Способ определения проокислительной активности химических веществ

 

Изобретение относится к способам определения факторов регуляции перекисного окисления липидов, а именно к способам определения прооксидантной активности вещества. Цель изобретения - ускорение способа. Исследуемое вещество в растворе вводят в модельную систему, представляющую собой 21,3 мМ этанол-буферного раствора олеиновой кислоты с PH 7,5, куда добавляют инициатор 1,2%-ный раствор перекиси водорода, после чего регистрируют быструю вспышку хемилюминесценции и по нарастанию величины со светосуммы по сравнению с контролем определяют проокислительную активность вещества. Способ позволяет ускорить определение проокислительной активности в 5 - 7 раз.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4634881/14 (22) 18.01.89 (46) 23.07.91. Бюл. М 27 (71) Белорусский научно-исследовательский институт кардиологии МЗ БССР (72) В.В.Мирончик, С.H.×åðåíêåâè÷ и

А.К.Говорун (53) 612.08(088.8) (56) Владимиров Ю.А., Арчаков А.И. Перекисное окисление липидов в биологических мембранах. M.: Наука, 1972, с. 246. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПРООКИСЛИТЕЛЬНОЙ АКТИВНОСТИ ХИМИЧЕСКИХ ВЕЩЕСТВ (57) Изобретение относится к способам определения факторов регуляции перекисного

Изобретение относится к биохимическим и медицинским исследованиям, в частности к фармакологии, и может быть использовано для определения активности факторов, стимулирующих скорость переокисления липидов.

Цель изобретения — ускорение способа, Способ осуществляют следующим образом.

Приготовляют модельную систему с конечной концентрацией олеиновой кислоты—

6 мг/мл (21.3 мМ/л), рН 7,5. Олеиновую кислоту в количестве 319,3 мМ растворяют в 4 мл этанола и прибавляют 7 мл 20 мМ раствора КН2Р04. Затем тщательно перемешивают, доводят рН модельной системы до значения 7,5 путем капельного добавления

10 н. раствора КОН. К0,8мл приготовленной модельной системы добавляют 0,2 мл, рас„„Я2„„1665305 А1 (я)5 G 01 N 33/52 G 09 В 23/28 окисления липидов, а именно к способам определения прооксидантной активности вещества. Цель изобретения — ускорение способа. Исследуемое вещество в растворе вводят в модельную систему, представляющую собой 21,3 мМ этанол-буферного раствора олеиновой кислоты с рН 7,5, куда добавляют инициатор 1,2 -ный раствор перекиси водорода, после чего регистрируют быструю вспышку хемилюминесценции и по нарастанию величины светосуммы по сравнению с контролем определяют проокислительную активность вещества. Способ позволяет ускорить определение проокислительной активности в 5-7 раз. 1 табл. твора исследуемого прооксиданта (в этаноле или фосфатном буфере) и переносят кювету в установку для измерения @ сверхслабых свечений. В данную кювету бы- ( стро вводят 1 мл 1,2 -ного раствора НгОг и Ос, регистрируют на самописце или с помощью (Л интенсиметра в течение 3 — 5 с быструю вспышку хемилюминесценции. Затем проводят контроль аналогично опыту, только вместо раствора прооксиданта добавляют

0,2 мл его растворителя. Определяют светосумму быстрой вспышки, вычисляют процент ее увеличения по сравнению с а контролем и данные заносят в протокол исследования.

Измерение хемилюминесценции проводят на установленных для измерения сверхслабых световых потоках, работающих в режиме счета фотонов.

1665305

ПОА= (— — 1 ) 100 =50 »

15 Формула изобретения

П р и м е ч а н и е. Величина активности представляет собой среднее арифметическое из пяти параллельных опытов, Составитель Н.Гуляева

Техред M.Moðãåíòàë Корректор H.Êîðîëü

Редактор В.Данко

Заказ 2389 Тираж 420 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г, Ужгород, ул.Гагарина, 101

Пример 1 (расчет). При комнатной температуре в течение 5 с регистрируют быструю вспышку хемилюминесценции при добавлении инициатора Н202 в кювету с модельной системой, содержащей исследуемый прооксидант, и производят измерение

Ее интенсивности (число импульсов 4), а затем измеряют интенсивность хемилюминесценции в контроле (число импульсов I»). ,Если, например, 1 = 1500, а!» 1000, то величину прооксидантной активности (ПОА) ве1 .щества определяют по формуле (!

Пример 2 (конкретное осуществление способа). Проведено определение прооксидантной активности ряда прооксидантов.

Липидорастворимый прооксидант — эргокальциферол, растворяли в этаноле перед введением в модельную систему, а водорастворимые проксиданты -FeS04 7НгО (,(ионы двухвалентного железа), адренохром и азид натрия — в фосфатном буфере. Данные определения ПОА этих веществ пред, ставлены ы в таблице.

Ход осуществления работы по предлагаемому способу занимает 5 — 10 мин, что дает выигрыш во времени по сравнению с известным способом и ближайшим аналогом в 5 — 7 раз.

Предлагаемый способ позволяет определить проокислительную активность не только водорастворимых, но и липидорастворимых прооксидантов, 5 Предлагаемый способ обеспечивает высокую чувствительность, хорошую воспроизводимость, а также быстр и прост в осуществлении.

10 Способ может быть использован как в процессе фармакологии, так и в научных медицинских и биохимических исследованиях.

Способ определения проокислительной активности химических веществ путем введения исследуемого вещества в модельную

20 систему, содержащую субстрат и инициатор свободнорадикального окисления с последующей регистрацией хемилюминесценции, отл и ч а ю щи йс я тем, что,с целью ускорения способа, в качестве субстрата ис25 пользуют олеиновую кислоту в концентрации 6 мг/мл в этанолфосфатном буфере, в качестве инициатора — 1,2 -ный раствор перекиси водорода, а прооксидантную активность определяют по нарастанию вели30 чины светосуммы быстрой вспышки хемилюминесценции после добавления исследуемого вещества.