Способ определения устойчивости терморегуляционной системы экспериментального животного

 

Изобретение относится к медицине и может применяться при определении устойчивости терморегуляционной системы животного. Цель - повышение точности определения. Ткань мозга холодоадаптированного животного замораживают в жидком азоте, готовят экстракт мозга 1-10 кД. У подопытного животного измеряют температуру "ядра" тела. Далее с животным проводят манипуляции при 18-22°С, предварительно введя зкстракт в дозе 0,5-1,0 мг/г Устойчивость терморегуляционной системы животного определяют в случае, если температура после выделения экстракта снижается менее, чем на 10%.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (19) (11) (s1)s G 09 В 23/28

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР (21) 4722589/14 (22) 11.04.89 (46) 15.02.92. Бюл. Q 6 (71) Институт, биологии Якутского филиала

- СО АН СССР (72) А.К.Ахременко, А.И.Ануфриев, В.Е.Софронова, Р.Н,Николаева, Д.Ю.Гнутов и Д.А.Игнатьев (53) 615.475 (088.8) (56) Физиология терморегуляции./Под ред.

И.Н.Лопухина, 1984. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ УСТОЙЧИВОСТИ ТЕРМОРЕГУЛЯЦИОННОЙ СИСТЕМЫ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОГО

ЖИ ВОТН ОГО

Изобретение относится к медицине, а именно к физиологии.

Цель изобретения — повышение точности определения.

Способ осуществляют следующим образом.

Получают ацетоновый порошок из мозга животного — донора. Ткань мозга холодоадаптированного животного замораживают в жидком азоте сразу же после убоя животного. В лаборатории навеску ткани мозга

20 r заливают 200 мл обезвожен ного охлажденногоацетона(не выше-20 С). Растирают кусочки ткани в предварительно охлажденной ступке, затем взвесь переносят в стакан размельчителя тканей. После гомогенизации центрифугируют 10 мин при 2000g.

Ацетон сливают. Осадок снова заливают ацетоном. Гомогенизируют. Эту операцию повторяют 3 раза, Осадок после последнего осаждения высушивают в вакууме. (57). Изобретение относится к медицине и может применяться при определении устойчивости терморегуляционной системы животного. Цель — повышение точности определения. Ткань мозга холодоадаптированного животного замораживают в жидком азоте, готовят экстракт мозга 1-10 кД. У подопытного животного измеряют температуру

"ядра" тела. Далее с животным проводят манипуляции при 18-22ОС, предварительно введя экстракт в дозе 0,5-1,0мг/г. Устойчивость терморегуляционной системы животного определяют в случае, если температура после выделения экстракта снижается менее, чем на 10%, С

Навеску ацетонового порошка заливают охлажденной (до 0 С) 1 молярной уксусной кислотой в соотношении 1:20, т.е. на 1 г порошка берут 20 мл раствора уксусной кислоты. Затем гомогенизируют на холоде в тонком гомогенизаторе, после этого прогре- 4

1 вают в кипящей бане в течение 30 мин. Ох1 лаждают, Гомогенат центрифугируют при с)

40000g B течение 60 мин. Супернатант пере-! носят в ультрафильтрационную ячейку с (Л фильтром, отсекающим соединения с мас-! г сой выше 10,кД. Затем фильтрат пропускают нерее фильтр, отсекающии соединения с !) ° массой ниже 1,0 кД. Осадок смывают с последнего фильтра бидистиллированной водой. Высушивают на лиофилизаторе, расфасовывают и хранят при -20 С без доступа воздуха. В итоге получают пептидную фракцию мозга от 1 до 10 кД, Определяют температуру тела мышей путем введения в ободочную кишку на глу1712956 бину 3 см ректального датчика электротермометра.

Препарат вводят внутрибрюшинной инъекцией, так как это наиболее простой и всем доступный способ. Шприц, — объемом

1 мл, инъекционные иглы наименьшего размера. Доза препарата 0,5-1,0 мг/л. Определяют температуру через 30 мин после введения и в случае, если она по сравнению с исходной снижается менее чем на 10% определяют устойчивость терморегуляционной системы.

Пример 1. Ткань мозга холодоадаптированного животного замораживали в жидком азоте сразу же после убоя животного. В лаборатории навеску ткани мозга 20 г заливали 200 мл обезвоженного ацетона (охлажденного не выше -20 С). Растирали кусочки ткани в предварительно охлажденной ступке, затем взвесь переносили в стакан размельчителя тканей, После гомогенизации центрифугировали 10 мин при

2000д. Ацетон сливали. Осадок снова заливали ацетоном. Гомогенизировали. Эту операцию повторяли 3 раза, Осадок после последнего осаждения высушивали в вакууме.

