Способ приготовления диагностикума для экспресс-индикации вирусов

 

Изобретение относится к вирусологии, конкретно к способам идентификации и индикации вирусов. Цель изобретения - упрощение способа приготовления диагностикума для экспресс-индикации вирусов. Это достигается использованием в качестве твердотельного носителя на основе микроорганизма хламидоспор Sorosporium relllanum. Сенсибилизация их гипериммунными сыворотками позволяет осуществлять индикацию и идентификацию знтерои ротавирусов в реакции агглютинации. 1 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (я)ю С 12 N 7/00

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4761678/13 (22) 22,11,89 (46) 30.10.91. Бюл. ¹ 40 (71) Молдавский научно-исследовательский институт профилактической и клинической медицины (72) К.И.Спыну, Т,П.Грушко, С.С.Кострица, В.П.Вуткарев и С.А.Филипова (53) 616 — 07 (088.8) (56) Авторское свидетельство СССР

¹ 1323960, кл, С 12 N 7/00, 1987.

Спыну К.И., Буздуган Г.И. Опыт использования стафилококкового реагента, содержащего белок А, в реакции коагглютинации для идентификации энтеровирусов. — Вопр. вирусологии, 1987, ¹ 5, с. 595 — 597.

Изобретение относится к вирусологии, конкретно к способам идентификации и индикации вирусов.

Цель изобретения — упрощение способа приготовления диагностикума для экспрессиндикации вирусов.

Пример 1. В качестве реагента используют пылевидную черную массу головни кукурузы (хламидоспоры гриба Sorosporlum

rellianum). Технология изготовления предлагаемого диагностикума заключается в следующем.

Отвешивают 90,0 -0,5 мкг пылевидной черной массы головни кукурузы и два-три раза отмывают в 0,01 М фосфатно-солевом буфере (ФСБ). Эти и все последующие процедуры отмывания осуществляют путем осаждения хламидоспоровых частиц при 4000 об/мин в течение 10 мин и ресус„„. >Ц„„1687611 А1 (54) СПОСОБ ПРИГОТОВЛЕНИЯ ДИАГНОСТИКУМА ДЛЯ ЭКСПРЕСС-ИНДИКАЦИИ

ВИРУСОВ (57) Изобретение относится к вирусологии, конкретно к способам идентификации и индикации вирусов. Цель изобретения— упрощение способа приготовления диагностикума для экспресс-индикации вирусов. Это достигается использованием в качестве твердотельного носителя на основв микроорганизма хламидоспор

Sorosporium rellianum. Сенсибилизация их гипериммунными сыворотками позволяет осуществлять индикацию и идентификацию антеро- и ротавирусов в реакции агглютинации. 1 табл. пендирования осадка в ФСБ, Затем взвесь головни фиксируют раствором формальдегида в концентрации 1,5 в течение 1,5 ч.

Фиксацию проводят при постоянном перемешивании. После фиксации суспенэию О© хламидоспор четыре раза отмывают в ФСБ 4 от формальдегида. При необходимости дли- 01 тельного хранения (до 6 мес) взвесь хлами- ь доспор головни добавляют в мертиолят или а аэид натрия в конечной концентрации

1:1000-1:10000.

После процедуры фиксации (или коисервации) осуществляют сенсибилизацию

Sorosporlum relllanum гипериммунной или диагностическими коммерческими сыворотками против знтеровирусов. Для этого к 0,3 мл иммунной сыворотки против вирусов, разведенной 1:100 и более (в зависимости от исходного титра), добавляют 1,0 мл 10 1687611 ной взвеси хламидоспор. Смесь инкубируют в течение 1 ч при 37" С, тщательно перемешивая, По окончании процесса к содержимому флакона добавляют 5,0 мл 0,01 М ФСБ и переносят в центрифужный стакан. После 5 однократного отмывания в ФСБ и оса>кдения центрифугированием при 4000 об/мин в течение 10 мин к осадку добавляют 10,0 мл

0,01 М ФСБ с 0,05 -ным твином.

Приготовленный по указанной техноло- 10 гии диагностикум готов для использования в реакции агглютинации.

