Способ определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам

 

Изобретение относится к медицине, а именно к методам экспресс-определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам . Цель изобретения - ускорение способа определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам - достигается тем, что пробы, содержащиегвзвеси микроорганизмов с различными концентрациями антибиотиков, инкубируют в течение 20-30 мин, после чего в течение 10-20 с облучают лазером непрерывного излучения с мощностью 30-50 мВт и лучистой экспозицией 3.107 - 8107 Дж/м2, под углом 7-11° относительно оси возбуждающего луча регистрируют полуширину спектра рассеяния света, определяют изменения полуширины спектра рассеяния света. 2 табл

СО 03 СОВЕТСКИХ

СОЦИ4ЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

ГОСУД4РСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

> " т -,<т:;..

- Д- 1 о100%

Го (21) 4715643/14 (22) 05,07.89 (46) 15.11,91. Бюл. Nã 42 (72) А. Н. Тулупов, В. П. Никитин, М. С. Поляк, А.Ç,Фотиади, Л, И. Фатеева и В. И.

Попов (53) 612.015(088,8) (56) Авторское свидетельство СССР йг 1536819, кл. А 61 В 5/05, 1988. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ МИКРООРГАНИЗМОВ К АНТИБИОТИКАММ (57) Изобретение относится к медицине, а именно к методам экспресс-определения

Изобретение относится к медицине, а именно к методам экспресс-определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам, что дает возможность быстрого определения эффективной дозы антибиотиков для проведения больным с заболеваниями инфекционной природы ранней, целенаправленной антибактериальной терапии.

Цель изобретения — ускорение способа определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам.

Для достижения цели пробы, содержащие взвеси микроорганизмов с различными концентрациями . антибиотиков, инкубируют в течение 20-30 мин, после чего в течение 10-20 с облучают лазером непрерывного излучения с мощностью 30-50 мВт и лучистой экспозицией 3 10 — 8 10 Дж/м, 7 7 под углом 7-11 относительно оси возбуждающего луча регистрируют полуширину спектра рассеянного света, определяют

„„5Ц „„1690677 А1 (я)5 А 61 В 5/05 //6 01 М 33/483 чувствительности микроорганизмов к антибиотикам. Цель изобретения — ускорение способа определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам — достигается тем, что пробы, содержащие-взвеси. микроорганизмов с различными концентрациями антибиотиков, инкубируют в течение . 20-30 мин, после чего в течение 10-20 с облучают лазером непрерывного излучения с мощностью 30-50 мВт и лучистой экспозицией 3 10 — 8 10 Джlм, под углом 7-11 относительно оси возбуждающего луча регистрируют полуширину спектра рассеяния света, определяют изменения полуширины спектра рассеяния света, 2 табл..изменения полуширины спектра рассеянного света по формуле где Го и Гi — полуширина спектра рассеянного света соответственно до и после инкубации, регистрируют минимально и подавляющую концентрацию антибиотика в пробе, для которой Л Г составляет более

30-90%.

Пример 1. Для определения чувствительности культуры золотистого стафилококка (штамм М 340) к антибиотику-аминогликозиду неомицину готовили серию двукратных разведений этого антибиотика в мясопептонном бульоне, разлитом по пробиркам в обьзме 2 мл. Диапазон конечных концентраций неомицина составлял 0,25 — 128 мкг/мл. Взвесь культуры стафилококка готовили в изотоническом растворе хлорида натрия с содеожа1690677 та бли ца 1

Значение параметров по способу

Параметр прототип 1предлагаемый ч

Иощность гелий-неонового saaepa, ИВт

Лучистая экспозиция, дж/мз

Угол регистрации рассеянного света относительно оси луча

Время инкубации культур с антибиотиками

МПК антибиотика, мкгlмл

Время облучения и ресистрации параметров рассеянного света

Прирост интенсивности рассеянного света после инкубации в культуре с

МПК антибиотика

Прирост полуширины спектра рассеянного светал " после инкубации в культуре с ИПК антибиотика

Конечная концентрация микробов, клет/л

30>0

З 10

1,0

0,5 ° 15

20 мин

0,25

Зч

0,25

10 с

1 мин

303

6.108

В.102 нием 1 млрд микробных тел по стандарту мутности 1,0. Далее микробную взвесь тем же раствором разводили в 100 раз, т,е. до концентрации бактериальных клеток до 10 млн/мл.

