Способ прогнозирования развития послеоперационных воспалительных осложнений у детей с врожденными пороками сердца

 

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для прогнозирования развития воспалительных послеоперационных осложнений у детей с врожденными пороками сердца. Цель изобретений-повышение точности способа. У больного производят забор крови, выделение лимфоцитов. С помощью моноклональных антител определяют общее количество Т-клеток, Т-, В-лимфоцитов, Т-супрессоров и Т-хелперов с вычислением соотношения Т-хелперов к Т-супрессорам и при снижении общего относительного количества Т-лимфоцитов ниже 25% или пои их абсолютном содержании ниже 0,2x10 на 1 л крови при снижении В-лимфоцитов ниже 9% или при их абсолютном количестве ниже 0,2x109 на 1 л крови, при коэффициенте отношения Т-хелперов к Т-супрессорам ниже 0,9 прогнозируют развитие воспалительных послеоперационных осложнений, а при относительном количестве Т-лимфоцитов больше 40% или при абсолютном их содержании свыше 1,1хЮ9на 1 л крови при относительном содержании В-лимфоцитов выше 12% или при абсолютном их содержании свыше 0,2x109 на 1 л крови и при коэффициенте соотношения Т-хелперам к Т-супрессорам свыше 1,1 -прогнозируют благоприятное течение послеоперационного периода. По сравнению с прототипом точность способа возрастает на 21 %. ел С

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (s1)s G 01 N 33/53

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

{21) 4796495/14 (22) 26.02.90 (46) 15.03,92. Бюл. N. 10 (71) Ростовский медицинский институт (72) А,И.Поляк, А.А.Дюжиков, И.В.Дударев и Е.Ю.Златник (53) 615.374(088.8) (56) Авторское свидетельство СССР

N. 1361488, кл. 6.01 N 33/48, 1986, (54) СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ РАЗВИТИЯ ВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ ПОСЛЕОПЕРАЦИОННЫХ ОСЛОЖНЕНИЙ У ДЕТЕЙ С

ВРОЖДЕННЫМИ ПОРОКАМИ СЕРДЦА . (57) Изобретение относится к медицине и. может быть использовано для прогнозирования развития воспалительных послеоперационных осложнений у детей с врожденными пороками сердца. Цель изобретения — повышение точности способа. У больного производят забор крови, выделение лимфоцитов. С помощью моноклональных антител определяют общее количество

Изобретение относится к медицине, а именно К кардиохирургии, и может быть использовано для прогнозирования развития послеоперационных осложнений у детей с врожденными пороками сердца.

Цель изобретения — повышение точности способа.

Способ осуществляют следующим образом, У пациентов с врожденными пороками сердца кровь берут натощак из локтевой вены в пробирку с гепарином из расчета 25 . ед/мл на 1 мл крови. Лимфоциты выделяют из полученной гепариниэированной крови центрифугированием в градиенте плотности (1,077 г/см фиколлпака) "Ortho"(Шве-

„„ „„172001 1А1

Т-клеток, Т-, В-лимфоцитов, Т-супрессоров и Т-хелперов с вычислением соотношения

Т-хелперов к Т-супрессорам и при снижении общего относительного количества Т-лимфоцитов ниже 25 или пуи их абсолютном содержании ниже 0,2х10 на 1 л крови при снижении В-лимфоцитов ниже 9 или при их абсолютном количестве ниже 0,2х10 на

1 л крови, при коэффициенте отношения

Т-хелперов к Т-супрессорам ниже 0,9 прогнозируют развитие воспалительных послеоперационных осложнений, а при относительном количестве Т-лимфоцитов больше 40 или при абсолютном их содержании свыше 1,1х10 на 1 л крови при относительном содержании В-лимфоцитов выше

12 или при абсолютном их содержании свыше 0,2х109 на 1 л крови и при коэффициенте соотношения Т-хелперам к Т-супрессорам свыше 1,1-прогнозируют благоприятное течение послеоперационного периода. flo сравнению с прототипом точность способа возрастает на 21 . ция). Выделенные клетки дважды отмывают охлажденным {4 С) забуференный фосфатами (pH 7,2) физиологическим раствором в течение 10 мин при 1500 об/мин. Затем готовят рабочую концентрацию Зх10 клеток в 1 мл забуференном фосфатами физиологическом растворе. Реакцию проводят на предметных стеклах, предварительно отмытых и обезжиренных, покрытых 0,01 -ным раствором поли- :лизина (мол.масса 40-80 тыс. дальтон) в забуференном фосфатами физиологическом растворе. На стекло со слоем поли-L-лизина наносят 0 05 мл приготовленной суспензии лимфоцитов, Клетки осаждают на стекле во влажной камере в течение 15-20 мин при 37 С. После отмыв1720011 ки мазков Т-клетки и их субпопуляции определяют непрямым иммунофлюоресцентным методом, Для чего наносят 50 мкл мышиных моноклональных антител к рецепторам

