Способ получения пептона

 

Изобретение относится к микробиологической промышленности. 3 именно к способам получения пептоне с помощью лротеиназ микробного Г|рии,.хс:«ления. Цель изобретения - ускорение, удешевпение процесса и повышение выхода полевого продукта. Способ получения пеп.пча предусмчтривает ферменчативный гидролиз исходного сыр) - жмь... э чашечной ткани поел -- извлечения аденозинтрифосфорной кислпгы термическую инаюивэцию ферментэ, отделение нечрогидролизованного остатка и распы/штепьнуо пушку целевого продукта, прч 7GN к , чипе -ырье предварительно иэме/.ьчз vT Ј Ферментативный гидролиа псоьодчг пк ло уРти/.ином при рН 7-8 и OTHoiifHHH tJCi JOHTd к субстрату 20-40 ЛЬ/ЮО г . ч. причем ДОРОД НИР pr-i ..ji.rvi- -чэ ог,щес --в/1яют , ipr тм аммну чс 6л

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (я)ю С 12 N 1/20

ГОСУДАРСТВЕН1ЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИХНЕТЕ ПЬС ГBY (21) 4412519/13 (22) 18.04.88 (46) 07.09,91. Бюл. М 33 (71) Институт микробиологии и вирусологии им. Д,K. Заболотного (72) А.В. Зинченко, Н.В. Колтукова, A,А, Бондарчук, B.Ã. Валащук и Т.Л. Заворотная (53) 576.8.083.1(088.8) (56) Авторское свидетельство СССР

N 1386654, кл. С 12 И 1/20. 1988. (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПЕПТОНА (57) Изобретение относится к микробиологической промышленности.: именно к cr особам получения пеп;она с помощью протеиназ микробного рои.;хождения, Изобретение относится к микробиологической промышленности. а именно к способам получения пептона с помощью протеиназ микробного происхождения.

Црль изобретения — ускорение, удешевление процесса и повышение выхода целевого продукта.

Способ осуществляют следующим образом.

Для приготовления пеп гона жмых мышечной ткани после эксракции аденоэинтрифосфорной кислоты (АТФ) высушивают и измельчают до порошкообразного состояния, суспендируют в воде. доводя рН до оптимального значения.

В качестве протеолитического фермента предлагается нейтральная протеинаэа

ВасИиз subtllls (протосубтилин). Фермент характеризуется высокой скоростью гидролиза трудноперевариваемых белков (зла„, SU„„1675326 А1

Цель изобретения — ускорение, удешевление процесса и повышение выхода i„eëeânão прод- кта. Способ получения nen,пча предусматривает фермеюативный гидролиз исход;;го сыр я — жмь:,:а м шс- loki ткани посл .. извлечения ад :ноэинтрифосфорной кислггы термическую инак ивэц-,ю ферментэ, отделение HU< рогидролизоканного остатка и распылиткяьну о гл w;!y целевого прод кта, при вас,м,;,. гансе .ырье предварительно измельчэ;т а ферментативный гидролиэ поокодяг n„, 1. УГтилином при рН 7-8 и отно ueн.1и 1 с . ;HTd к СУбстрату

20-4Р ПЕ/1И, <.Чя из Р- > ч. причем довод ние рН:,, с,оп -is . щкс . Яляют рр,, рп - л аммиа,.„, ., 5л стина и коллагена). рН-оптимум действия

7,0.

Для создания оптимальнь.х значений рН в реакционной смеси используют

25 -ный раствор аммиака, что исключает в дальнв",яем процесс нейтрал«эации гидрол лэа и не оказывает влияния на содержание золы D готовом препа-ате.

Подбор фермент-субс оатных соотношений и условий гидролиза проводят слеДующим образом.

Для ускорения npoueñса гидролиза

;кмыха проводят nроверку влияния темперагурь; на время достижения гребуемого состава гидролиза. Повышение температуры инкубационной смеси до 50 С не приводит к повышению скорости гидрояиэа, а, наоборот, прйводит к быстрой термаинактивации фермер-оа и некоторому замедлению процесса. Поэтому оптимальной температурой гидролиза считают 37+ С. Проведение

1675326 гидролиза при температуре ниже оптимальной нецелесообразно, т.е. приводит к значительному снижению скорости реакции.

Для определения оптимального фермент-субстратного соотношения проводят гидролиз суспензии измельченного жмыха в концентрации 2-20 при количестве фермента 10-40 ПЕ/100 г субстрата. Продолжительность гидролиза составляет во всех случаях 24 ч. Полученные данные представлены в табл. 1.

В табл. 2 представлены качественные характеристики целевого продукта.