Пример 2. Осуществляют экспрессидентификацию 41 изолятов энтеровирусов, выделенных от больных детей 15 серозным менингитом. В качестве реагента используют пылевидную черную массу хламидоспор Sorosporium retllanum. Диагностикум для экспресс-индикации вирусов готовят аналогично описанному, 20

На предметное стекло (на белом фоне) стерильной микропипеткой наносят 1 каплю диагностикума и каплю ФСБ (для контроля штаммов на спонтанную агглютинацию).

Затем микропипеткой берут исследуемый 25 изолят и соединяют с диагностикумом. Покачивая стекло, наблюдают наступающую агглютинацию, Реакцию коагглютинации (РК) учитывают в течение 30 с — 2 мин. Специфичность РК контролируют в реакциях между 30

Sorosporlum rellI3inum, сенсибилизирован-. ной типовыми иммунными сыворотками и их смесями, и гомологичными, гетерологич-. ными стандартными штаммами вирусов

ECHO 1-6, Коксаки А и В и т,п, Результаты 35

PK учитывают по 4-крестовой шкале:

{+++ ) — полная коагглютинация, резко положительная; (+++ — ) — хорошо выраженная коагглютинация, положительная; 40 (++ —.— ) — неполная коагглютинация, слабоположительная; (+ — — — ) — еле заметная коагглютинация, слабоположительная; (- — — -) — отсутствие коагглютинации, 45 отрицательная.

Заключение о принадлежности штамма делают на основании положительной реакции не менее чем на +++ при наличии указанных контролей, 50

Идентификацию изолятов, выделенных из материала (фекалии, носоглоточные смывы, ликвор) от больных серозным менингитом в реакции коагглютинации, проводят в два этапа. На первом этапе используют

Sorosporum reilianum, сенсибилизированную смесями иммунных сывороток к энтеровирусам, а на втором — реагент, обработанный типоспецифическими сыворотками. Результаты идентификации на первом этапе показывают, что в 35 (85,4 ) и 6 (14,6 ) случаев изоляты относились к вирусам ECHO 1 — 6 и Коксаки В 1-6. Окончательная идентификация энтеровирусов (на втором этапе) в реакции коагглютинации показывают, что вирусы ECHO 1 — 6 распределились следующим образом: ECHO 1 — 2;

ECHO 2 — 3; ECHO 3 — 1; ECHO 5 — 6 и ЕСНО

6-23 штамма. Вирусы Коксаки В 1-6 распределились следующим образом; Коксаки В

1 — 3; В 2 — 2 и В 6 — 1 штамм. Подобные результаты получены при использовании традиционного метода, т,е, стафилококкового реагента из штамма Со Wan 1. Результаты окончательной идентификации изолятов следующие: Коксаки В 1-3; В 2-1 и В 6 — 2 штамма; ECHO 1 — 2; ECHO 1 — 2; ECHO 2 — 4;

ECHO 5 — 7 и ECHO 6 — 21 штамм. Процент совпадения результатов, определенных известным и предлагаемым способами, составил 95,8 .

Пример 3. Осуществляют выявление ротавирусных антигенов в фекальных экстрактах больных острым гастроэнтеритом, а также в образцах сточных вод и воды открытых водоемов. Анализ проводят по изложенной методике, Результаты показаны в таблице.

Проводимые сравнительные исследования показывают, что предлагаемый способ приготовления диагностикума для экспресс-анализа антигенов не уступает по чувствительности и специфичности известному способу, Формула изобретения

Способ приготовления диагностикума для экспресс-индикации вирусов, включающий коньюгацию антител с твердотельным носителем, приготовленным на основе клеток микроорганизма, отличающийся тем, что, с целью упрощения способа, в качестве твердотельного носителя используют хламидоспоры Sorosporlum rellianum.

1687611

Сравнение чувствительности и специфичности определения ротавирусного антигена известным и предлагаемым способами в реакции коагглютинации

Составитель С. Светлышев

Техред M.Ìîðãåíòàë Корректор Т. Палий

Редактор М. Петрова

Заказ 3678 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101

П р и м е ч а н и е .Чувствительность = (PKSR и PKSt положительные/PKSt положительные) х х 100; специфичность = (PKSR и PKSt отрицательные/PKSt отрицательные) х 100; совпадение = ((PKSR и PKSt положительные) + (PKSR и PKSt отрицательные)/(PKSR и PKSt положительные+ PKSt отрицательные)) х 100.