В каждую пробирку с антибиотиком вносили по 0,1 мл культуры (по 500 тыс. микробных тел на 1 мл мясопептонного бульона). Контролями служили пробирки с питательной средой и антибиотиком в различных концентрациях (контроль сред) и пробирка с засеянной питательной средой без антибиотика (контроль роста культуры).

Контрольные и опытные пробирки помещали в термостат при 37 С и инкубировали в течение 20 мин. До и после инкубации пробирки подвергали облучению при помощи

" гелий-неонового лазера ЛГ-38 (параметры см. в табл, 1). Параметры рассеянного света (табл, 1) регистрировали с использованием фотоэлектронного умножителя ФЭУ-79 и. анализатора спектра СКА-72 с полосой обзора 50 Гц. Чувствительность устройства составляла 4-6%.

После регистрации и определения параметров рассеянного света рассчитывают . прирост его интенсивности (Л1) в % относительно исходного уровня, а также прирост полуширины (Л Г) в /-также относительно исходного уровня. В результате 24 опытов

Л! для пробирок с исследуемой культурой стафилококка с неомицином в концентрации 0,12 мкг/мл составила 46,2 +. 5,2%, 0,25 мкг/мл — 5,02,3%; 0,5 мкг/мл 2,1 + 0,3%; 1,0 мкг/мл-1,2 1.0,2% и т.д,Л Г соответственно составила при концентрации неомицина

0,12 мкг/мл 12,3 3,2%, 0,25 мкг/мл-ЗОТ4,2%;

0,5 мкг/мл-91,0 5,1%, Омкг/Më-96,2т4,8% и т,д. Для пробирок с контролем среды Л1и и

ЛГ составляла 0%, для пробирок с контролем роста культуры — соответственно 72.32

0,9. Граница видимого роста в опыте отчетливо появилась только через 48 ч и нахо5 дилась на уровне пробирок с неомицийом в концентрации 0,25 мкг/мл. Таким образом, МПК неомицина для штамма N. 340 золотистого стафилококка составляла 0,25 мкг/мл.

В пробах с Л Г от 30% и не менее содер10 жа/1ась концентрация антибиотика менее

МПК, в пробах с Л Г от 91 % и более-концентрация антибиотика более МПК.

Пример 2, Определение чувствительности золотистого стафилококка (штамм N-

15 340) к тетрациклина гидрохлориду проводилась аналогично описанному в примере 1.

В пробах культур с Л Г менее 30% (729,5%) концентрация тетрациклина меньше

МПК, в пробах с Л Г больше 90% (91-112%)

20 — выше МПК, Формула изобретения

Способ определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам путем инкубации взвеси микроорганизмов в жидкой

25 питательной среде с различными концентрациями антибиотиков, облучения лазером непрерывного излучения и регистрации параметра рассеянного света с последующим определением минимально подавляющей

ЗО концентрации, от л и ч а ю щи и с я тем, что, с целью ускорения способа, инкубацию проводят в течение 20-30 мин, облучают лазером с мощностью 30-50 мВт и лучистой экспозицией 3 10 — 8 10 Джlм, под углом

35 7-11 относительно оси возбуждающего луча, и рассчитывают полуширину спектра рассеянного света и при изменении ее отно .ительно контроля на 30-90% регистрируют ,минимально подавляющую концентрацию.

1690677

Таблица2

,Значение параметров по способу

Па раметр

J прототип, предлагаемый

Мощность. гелий-неонового лазера, мВт

Лучистая экспозиция, Дж/м2

Время инкубации культур с антибиотиками

МПК антибиотика, мкг/мл

Время облучения и регистрации параметров рассеянного света

Прирост интенсивности рассеянного света 4 после инкубации в культуре с МПК антибиотика

Прирост полуширины спектра рассеянного света 4 Г после инкубации в культуре с МПК антибиотика

Конечная концентрация микробов, клет/л

50,0

8 10

10,0

1,5 10

4 ч

0,12

30 мин

0,12

3. мин

20 с

1,0ь

903

6 ° 10

4 ° 10

Составитель В.ЗолЬтов

Редактор В. Трубченко Техред М.Моргентал Корректор О,Кундрик

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул. Гагарина. 101

Заказ 3872 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб„4/5