Способ определения эффективности лечения ревматоидного артрита у детей

 

Изобретение относится к медицине, а именно к ревматологии, и может быть использовано для определения эффективности лечения ревматоидного артрита у детей. Цель изобретения - повышение точности способа. Цель достигается за счет дополнительного исследования а;|антитрипсина и неферментативного фибринолиза в плазме крови и определения соотношения этих показателей относительно здоровых детей. 1 табл.

ОООЗ СОВКТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИ)(РЕСПУБЛИН (l9) (tl) (я)я G 01 И 33/68

ГОСУДАРСТВЕННЫИ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕН ЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

/ (21) 4757516/14 (22) 09.11.89 (46) 15.02.92. Бюл. hL 6 (71) Казахский научно-исследовательский институт педиатрии (72) Е, С. Смирнова, Б. Х. Хабижанов и И. А.

Скоробогатова (53) 612.015(088.8) (56) Поражение сосудистой стенки и гемостаз, И-я Всесоюзная конференция (Минск, 1983),M., 1983, 241 — 243.

Изобретение относится к медицине, а именно педиатрии, точнее детской ревматологии, и может быть использовано для контроля эффективности лечения и прогнозирования течения ревматоидного артрита у детей.

Целью изобретения является повышение точности способа.

Для достижения цели в плазме крови больных детей дополнительно определяют а1-антитрипсин (а AT) неферментативный

:фибринолиз (НФ) после лечения, находят отношение этих показателей к аналогичным показателям у здоровых детей.

Способ осуществляется следующим образом.

У больных утром берут кровь для исследования в пробирки с 3,8 Д-ным раствором цитрата натрия в отношении 1:9 и определяю-т уровень а AT и НФ и высчитывают отношение этих показателей к норме.

Активность a> AT в плазме крови определя(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЭФФЕКТИВНОСТИ ЛЕЧЕНИЯ РЕ8МАТОИДНОГО АРТ»

РИТА У ДЕТЕЙ (57) Изобретение относится к медицйне, а именно к ревматологии, и может быть использовано для определения эффективности лечения ревматоидного артрита у детей, Цель изобретения — повышение точности способа. Цело достигается за счет дополнительного исследования а антитрипсина и неферментативного фибринолиза в плазме крови и определения соотношения этих показателей относительно здоровых детей. 1 табл. ли по Нивяровскому в модификации В.. Е.

Пасторовой.

Реактивы. 0,85,-ный раствор хлорис гого натрия: плазма человека (оксалатная или цитратная) дефибринированная. Для освобождения плазмы от фибриногена ее прогревают в течение 3 мин при 56 С, После этого быстро помещают в лед;

0,2%-ный раствор фибриногена Каунасского предприятия бакпрепаратов; плазминоген; плазмин, полученный активацией плазминогена препаратом стрептокиназы. Приготовление, 40 кг плазминогена растворяют в 10 мл физ. раствора, В раствор плазминогена добавляют 0,1 мл стрептокиназы, содержащей 500 ед,,и инкубируют в водяной бане при 37 С в течение 10 мин; тромбин без плазминогена (20 ед.в 1 мл)

Каунасского предприятия бакпрепаратов.

Определение медленно действующих антиплазмидов а1 AT. 0,2 мл разведенной

1712884

1:9 дефибринированной плазмы предварительно инкубируют с 0,2 мл плазмина при

37 С в течение 1 ч. Затем добавляют 0,2 мл

0,2;ь-ного раствора фибриногена и 0,1 мл тромбина. После образования сгустка отмечают время полного его лизиса, Полученное значение времени лиэиса сгустка характеризует суммарный уровень антиплаэминов— быстро и медленно действующих. Для расчета медленно действующих антиплазминов (a> АТ) из полученного значения времени лизиса вычитают время лиэиса сгустка, характеризующее содержащее Q2 макроглобулина (а МГ) для той же испытуемой плазмы, Получают время лизиса, характеризующее уровень a> AT. Уровень а1 AT в крови больного рассчитывают в процентном отношении от уровня этого антиплазмина в крови здорового донора, принимаемого за 100/. Например, время лизиса сгустка при определении щ Ml в крови больного 38 мин, время лиэиса сгуст. ка при определении суммарных антиплазминов равно 72 мин. Тогда, время лизиса, характеризующее только уровень ap AT будет 72 — 38=34 мин (у больного). Таким же образом определяют время лизиса, характеризующее уровень a> AT у здорового человека 25 мин, Расчет в процентах уровня

a> AT y больного производят по отношению к 100 g, уровню здорового.

