Способ выявления сенсибилизации к смешанной растительной пыли джута, льна и кенафа

 

Изобретение относится к медицине и используется в качестве лабораторного скрининг-теста для выявления сенсибилизации к смешанной растительной пыли джута , льна и кенафа у рабочих текстильного производства, в том числе у больных пылевыми бронхолегочными заболеваниями. Цель изобретения - повышение точности ускорения способа и уменьшение его травматичности. Для выявления сенсибилизации у больного берут кровь из пальца. Добавляют 0,05 мл 0,1 % нитросинего тетразолия и 0,05 мл фосфатного буфера, в котором предварительно разводят аллерген смешанной растительной пыли в соотношении 1:5. Реагирующую систему инкубируют. Готовят мазок, добавляют 0,25%-ный раствор сафранина, Мазок высушивают; фиксируют спиртом и микроскопируют. Просчитывают нейтрофилы, содержащие в цитоплазме гранулы формазана. О наличии сенсибилизации свидетельствует количество клеток с гранулами формазана 26% и более. 2 табл. оо С

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

„„5U 1691740 А1 (я)э G 01 N ЗЗ/48, А 61 В 5/00

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ а;.-, : .. ..:,,.„,, К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ та, льна и кенафа у рабочих текстильного производства, в том числе у больных пылевыми бронхолегочными заболеваниями, Цель изобретения — повышение точности ускорения способа и уменьшение его травматичности. Для выявления сенсибилизации у больного берут кровь из пальца, Добавляют 0,05 мл 0,1% нитросинего тетразолия и 0,05 мл фосфатного буфера, s котором предварительно разводят аллерген смешанной растительной пыли в соотношении 1:5, Реагирующую систему инкубируют, Готовят мазок, добавляют 0,25%-ный раствор сафранина, Мазок высушивают, фик(54) СПОСОБ ВЫЯВЛЕНИЯ СЕНСИБИЛИЗАЦИИ К СМЕШАННОЙ РАСТИТЕЛЬНОЙ

ПЫЛИ ДЖУТА, ЛЬНА И КЕНАФА (57) Изобретение относится к медицине и используется в качестве лабораторного скрининг-теста для выявления сенсибилизации к смешанной растительной пыли джусируют спиртом и микроскопируют

Просчитывают нейтрофилы, содержащие в цитоплазме гранулы формазана. О наличии сенсибилизации свидетельствует количество клеток с гранулами формазана 26% и более. 2 табл. (21) 4675777/14 (22) 21.04.89 (46) 15.11.91. Бюл. N 42 (71) Одесский медицинский институт им.Н.И.Пирогова и Научно-исследовательский институт гигиены труда и профессиональных заболеваний АМН СССР (72) Л.П.Зарицкая, Л.А.Дуева и А.А.Нанечкин (53) 612.015 (088.8) (56) Гигиена труда и профессиональных заболеваний, 1979, N 5, с.20 — 23.

Изобретение относится к медицине и может быть использовано в качестве лабораторного скрининг-теста для выявления сенсибилиэации к смешанной растительной пыли джута, льна и кенафа у рабочих текстильного производства, в том числе у больных пылевыми бронхолегочными заболеваниями.

Цель изобретения — повышение точности, ускорение способа и уменьшение его травматичности.

Способ осуществляют следующим образом.

Кровь забирают из пальца в количестве 0,1 мл в пробирку с 0,025 мл гепарина (20 Ед/мл), добавляют 0,05 мл 0,1% раствора нитросинего тетразолия и 0,05 мл фосфатного буфера, в котором предварительно разводят аллерген смешанной растительной пыли в соотношении 1:5, Реагирующую систему инкубируют во влажной среде при

37 С и при комнатной температуре по

15 мин при периодическом перемешивании путем продувания воздуха. Готовят мазок, докрашивают его 0,25%-ным раствором сафранина, высушивают на воздухе, фиксируют абсолютным зтиловым спиртом и микроскопируют с иммерсией. Просчитывают 100 нейтрофилов, учитывая среди них клетки с содержанием в цитоплазме гранул формазана. Результат оценивают как положительный, т,е, свидетельствующий о наличии сенсибилиэации, при количестве клеток с гранулами формаэана 26% и более.

3 1691740 4

Пример 1. Результаты обследования лиц контрольной группы (доноров, не работающих в текстильном производстве), больных пылевыми бронхолегочными заболеваниями и практически здоровых рабочих текстильного производства, подвергающихся ингаляционному воздействи.а смешанной растительной пыли (всего 96 человек).