Для получения пептона из жмыха мышечной ткани с помощью бактериальных протеиназ целесообразно использовать концентрацию фермента 20-40 ПЕ/100 суспензии субстрата, Наилучшее качество гидролиээта достигается при концентрации субстрата 8127ь. Именно эти концентрации и используют для определенного времени гидролиза жмыха бактериальными протеинаэами.

Определение аминного азота и свободных аминокислот гидролиэатов показало, что после 12-16-часового гидролиза накопление аминного азота происходит преимущественно за счет свободных аминокислот, что ухудшает качество пептонэ, поэтому продолжительность гидролиза не должна превышать 8-10 ч.

Пример 1. Жмых мышечной ткани после извлечения АТФ высушивают и измельчают до порошкообразного состояния, 50 г сухого жмыха суспендируют в 450 мл воды, доводят рН раствора до 7,0 с помощью раствора аммиака, вносят нейтральную протеиназу В. subtllls в количестве 100 ед. (20 ПЕ на 100 мл 107ь-ной суспензии) протеолитической активности. Гидролиз проводят 8 ч на качалке (150 об/мин) при

37 С, После окончания гидролиза фермент инактивируют прогреванием при 100 С в течение 30 мин. Смесь охлаждают. центрифугируют при 5000 об/мин в течение

20 мин, супернатат фильтруют через 5-6слойный марлевый фильтр при 4 — 6 С для удаления жира. Фильтр диофилиэируют, полученный препарат пептона фасуют в стеклянную посуду.

Пример 2, 50 жмыха мышечной ткани, подготовленного по примеру 1, суспендируют в 450 мл воды, рН 7,0 доводят раствором аммиака. Вносят нейтральную протеинаэу В, subtllls в количестве 150 ед, протеолитической активности (30 ПЕ на

100 мл 10 -ной суспенэии), Гидролиз про5

55 водят 10 ч на качалке при 37 С, Полученный гидролизат обрабатывают по 1.

Пример 3. 60 г измельченного жмыха суспендируют в 450 мл воды, доводят рН раствора аммиаком, вносят нейтральную протеинаэу В, subtilis в количестве 150 ед протеолитической активности (30 ПЕ на

100 мл 10,ь ной суспгнзии). Гидролиз пооводят на качалке в течение 8 ч при 37"С.

Гидролиэат обрабатывают по примеру 1.

Пример 4, 8 кг измельченного жмыха суспендируют в 92 л воды, доводят рН раствором аммиака до 7,0. Вносят фермент в количестве 3000 ПЕ (20 1E»a 10G мл 18" ной суспензии). Гидролиэ проводят в реакторе при 37"С и работающей мешалк-. в течение 8 ч. После окончания гидролиза фермен- инактнвируют прогреванием при

100 С в течение получас.э. Смесь охлаж-1ают, сепарируют при 8000 o6/мин и вмгуши вают на рэспылительной сушке. г1репара-; пептона фасу от в стеклянную посуду.

П о и м е р 5. 26 кг измельченного жмыха суспендируют в 190 л воды, доводят рН до 7,0 и вносят нейтральную протеиназу

В. subtiiis в количестве 86400 ПЕ (40 ПЕ на

100 мл 12 Д-ной суспенэии). Гидоолиэ проводят в реа торе при описанных условиях в течение 10 ч. Дальнейшую обработку гидролиэата проводят по примеру 4.

Пример 6. 8 кг сухого жмыха суспендируют в 60 л воды доводят рН до 7,0 с помощью раствора аммиака и вносят

27200 ПЕ протеиназы В..-ubtilis (40 ПЕ н

100 мл 12 -ной суспензии1, Гидролиз проводят в реакторе при описанных условиях в течение 8 ч. Порошок пептона получают по схеме примера 4, Предлагаемый способ позволяет использовать отходы производства с получением стандарт ного продукта.

Формула изобретения

Способ получения пептснэ, предусматривающий ферментативный гидролиз иСходного сырья — жмыха мышечной ткани после извлечения аденозинтрифосфорной кислоты, термическую инактивацию фермента, отделение непрогидролизованного остатка и распылительную сушку целевого продукта, отл ича ю щийс я тем, что,с целью ускорения, удешевления процесса и повышения выхода целевого продукта, исходное сырье предварительно измельчают, и ферментативный гидролиз проводят протосубтилином при рН 7 — 8 и соотношении фермент-субстрат 20-40 ПЕ/100 мл суспенэии в течение 8-10 ч, причем доведение рН г1ри гидролиэе осуществляют 25ь-ным раствором аммиака, 1675326 .Таблица1

Продолжение табл.1

Таблица2

Редактор И.Дербак Техред М.Моргентал Корректор Э.Лончакова

Заказ 2976 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб„4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г, Ужгород, ул.Гагарина, 101