Например 25 — 100

34 — x х = 136 /a> AT у больного

Определение неферментативной фибринолитической активности.

Реактивы; фибриноген бычий (Каунасского предприятия бакпрепаратов); бромбин без плаэминогена (Каунасского предприятия бакпрепаратов); трисоксиметиламинометан (реанол); соляная кислота 0,1 н, (фиксаналы); натрий лимоннокислый 3,80/-ный рас-. твор; монойодуксусная кислота (к, ч);

Е-аминокапроновая кислота (р-р E-AKK годен в течение 2 ч с момента приготовления); натрий хлористый 0,85$-ный раствор, Приготовление реактивов.

Трис-HCl-буфер, рН 7,35. Для приготовленияя этого буфера готовится раствор триса—

24,33 г + 1,0 л Н20 и 0,1 н, р-р HCI. Затем смешивается 425 мл.0,1 н.НО и 250 мл р-р триса. Полученный раствор доводят до 1 л водой. Проверяют рН на потенциометре, который должен быть 7,35. Этот буфер хранится в холодильнике в течение года, Если

40 образец плазмы делится на 2 части

Образец плазмы ,/

0,05 мл плазмы 0,05 мл плазмы

+ 0,05 мл фиэ. раствора 0,05 мл Š— АКК

4-6;(,-ный р-р в физ. растворе

Раствор Е-АКК должен быть свежеприготовленный. Образцы плазмы помещают в термостат при 37 С точно íà 10 мин, Чашка.

Петри делится на 2 части..На левую сторону чашки капаем автоматической микропипеткой 0,05 мл контрольной плазмы (плазмы + физ.раствор)., на правую сторону чашки0,05 мл плазмы с Е AKK(опытный образец)

Для каждого больного готовится два образца плазмы — опытный и контрольный. Чашки с образцами плазмы ставятся в термостат на 2 ч. Слева определяется суммарная фибринолитическая BKTHBHocTb, справа нефер10

35 появились хлопья, буфер нужно отфильтровать.

0,27ь-ный р-р фибриногена (20 мг фибриногена + 100 мл трис НС! буфер + 25 мл

085 $-ный р-р хлористого натрия 1. С учетом солей фибриногена навеску взвешивать 580

Р-р монойодуксусной кислоты (150 мг сухой кислоты +50,0 мл трис HCI буфера, рН

7,35)

Тромбин без плазминогена — 2 мг тромбина+ 1 мл физ, раствора, если активность тромбина 2000 ед. во флаконе, если активность 1000 ед., то навеска тромбина 4 мг, раствор тромбина готовится перед опытом.

К 100 мл раствора фибриногена добавля от 40 мл монойодуксусной кислоты, раствор выдерживается в термостате при 37 С

15 — 60 мин, но не более часа (монойодуксусная кислота блокирует XIII фактор).

Приготовление фибриновых пластин, В химическом стаканчике смешивают 5 мл раствора фибриногена с монойодуксусной кислотой, добавляют 0,1 мл раствора тромбина, смешивают и быстро выливают в чашку Петри, покачивая ее. Чашку ставят. на ровную поверхность стола, прикрывая крышкой, но не закрывают ее. Для полного застывания фибриногена чашка выдерживается 1 ч на столе, затем в крышку помещаются фильтровальная бумага, чашку закрывают и s таком виде она сохраняется в холодильнике при +4 С недели. Указанного количества фибриногена достаточно для приготовления 28 чашек.

Приготовление образца плазмы. Цитратную кровь, взятую в соотношении 1:9, центрифугируют при 3000 об/мин в течение

15 мин (бедная тромбоцитами плазма). Один

i 712884 ментативный фибринолиз. Через 2 ч чашки вынимают из термостата и измеряют в мм зоны лизиса по двум диаметрам. При перемножении диаметров получают площадь зонывмм.

Например, неферментативный фибринолиз ЭНФ равен 7 мм х 7 мм = 49 мм . В таблице представлены результаты исследований НФ и а1 AT у детей с ревматоидным артритом.

Таким образом, отношение а1 AT здорового и больного ревматоидным артритом с благоприятным течением заболевания должно быть в пределах 0,65 — 0,67„НФ в пределах 0,74-0,77. При неблагоприятном течении соответственно 0,40 — 0,42 и 0,88—

0,93.

