложенный способ моделирования заключается в том, что взрослым линейным и беспородным мышам проводили предварительную обработку жеИзобретение относится к экспериментальной микробиологии и может быть применено при моделировании кишечных инфекций.

Цель изобретения — приближение к клиническому течению за счет удлинения процесса.

Способ осуществляют следующим образом.

Взрослым мышам весом 16-18 г (линии.

ВА1В/с и беспородным) обоего пола, изолированным друг от друга и лишенным пищи на сутки, проводят ощелачивание желудка и

„„Б4 „„1674217 А1 лудочно-кишечного тракта путем внутрижелудочного введения (no 0,5 мл на каждое введение) 3-4 -ного содового раствора йа2СОз за 5 ч и 1 ч до заражения. Непосредственно перед заражением в прямую кишку вводили тугой ватный тампон и прас ранство между тампоном и анальным отверстием заполняли медицинским клеем. Холерные вибрионы вводили внутрижелудочко в дозе

10 -10 в 0,25 мл 3-4 -ного содового раство2 6 ра. 3а животным наблюдали в течение 3 cyt.

Критериями оценки развития инфекции служили количество павших животных, сроки их гибели, наличие и степень выраженности холерогеннаго эффекта (по коэффициенту накопления жидкости в кишечнике, ее характеру и количеству вибрионов в содержимом кишечника). Авторами впервые была создана высокочувствительная стойкая и легко воспроизводимая модель холерной инфекции. Способ прост в исполнении, не требует специальной подготовки. тонкого кишечника раствором пищевой соды.

Непосредственно перед заражением в ректальный канал вводят ватный тампон на глубину до 5 мм и пространство между тампоном и анальным отверстием заполняют медицинским клеем.

Взвесь вибрионов вводят внутрижелудочно с помощью зонда в 3-4% садовом растворе в объеме 0.5 мл, как указывалась выше. Заражающая доза варьировала от 10 до 10 живых клеток. Был использован штамм холерного вибриона V, е1ыг 5879, 1674217

10

За животными наблюдали 72 ч, по истечении которых оставшихся в живых мышей забивают;

Всех павших и забитых животных

BcKpblB8IoT, Критерием развития специфического инфекционного процесса были: количество павших животных и сроки их гибели, наличие и степень выраженности холерогенного эффекта (по коэффициенту накопления жидкости в кишечнике, ее характеру и количеству вибрионов в содержимом кишечника).

Способ подтверждается следующим примером, Пример 1. Мышь весом 18 г линии

ВА1В/с изолируют в клетке, конструкция которой исключает возможность копрофагии, и на сутки лишают пищи, но не воды, За

5 ч до заражения животному внутрижелудочно с помощью металлического зонда с напаянным наконечником из олова размером 1,5-2 мм (для предупреждения механического травмирования), соединенного с дозированным шприцем, ввели 0,5 M/l 3%ного раствора бикарбоната натрия. Повторное и аналогичное введение содового раствора производят за 1 ч до заражения.

Непоредственно перед заражением животному в энальное отверстие на глубину 5 мм вводят плотный ватный тампон диаметром

2-3 мм. Пространство между тампоном и анэльным отверстием заполняют дозированно (0,1-0,2 мл) медицинским клеем с помощью шприца или резиновой груши, соединенных с пластмассовым наконечником, Культуру вирулентного штамма холерных вибрионов (eltor, 5879) готовили по методике, 18-часовую культуру, выращенную при 20-22 С, отсевали в пробирку с 1% пептоннои водои и через 4 ч инкубации при

37 С высевают на влажную пластинку щелочного агара. Посевы выдерживают при комнатной температуре l8 ч. Из выросшей культуры петлей готовят взвесь в 3Я,,-ном растворе пищевой соды йа СОэ) и доводили до концентрации 4 10 по стандарту мутности 0СО "20 ед", а затем последовательно десятикратными разведениями в указанном содовом растворе доводят до концентрации

4 10, 4.10, 4.10, 4 10 и 4 10" м,к./мл. Из каждого указанного разведения берут для заражения 0,25 мл взвеси, в которых соответственно содержалось 10, 10, 10, 10 и

10 м.к,/мл. Из последней пробирки (4 10 ) делают высев по 0,1 мл на две чашки со щелочным агаром для определения количества жизнеспособных клеток.

Для заражения использов.ëè свежеприготовленные взвеси.

Заражение проводят внутрижелудочно по описанной методике, В течение последующих часов наблюдения животное не получало пищи, но не было лишено воды, Мышь пала на третьи сутки после заражения при явлениях гипотермии, гиподинамии, усиленном диурезе, судорогах, При вскрытии подкожная клетчатка сухая, тусклая, кишечник вздут, растянут, заполнен серозной прозрачной жидкостью, Коэффициент накопления жидкости определяют по формуле:

К= — — 1000;К 1000=111

А . 1,8

 — А 1,8 г — 1,8 где А — вес тонкого кишечника с накопившейся жидкостью в граммах;

 — вес тела животного.

Значение коэффициента 111 подтвердило специфичность развивше ося инфекционного процесса. При бактериологическом исследовании содержимого тонкого кишечника количество живых клеток вибриона достигало 2 ° 10, что свидетельствовало об интенсивном размножении возбудителя. Приведенные данные подтверждали специфичность развившегося инфекционно о процесса.

Таким образом, приведенные примеры показывают, что авторами впервые создана высокочувствительная стойкая и легко воспроизводимая модель холерной инфекции на доступных и удобных лабораторных жимотных — взрослых мышах. Положительный эффект достигался принципиально новой методикой опечатывания: в прямую кишку вводили тугой ватный тампон и пространство между тампоном и анальным отверстием заполняли медицинским клеем. Это позволило стабильно сохранять состояние опечатывания в течение 72 ч..Тем самым обеспечивался необходимый i:oíòàêò вибрионов со слизистой кишечника как важное условие развития инфекции, Высокая чувствительность модели позволяет использовать ее для определения наличия и степени вирулентности холерных вибрионов.

Сравнительно длительный срок наблюдения за животными делал модель пригодной для изучения инфекционного процесса в динамике.

Формула изобретения

Способ моделирования холерной инфекции, включающий предварительную обработку желудочно-кишечного тракта и обтурацию анального отверстия экспериментального животного, отличающийся тем, что, с целью приближения к клиническому течению за счет удлинения процесса.

1674217

Составитель А, Лычкова

Техред М.Моргентал Корректор Э. Лончакова

Редактор Н. Химчук

Заказ 2927 Тираж 2В4 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35„Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул. Гагарина, 101 предварительную обработку желудочно-кишечного тракта осуществляют путем внутрижелудочного введения 3-4 -ного содового раствора за 5 и 1 ч до заражения по 0,5 мл, тампонируют и обтурируют прямую кишку с последующим внутрижелудочным введением холерного вибриона s дозе

10 -10 живых клеток.