Навеску ацетонового порошка заливали охлажденной (до 0 С) 1 молярной уксусной кислотой в соотношении 1:20, т.е, на 1 r порошка брали 20 мл раствора уксусной кислоты. Затем гомогенизировали на холоде в тонком гомогенизаторе, после этого прогревали в кипящей бане в течение 30 мин. Охлаждали. Гомогенат центрифугировали при 40000g в течение 60 мин. Супернатант переносили в ультрафильтрационную ячейку с фильтром, отсекающим соединения с массой выше 10 кД. Затем фильтрат пропускали через фильтр, отсекающий соединения с массой ниже 1,0 кД. Осадок смывали с последнего фильтра бидистиллированной водой. Высушивали на лиофилизаторе и хранили при -20 С без доступа воздуха.

Температура в ободочной кишке составила 38,7 С. Затем животному ввели 0,5 мг/кг экстракта внутрибрюшинно. Через 30 мин после введения температура животного составила 35,1 С, что íà 9% ниже исходной, У животного определили устойчивость терморегуляцион ной системы. Подопытное животное помещали в камеру, имеющую свободное сообщение с атмосферой. Через камеру создавали поток воздуха с помощью насоса, создавающего разрежение, Скорость потока воздуха контролировали по газовому счетчику. Пробы воздуха проходящего через камеру с животным отбирали аспираторами, а сам анализ проводили на химиче25 тром, отсекающим соединения с массой выше 10000 Д, Затем фильтрат пропускают через фильтр, отсекающий соединения с массой ниже 1000 Д. Смывают фракцию с. последнего фильтра и лиофилизуют. Хранят

30 в холоде без доступа воздуха.

Перед опытом экстракт разводится в бидистиллированной воде в расчете 0,5-1,0 мгl г массы животного, У подопытного животного измеряют температуру "ядра" тела электротермометром. После внутрибрюшинной инъекции 1,0 мг/кг экстракта температуру тела измеряют через 30 мин. Манипуляции с животным проводят при стандартных температурах, а именно 18-22 С. Через 30 мин

40 температура понизилась по сравнению с исходной на 21%. Определяется отсутствие устой ивости терморегуляцйонной системы животного. Использование способа непрямой колориметрии с оценкой зависимости

45 уровня потребления кислорода от температуры среды подтвердило полученные результаты.

Применение способа позволяет повысить по сравнению с прототипом точность

50 определения устойчивости терморегуляционной системы животного.

Формула изобретения

Способ определения устойчивости терморегуляционной системы экспериментального животного, включающий. оценку его температуры, отличающийся тем, что, с целью повышения точности определения, температуру измеряют до и через 30 мин после введения экстракта мозга холодоа55 ском анализаторе. Измерение потребления кислорода проводили при следующих температурах внутри камеры: 5; 10; 15; 20 С.

При каждой температуре животное выдер5 живали в течение 30 мин. Затем отбирали пробы воздуха. С каждым животным проводили трехкратное измерение и брали среднее.

Пример 2, Источником материала

10 служила ткань головного мозга холодоадаптированного животного (якутской лошади).

Материал собирают во время зимнего забоя лошадей. Сразу же после убоя лошади ткань мозга замораживают в жидком азоте.

15 Навеску ткани заливают охлажденным обезвоженным ацетоном (до -20 С), Гомогенизируют 3-5 раз в соотношении 10-20 мл ацетона на 1 г ткани. Гомогенат центрифугируют 10 мин при 2000g, осадок высушива20 ют под вакуумом. Порошок заливают 1 М

СНзСООК в соотношении 1:20. Гомогенизируют на холоде, центрифугируют при

40000g в течение 1 ч. Супернатант переносят в ультрафильтрационную ячейку с филь1712956

15

25

35

45

Составитель А.Бобров

Техред М.Моргентал

Корректор Л,Бескид

Редактор С.Лисина

Заказ 537 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", r. Ужгород, ул.Гагарина, 101 даптированного животного 1-10 кД в дозе температура после введения экстракта сни0,5-1,0 мг/г, а устойчивость терморегуляци- жается по сравнению с исходной менее, чем онной системы определяют в случае, если на 10 .