CD5 CD4, CD8 (соответственно: для вы- 5 явления общего количества Т-лимфоцитов, Т-хелперов, и Т-супрессоров) в заранее подобранных рабочих разведениях. Мазки инкубируют в течение 20-30 мин при 4 С.

Затем наносят на 50 мкл кроличьего анти- 10 мы шинного глобулина, меченного флюоресцин тиоционатом (ФИТЦ) ("Яечас" ЧССР), разведенного 1: 50 в забуференном фосфатами физиологическом растворе с последующей инкубацией в течение 30 мин при 20 15

С, В-лимфоциты и их субпопуляции определяют прямым иммунофлюоресцентным методом с помощью машинных моноклональных антител к иммуноглобулинам классов М, G, А человека, меченных ФИТЦ("$ечас ЧССР), 20

На мазок лимфоцитов, приготовленный, как описано выше, наносят 50 мкл соответствующего моноклонального антитела в забуференный фосфатами физиологическом растворе с последующей инкубацией во 25 влажной камере в течение 40 мин при 20 С.

Препараты исследуют в люминисцентном микроскопе, оснащенном фаэово-контрольным устройством ("ЛЮМАМ-НЗ"). Вначале при фазовом контрасте подсчитывают об- 30 щее количество клеток в поле зрения, а затем определяют число светящихся клеток в спектре возбуждения люминисценции. Учитывают клетки, имеющие кольцевое по типу

"колец" или "шапочек", свечение. Диффуз- 35 но-окрашенные клетки (погибшие) не учитывают. Процент Т- и В-лимфоцитов и их субпопуляций определяют после подсчета

200-300 клеток в препарате. Уменьшение общей субпопуляции периферических Т- 40 лимфоцитов (CD5+) менее 25 (в абсолютных цифрах (абс.) менее 0,6х10 /л) и при содержании общей субпопуляции В-лимфоцитов меньше 9g, (абс меньше 0,2х10 /л) с коэффициентом отношения Т-хелперов 45 (СР4+) к Т-супрессорам (CD8+) меньше 0,9 свидетельствует о прогнозе на осложненный послеоперационный период. Содержание общей субпопуляции Т-лимфоцитов (CD5+) больше 40; (абс. больше 1,1х10 /л) 50 и при содержании общей субпопуляции Ba goqvvoo больше 12 (абс. больше

0,2х10 /л) с коэффициентом отношения Тхелперов к Т-супрессорам (соответственно

CD4 с CD8 ) больше 1,1 дает прогноз на 55 гладкий послеоперационный период.

Способ иллюстрируют следующими примерами.

Пример 1. Больная Ц., 5 лет. Кличический диагноз: врожденный порок сердца, дефект межпредсердной перегородки, недостаточность митрального клапана, легочная гипертензия 2-й степени (38 мм рт.ст.) по классификации ИССХ им. Бакулева.

До операции. общий анализ крови и биохимические анализы без патологических изменений, Посев крови стерилен, Содержание субпопуляции T-лимфоцитов: оби:,зя (CD5 ) 217; (абс. 0,55х10 /л). Соотношение

Т-хелперов (CD4 ) и Т-супрессоров (CD8 )

0,7. Содержание субпопуляции В-лимфоцитов: общая рап В+67 (абс. 0,2х10 /л), Производительность сердца снижена: сердечный индекс 1,8 л/мин.м . Отмечалась достоверная. корреляция между гемодинамическими (низкий сердечный индекс) и иммунологическими нарушениями (низкий иммунорегуляторный индекс), что указывало на возможность развития осложнений в послеоперационном периоде. Согласие родителей на операцию получено.

14.02.89 r, Проведена радикальная коррекция порока в условиях искусственного кровообращения. Холодовая кардиоплегия.

