Способ определения гетерогенности гемоглобина

 

Изобретение относится к области физиологии, биохимии и клинической .. медицины, а именно к области исследования гетерогенности белков методой электрофореза. Цель изобретения - ускорение способа. Цель достигается тем, что наносят пробу крови на ацетатную пленку, которую предварительно выдерживают в течение 8-10 мин в растворе ацетатного буфера с добавлением к нему трилона Б в конечной концентрации 0,064-1,9%, затем - 1-1,5 мин в растворе нитратного буфера с добавлением трилона Б в конечной концентрации 0,04-0,11%, а электрофорез проводят , при напряжении электрического тока 300-350 В в течение 8-12 мин. Использование способа в 7 раз ускоряет процесс электрофореза гемоглобина. 4 табл. г (Л

СО)ОЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

А1 (19) (11), (51)5 С 01 N 33/72

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСНОМ/ СВИДЕТОЗЬСТФУ ю \

° °

° 4

МЮ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И OTHPbfTHAM

ПРИ ГКНТ СССР

1 (21) 4630647/14 (22} 02.01.89 (46} 29.02.92. Бюл. Г- 8 (71) Сыктывкарский государственный университет им. 50-летия СССР (72) В.В.Гладилов, Г.В.Тулупов и Н .Д.Захватов (53) 615.475(088,8) (56) Лабораторное дело, 1977, r - 7, с. 390-392. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГЕТГРОГЕННОСТи ГЕ!(ОГЛОБИНА (57) Изобретение относится к области физиологии, биохимии и клиническрй медицины, а именно к области исследования гетерогенности белков методом

Изобретение относится к области .физиологии, биохимии и химической медицины, а именно к области исследования гетерогенности белков, в частности гемоглобина, методом электро. фореза.

Цель изобретения — ускорение способа.

Способ осуцествляется следуюгцр образом.

Ацетатцеллюлозные пленки Владимирского или Казанского производства помещают .на 8-10 мин в ацетатный буфер (136,09 r ацетата натрия и 1,4 г трилона Б на 1 л дистиллированной воды,.

57 мл ледяной уксусной кислоты на .1 л воды, из двух растворов готовят смесь из расчета 910 мл первого и 90 мл вто рого. Затем пленку помещают на 1-.

1,5 мин в цитратный буфер (10,5 г ли- монной кислоты и 1,4 r трилопа Б на

2 электрофореза. Цель изобретения — ускорение способа. Цель достигается тем, что наносят пробу крови на ацетатную пленку, которую предварительно выдерживают в течение 8-10 мин в растворе ацетатного буфера с добавлением к нему трилона Б в конечной концентрации 0,064-1,9"., затем — 1-1,5 мин в растворе цитратного буфера с добавлением трилона Б в конечной концентрации 0,04-0,11., а электрафорез провоf дят, при напряжении электрического тока 300-350 В в течение 8-12 мин. Использование способа в 7 раз ускоряет процесс электроЬореза гемоглобина.

4 табл.

1 л воды, 2,13. г лимоннокислого натрия. на 1 л воды, .из двух растворов готовят смесь из расчета 50 мл первого и

750 мл второго) . Далее пленку подсушивают фильтровальной бумагой, наносят полированным стеклом образец гемоглобина и помещают в электрофоретическую .камеру с буферным растворам (10,5 г лимонной кислоты на 1 л воды и 2,13 г лимоннокислога натрия на 1 л воды сливают в пропорции: 50 мл первого и ?50 мл второго) и пропускают элект рический ток .напряжением 300-350 В через электроды камеры. Через 812 мин пленку вынимают, подсушивают и окрашивают.

В табл. 2 представлены данные по числу фракций гемоглобина человека при заряде пленок в буферных растворах е при напряжении электрического тока

Формула изобретения

Та блица1

t Напряжение тока, 1

Число фракций, время электрофореза, мин

Примеры

Г

5 8 . 12 15

3-4 3-4

4- 5 3-4

4-5 3-4

4-5 3-4

3-4

4-5

4-5

4-5

2-3.

3-4

3-4

3-4

400

6

П р и м е ч а н и е. Пленки заряжали в ацетатном буфере 10 мин, в цитратном

1 мин.

Т а бл и ца 2

Пример

Число фракций при времени заряда, мин

1,5

Буферный раствор и время заряда пленки, мин

* 0,5 1

Ацетатный буфер, 11

11

3-4

4-5

3 3-4

4-5 4-5

4-5 4

3-4.. 4

2

3

2-3

2-3

3-4

2

2, 2

10

* Пленка в цитратном буфере не заряжалась.

300-350 В и времени электрофореза 812 мин.

B табл. 1 представленные данные по

"íñíó фракций гемоглобина при электро- форезе в условиях разного напряжения электрического тока.

В табп. 3 представлено количество фракций гемоглобина в зависимости от. количества трилона Б и времени элект- 10 рофореза, напряжение 350 В.

В табл. 4 представлено количество фракций гемоглобина в зависимости от количества трилона Б и напряжения электрического тока, время электрофореза 10 мин.

Положительный эффект заключается в том, что электрофоретическое разделение гемоглобина с помоцью предложенного способа можно провести в 7 раз 20 быстрее по сравнению с прототипом.

Способ определения гетерогенности гемоглобина, включающий нанесение про/ бы крови на ацетатцеллюлозную пленку„ предварительно обработанную буферным раствором, подсушенную фильтровальной бумагой с последуюцим электрофорезом и определением числа фракций, о т л и ч а ю ц и Й с я тем, что„ с целью ускорения способа, пленку выдерживают 8-10 мин в растворе ацетатного буфера с добавлением к нему трилона

Б в конечной концентрации 0,064-1,9Е, затем — 1-1,5 мин B растворе цитратного буфера с добавлением трилона Б в конечной концентрации 0,04-0,11"... а электрофорез проводят при напряжении

300-350 В в течение 8-12 мин, 1716450

Та блица 3

Количество Фракций.при содержании трилона Б, г

Время заряда пленки мин

03 07 14

2,1 2,8

3-4 2-3

4-5 3

5 2-3

4 3

Та блица4

Количество фракций при содержании трилона Б, г

Напряжение, В

0,3, 0,7 1,4. 2,1 2,8

1-2 2-3 2-3

2 4 5

2 4-5 4-5

2-3 4-5 4-5

Составитель Т.Иалютина

Редактор О.Спесивых ..ехред A Кравчук Корректор A.Обручар

Заказ 610 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", r.Óæãoðîä, ул. Гагарина,101

8

400

1-2

1-2

2-3

3-4

4-5

3-4

3-4

4-5

4-5

4-5

2-3 2-3

4 Э

5 2-3

4 2-3