Пример 1, Больная К-ва Б., 14 лет, Находилась в клинике института с 27 апреля

1988 по 28 июля 1988 года с диагнозом: ревматоидный артрит, преимущественно суставная форма, полиартрит, активность iи ст„серонегативный вариант, R-стадия-1.

Способность к самообслуживанию сохранена. Сопутствующий диагноз: хронический гастрит в фазе умеренного обострения.

При поступлении состояние больной тяжелое за счет. болевого суставного синдрома. Жалобы на скованность по утрам, ограничение движений, деформацию суставов. Заболела остро 20/l l — 88 r., когда появилась припухлость и болезненность правого коленного сустава. Лечилась у хирурга, но улучшения не было. Через три недели появились боли, припухлость и ограничение движений в левом коленном, лучезапястном и межфаланговых суставах рук.

Об-но: при поступлении состояние довольно тяжелое. Выражены симптомы общей интоксикации — вялость, утомляемость, общая слабость. Кожные покровы бледные, слизистые чистые, язык влажный, Со стороны костно-суставной системы — артралгия, дефигурация, ограничение движений, припухлость, повышение местной температуры над коленными, лучезапястными и межфаланговыми суставами кисти.

Данные в органах дыхания без особенностей. Границы сердца не увеличены. Тоны ритмичные, приглушены. Пульс 92 в мин.

Живот мягкий, печень у края реберной дуги, селезенка не польпируется. Анализ крови от 17/Н-88 г. — зр. 4,4 10 /л, Н В вЂ” 134 г/л, ц,п. — 0,9, ретикулоциты — 117 .,лейкоциты—

8,9 10 /л, зозинофилы — 1 jo, сег, 63Я„лим-. фоциты — 290, моноциты — 60/О, СОЭ вЂ” 46 мм/ч. Протеинограмма — общий белок-62,5 г/л, А-45,0 „Г-55,0 Я„сх1 -9,0%. а — 12 /, P — 15;, у — 19,0%, А:Г= 0,8, Са- 2,14.ммоль/л, К вЂ”. 5,8 ммоль-л, а-136 ммоль/л, холестерин — 1,17 ммоль/л, фосфор — 1,77 ммоль/л, АЛТ вЂ” 0,07 ммоль/л, ACT — 0,18 ммоль/л, билирубин — 12,0 ммоль-л. оста5 точный азот — 22,5 мг,мочевина — 4,1 ммоль/л, тимоловая проба — 1,5, коагулограмма — АКТ(аутокоагулограмма) на 6 мин—

19 с на 8 мин — 15 с, на 10 мин — 19 с, ABP — 78, АЧТ — 58, ПК - 71, TB — 20", фибри10 ноген — 2,20 г/л, ШХ ф-р — 250, AT-Ш—

И

141,5 ф>, лизис эуглобулиновых фракций—

300 мин. P. Ваалер-Роузе и латекс теста отрицательный.

ЗКГ- вертикальное направление элект15 рической оси сердца. Синусовая аритмия.

Признаки неполной блокады правой ножки пучка Гиса.

Больная получила лечение: преднизолон rio 50 мг с последующим снижением до

20 12,5 мг, купренил по 1 капсуле 2 раза, эритромицин, ампиокс, витамин B>g, нистатин, аскорбиновая кислота, оротат калия, аспаркам, индометацин, вит, А.

При исследовании фибринолиза и а1

25 антитрипсина отмечено: a> AT — 3007;, НФ—

16мм .

a> AT здорового 87,9

Отношение

a> AT больного 300

= 0,2

Отношение l,53

НФ больного средней тяжести. Жалобы на боли и деформацию в мелких суставах рук и ног. Болеет в течение 5 лет. Дважды находился в КазНИИ педиатрии йа лечении по поводу данного заболевания. Наследственность — у родственников со стороны матери имеются заболевания суставов (деформирующий 0стеоарт роз). т.е. первое отношение меньше 0,40, второе

35 отношение больше 0,93. В дальнейшем у этой больной отмечалось неблагоприятное течение болезни, что выражалось упорством признаков воспаления, прогрессированием суставных явлений, вовлечением в

40 процесс и других суставов.

Пример 2. Больной А-ов, 14 лет.