Как видно из среднегрупповых данных, у больных бронхолегочными заболеваниями и у практически здоровых рабочих текстильного производства уже в НСТ-тесте выявляется повышенная функциональная активность нейтрофилов по сравнению с контролем (18,0 +-1,4% и 21,6 1% клеток с гранулами формазана при 9,5+0,4% в контрольной группе), что однако может быть связано как с сенсибилизирующим, так и с раздражающим действием производственной пыли. Об определенном уровне раздражающего действия свидетельствуют, в частности, результаты добавления in vitro аллергена по заявленному способу к интактным клеткам доноров (контрольная группа), у которых выявлена стимуляция нейтрофилов на уровне 17,4 + 0,7% (от

15,3% до 20,5%), В случае развития сенсибилизации к смешанной растительной пыли у больных лиц и у практически здоровых рабочих эффект специфической стимуляции нейтрофилов аллергеном in vitro по заявленному способу высоко достоверно (Р< 0,001) превышает показатели раздражающего действия аллергена на интактные клетки: 36,3 2,2% и 39,4+ 1,3% нейтрофилов с гранулами формазана при 17,4 + 0,7% в контрольной группе. Проверка индивидуальных значений по группе доноров показала, что колебания формаэан-положительных клеток при добавлении аллергена составляют в норме от 14 до 22%, т.е. Х=17,4 + 0,7%;

a=3,98, Г+- 2 о =25,36%. Т,е. диагностический титр для оценки положительной реакции соответствует 26% (и выше), Поскольку эффект специфической стимуляции нейтрофилов у всех сенсибилизированных лиц превышает 25%, результат расценивают как положительный, т.е. свидетельствующий о наличии сенсибилиэации, при 26% и более нейтрофилов с цитоплазматическими гранулами формазана, Это соответствует 25%."çàïàñà" от максимального уровня неспецифической реакции раздражения интактных нейтрофилов при добавлении аллергена.

35.

I

Сопоставление частоты выявления сенсибилизации по заявленному способу и методом кожных скарификационных проб свидетельствуют не только о совпадении результатов аллергологического тестирс вания больных пылевыми бранхолегочными заболеваниями, Но и о существенном преимуществе заявленного способа о случаях сомнительных и отрицательных результатов кожных проб, что проявляется наиболее часто при обследовании еще практически здоровых рабочих, Это подтверждают среднегрупповые данные частоты выявления сенсибилизации, приведенные в примере 1, и следующие индивидуальные показатели.

Пример 2. Индивидуальные примеры по сопоставлению результатов аллергологического тестирования больных бронхолегочными заболеваниями от воздействия смешанной растительной пыли и лиц контрольной группы по заявленному способу (in

vitro) и методом кожных скарификационных проб (in vivo), Таким образом, заявленный способ характеризуется повышением точности, так как позволяет выявлять сенсибилизацию при отрицательных и сомнительных результатах кожных скарификационных проб, Способ выполняется в течение 50 мин, в то время как кожные скарификационные пробы требуют высокой квалификации и учета результатов только через 24 ч; исключается применение высококачественного импортного метилового зеленого, который заменен на сафранин (0,25%-ный раствор), Способ является безопасным для организма и может быть рекомендован в качестве скрининг-теста для массовых медицинских осмотров рабочих текстильного n,ioèçâoäства с целью формирования групп риска развития пылевых бронхолегочных заболеваний и диагностики начальных стадий развития патологии. В клинике профессиональных заболеваний при обследовании больных пылевыми бронхолегочными заболеваниями от воздействия смешанной растительной пыли аллергологическое тестирование in vitro по заявленному способу может полностью заменить постановку кожных скарификационных проб.

Формула изобретения

Способ выявления сенсибилизации к смешаннной растительной пыли джута, льна и кенафа, включающий клиническое .! исследование, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа, его ускорения и уменьшения травматичности, у пациента берут кровь из пальца, добавляют

1691740

Таблица 1

Группы обследованных

Число нулами вленнопособу

27,0

Достоверность различия по сравнению с контрольной группой при Р < 0,001.

Таблица 2

Кожными пробами со

Ф.И.О, % нейтрофилов с гран лами а интенсивность реакций

Больные рабочие:

1. Кослакова Е,М.

2. Колесник А.Д.

3. Балан А,К.

4. Брускова А,И.

5. Тикунова Л,К.

Доноры (контрольная группа);

6. Цымбалист N.A.

40 сенсибилизирована

30 сенсибилизирована

27 сенсибилизирована

30 сенсибилизирована

50 сенсибилизирована

+++

++

0

10 отсутствие сенсибилизации

17 отсутствие сенсибилизации

7. Кушакова Т,И.

0,05 мл 0,1% нитросинеготетразолия, 0 05 мл фосфатного буфера, в котором предварительно разводят аллерген смешанной растительной пыли в соотношении 1;5, инкубируют, готовят мазок, добавляют 0,25%Доноры (контрольная группа)

Больные бронхолегочными пылевыми заболеваниями: сенсибилизированные несенсибилизированные

Рабочие текстильного производст ва сенсибилизированные несенсибилизированные ный раствор сафранина, высушивают фиксируют спиртом, микроскопируют и по образованию гранул формаэона в цитоплазме

26% и более нейтрофилов выявляют сенси5 билиэацию к аллергену,