Ушивание дефекта межпредсердного кровообращения — 1ч 30 мин, время пережатия аорты 60 мин. Коррекция порога адекватная. В течение 2 сут — искусственная вентиляция легких, развитие мозговой комы, сердечная слабость 2а-б степени по ЛангуСтражеско, инотропная поддержка. На 3 сут — углубление мозговой комы, септическая кровь, Начата антибактериальная противовоспалительная терапии с учетом чувствительности микрофлоры антибиотиками широкого спектра действия, детоксикационная, анксиолитическая, антигипоксантная терапия. Проводился формированный диурез, коррекция метаболических и воднозлектролитных нарушений. Проведен сеанс гемосорбции и оксигенобаротерапии, проведена коррекция иммунного статуса с учетом субпопуляционного анализа Т- и

В-клеточного звена иммунитета. B результате проведенного лечения удалось к 10-м сут послеоперационного периода стабилизировать состояние ребенка и получить положительную динамику течения болезни, Состояние ребенка улучшилось и через месяц в удовлетворительном состоянии он был выписан по месту жительства, При повторном осмотре через 6 мес состояние удовлетворительное, посещает детский сад, Данный пример иллюстрирует патогенетическую зависимость гемодинамических нарушений, развивающихся при врожденных пороках сердца, с нарушениями иммунного гомеостаза, что может служить ценным дополнением к клиническим методам предоперационного обследования

1720011

Формула изобретения

Составитель В.Литовченко

Редактор М.Недолуженко Техред M.Mîðãåíòàë Корректор М.Демчик

Заказ 770 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", r. Ужгород, ул,Гагарина, 101 и определения групп, риска развития послеоперационных осложнений.

Пример 2. Больной С., 8 лет. Клинический диагноз: врожденный порок сердца, открытый ар-ериальный проток, недостаточность кровообращения — О, давление в легочной артерии 18 мм рт.ст.

До операции: общий анализ крови и биохимические анализы без патологических изменений. Посев крови стерилен. Содержание Т-лимфоцитов; общая (С05 ) 44 (абс. 1,3х10 /л). Соотношение Т-хелперов (CD4 ) и Т-супрессоров (CD8+) — 1,4. Содержание субпопуляции 8-лимфоцитов: общая рап 8+19 (абс. 0,35х10 /л). Производительность сердца удовлетворительная— сердечный индекс 3,8 л/мин.м, что указы2 вало на отсутствие осложнений в послеоперационный период.

20.12.89 г. Проведена радикальная коррекция порока. Левосторонняя переднебоковая торокотомия, ревизия аорты, ушивание открытого артериального протока. Выписан иэ отделения на 10-е сут после операции.

Предлагаемым способом обследовано более 30 больных с различными врожденными пороками сердца, в том числе 6 с тетрадой Ф алло, 4 — с дефектом межжелудочковой перегородки, 4- с дефектом межпредсердной перегородки, 11 — с открытым артериальным протоком, 7 — с коарктацией аорты. Полученные данные свидетельствуют о наличии корреляции между содержанием в периферической крови субпопуляций Т-лимфоцитов и В-лимфоцитов, соотношением Т-хелперов (CD4 ) и Т-супрессоров (CD8) и течением послеоперационного периода.

Прогнозирование развития осложнений в послеоперационном периоде у детей с врожденными пороками сердца было правильным в 86 случаев,по известному 65, т,е, увеличение точности составляет 21, Результат исследования становится из5 вестен в течение 3 ч от момента забора крови у пациента.

10 Способ прогнозирования развития послеоперационных воспалительных осложнений у детей с врожденными пороками сердца, включающий забор крови, выделение лимфоцитов и определение количества

15 Т-лимфоцитов, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа, Тлимфоциты определяют с помощью моноклональных антител, дополнительно с помощью моноклональных антител опреде20 ляют количество В-лимфоцитов, Т-хелперов и Т-супрессоров, вычислят соотношение Тхелперов к Т-супрессорам и при относительном содержании Т-лимфоцитов ниже 25 или при их абсолютном содержании ниже

25 0,2х10 на 1 л крови, при относительном содержании В-лимфоцитов ниже 9% или при их абсолютном содержании ниже

0,2х10 на 1 л крови и при коэффициенте соотношения Т-хелперов к Т-супрессорам

30 ниже 0,9 прогнозируют развитие послеоперационных воспалительных осложнений, а при относительном количестве Т-лимфоци-. тов больше 40 или при их абсолютном количестве выше 1,1х" О" на 1 л крови, при

35 относительном содержании В-лимфоцитов выше 12 или при их абсолютном содержании свыше 0,2х10 на 1 л крови и козффици9 енте соотношения Т-хелперов к

Т-супрессорам свыше 1,1 прогнозируют

40 благоприятное течение послеоперационного периода;