Находился в клинике КазНИИ педиатрии с

04.10.88 по 13.12.88 г. с диагнозом: ревма-, тоидный артрит, преимущественно сустав45 ная форма, полиартрит il.ñò. активности, медленно прогрессирующее течение, серо- негативный вариант., R стадия А ст., Фс нарушена 1 ст, Сопутствующий диагноз:

Хронический правосторонний мезотимпа- .

50 нит.

При поступлении состояние больного

1712884

НФ зд.

НФ б-го

Стат. показатели

-Q> АТ д а1 АТ6-го

НФ а AT

Труппа иследуемых детей, 87,9 -13,8

Контрольная группа

Моно-рлигоартрическая форма, благоприятное те- . чение

-"- неблагоприятное течение

Полиартри.., ческая форма, благоприятное течение

-"- неблагоприятное течение

Х « -м йб

24,5 й2,2

+-7

0,67

33,3 й2,9 и 10,2

< 0,02

26,3 -4,9

+99

>0,1

130,9 + 28,7

+ 6,68

< 0,001

210 +:20 й45

< 0,001

0,74

Х+м

+б

Р

Х+м

+б

0,.42

0,93

134,4 + 15,2

+ 42,5

< 0,02

31,8 + 5.9

13,3

>0,1

0,77

0,65

Х ì йб

27,8 й4,2

> 0,5 0,40

0,88

218,2 .47,5

<0,05

X+M

Об-но: при поступлении состояние средней тяжести, самочувствие заметно не страдает. Больной правильного телосложения. Кожные покровы сухие, чистые. Слизистые и зев умеренно гиперемированы. Со стороны органов дыхания патологии не выявлены, Тоны сердца ясные, в У точке систолический шум средней интенсивности, пульс удовлетворительного наполнения—

76 уд: мин, АД вЂ” 100/70 мм рт. ст. Органы . брюшной полости без особенностей.

Костно-мышечная система: отмечается деформация межфаланговых суставов рук.

Анализ крови на 10.10.88 r.: эр, 4,5 10 /л, Нв-142 г/л, ц.п. -0,9; Л -7,0 10 /л, эозинофилы — 4, с — 66, л — 22, м-8, СОЭ-20 мм/ч, АСЛ вЂ” 0 — 1:250; СРБ -(+3o.б, — 59,6 г/л, А—

60,5%; Г-39,4%," а1 -5,1, а -7,7 %. p—

11,4%, у- 153%; А:Г=1,5. Коагулограмма от

15.10,88 г. — гиперфибиногенемия, наклонность к гиперкоагуляции, фосфор - 1,13 ммоль/л, щелочная фосфатаза — 427 м.е., холестерин — 1,67. ммол ь/л, АЛТ.— 0,16, АСТ вЂ” 0,12 ммоль/л, билирубин — 15,4 ммоль/л, тимоловая проба — 1,5 ед. Р,Ваалер-Роузе и латекс теста отрицателен. ЗКà — вертикальное направление электрической оси сердца.

Легкая синусовая тахикардия, Признаки левожелудочковой гипертрофии. ФКà — I тон больше И тона. На средней и высокой частоте не на всех циклах прослеживаются мелкие осцилляции в протосистоле. На рентгенографии костей лучезапястного сустава — суставньге поверхности сближены, отмечается небольшой правый склероз.

Больной получил лечение . индоматцин, вит, Â ã, 8s в/м, вит В ыв. аскорбиновая кислота, поливитамины. На ночь лангеты, массаж ки.стей рук, ДМСО с гепарином на больные суставы.

5 Наступило значительное улучшение: исчезли боли в суставах, уменьшились симптомы артрита. При исследовании показателей фибринолиза было отмечено следующее: а1 АТ здорового 87,5

10 а AT больного 130,4

Ю- -О

НФ больного 36,0

При дальнейшем наблюдении у больного отмечено благоприятное течение ревма15 тоидного артрита, что выражалось достижением ремиссии, отсутствием вовлечения в процесс других суставов.

Точность способа 88,8%. Процент ложноположительных и ложноотрицательных

20 определяют 11,2 .

Формула изобретения

Способ определения эффективности лечения ревматоидного артрита у детей путем

25 исследования .биохимических показателей крови,отличающийся тем.что, с целью повышения точности способа, дополнительно в крови исследуют уровни а<-антитрипсина и:неферментативного фибринолиза

30 после курса лечения, рассчитывают отношения этих показателей к аналогичным показателям в корме и при значении первого отношения 0,65 и выше и второго 0,74 и ниже определяют эффективность лече35 ния,