Способ получения человеческого лейкоцитарного интерферона

 

Изобретение относится к медицине и касается способа получения человеческого лейкоцитарного интерферона. Целью изобретения является снижение анафилактогенности. В способе получения интерферона используют в качестве индуктора вирус болезни Ньюкастла, очищенный и концентрированный микрофильтрацией на мембранах с диаметром пор 0,8 мкм и затем ультрафильтрацией-диафильтрацией на мембранах с порогом отсекания 100 или 300 кД. 2 табл.

Изобретение относится к медицине и касается способа получения человеческого лейкоцитарного интерферона. Целью изобретения является снижение анафилактогенности. Способ осуществляется следующим образом. С целью освобождения от грубых примесей содержащую вирус болезни Ньюкастла аллантоисную жидкость в объеме 10 л осветляют на микрофильтрационных мембранах с рабочей площадью 0,2 м² МФА-А N 2 с диаметром пор 0,5 мкм или миллипоровских типа AAWP с диаметром пор 0,8 мкм. Выбор именно этих мембран определен отсутствием сорбции на них вируса. Мембраны заправлены в плоскорамную разделительную установку ПРУ (кооператив "Биотехстрой", НПО "Иммунопрепарат""). Микрофильтрацию проводят при давлении на мембранах 0,5-0,7 кг·c/см². Производительность микрофильтрационных мембран 12 л/ч. Осветленная вируссодержащая аллантоисная жидкость с помощью насоса подается на ультрафильтрационные мембраны РТНК с рабочей площадью 0,47 м² и порогом отсекания 100 кД или на мембраны биопор АМ с порогом отсекания 300 кД, заправленные в плоскорамную разделительную установку. Ультрафильтрационную проводят при давлении 0,5-0,7 кг/см². Вирус концентрируют до желаемого объема, затем проводят очистку в режиме диафильтрации при постоянном объеме вирусного концентрата, используя 15-20 объемов 0,1 М натрий-фосфатного буфера, содержащего 0,15 моль хлористого натрия (pH 7,4-7,6). Фильтрат отбрасывают, а очищенный концентрат проверяют на степень очистки и биологические свойства. Как видно из табл. 1, геммагглютинирующая активность в вирусном концентрате возрастает по сравнению с исходным вирусом в среднем в 6 раз, содержание овальбумина снижается на 97% с учетом кратности концентрации. Выделенные из донорской крови лейкоциты взвешивают в среде N 199. Очищенный вирус-индуктор вводят в среду с лейкоцитами и инкубируют при 37^оС в течение 1-3 ч. Затем лейкоциты отделяют центрифугированием при 1200 g в течение 15 мин. Осадок лейкоцитов ресуспендируют в свежей порции питательной среды. Через 18-20 ч инкубации при 37^оС целевой продукт отделяют от лейкоцитов центрифугированием. Как видно из табл. 2, использование в процессе получения интерферона очищенного аллантоисного вирусного индуктора позволяет получать препарат интерферона, не содержащий овальбумин по данным высокочувствительного метода ИФА.

Формула изобретения

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЧЕЛОВЕЧЕСКОГО ЛЕЙКОЦИТАРНОГО ИНТЕРФЕРОНА, включающий выделение лейкоцитов, индукцию аллантоисным вирусом болезни Ньюкастла с последующим отделением лейкоцитов, их суспендирование в культуральной среде и биосинтез интерферона, отличающийся тем, что с целью снижения анафилактогенности, индукцию проводят вирусом болезни Ньюкастла, осветленным микрофильтрацией на мембранах с диаметром пор 0,8 мкм и затем концентрированным и очищенным ультрафильтрацией-диафильтрацией на мембранах с порогом отсекания 100 или 300 кД.

РИСУНКИ

Рисунок 1, Рисунок 2