Среда для окрашивания глутатион-редуктазы на срезах тканей

 

Изобретение относится к медицине, а именно к биохимическим методам исследования . Целью изобретения является полное выявление фермента в ткани. Цель достигается тем, что инкубационная среда дополнительно содержит окисленный глутатион и сывороточный альбумин при следующих соотношениях, мас.%: четыреххлористоводородная соль золота 0,003-0,2; цитрат натрия 0,5-2,0; окисленный глутатион и сывороточный альбумин по 0,005-0,05 и вода - до 100. Среда позволяет полно выявить фермент во всех структурах ткани.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (19) (1I) (51)5 G 01 N 1/28

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4721201/14 (22) 19.07.89 (46) 23.03.92. Бюл. М 11 (71) Сибирский филиал Всесоюзного научного центра хирургии АМН СССР (72) А.Л..Глазырин, С,И,Колесников, А.В.Семенюк и А.В.Свиридов (53) 616-0.88 (088.8) (56) Гайер Г. Электронная гистохимия. — M.:

Мир, 1970, с. 281. (54) СРЕДА ДЛЯ ОКРАШИВАНИЯ ГЛУТАТИОН-РЕДУКТАЗЫ НА СРЕЗАХ ТКАНЕЙ

Изобретение относится к медицине и может быть использовано в клинической химии, а также для выявления локализации, распределения и количества глутатион-редуктазы в органах и тканях человека и животных в норме, при различных воздействиях и в целях диагностики.

Целью является повышение специфичности реактива и полного определения фермента.

Способ осуществляют следующим образом.

Для получения предлагаемого реактива в 80 мл бидистиллированной воды растворяют 0,3-20,0 мг четыреххлористоводородной соли золота (раствор А), затем в 20 мл бидистиллированной воды растворяют 50-200,0 мг цитрата натрия (раствор Б), после чего растворы А и Б сливают и нагревают смесь до 100 С. Раствор приобретает стабильную рубиновую окраску, его охлаждают. Сывороточный альбумин в концентрации конечного раствора 0,5-5,0 мгlмл и окисленный глутатион (0,5-5,0 мг/мл конечной концент2 (57) Изобретение относится к медицине, а именно к биохимическим методам исследования, Целью изобретения является полное выявление фермента в ткани. Цель достигается тем, что инкубационная среда дополнительно содержит окисленный глутатион и сывороточный альбумин при следующих соотношениях, мас.%: четыреххлористоводородная соль золота 0,003-0,2; цитрат натрия 0,5-2.0; окисленный глутатион и сывороточный альбумин по 0,005-0,05 и вода — до 100. Среда позволяет полно выявить фермент во всех структурах ткани. рации) растворяют в дистиллированной воде. Затем эту смесь приливают к раствору коллоидного золота в соотношении 1:(6-9).

Полученную смесь центрифугируют при

10000 g в течение 1 ч. Супернатант удаляют и реактив, находящийся в виде неплотного осадка на дне центрифужной пробирки, ресуспендируют в минимально возможном объеме супернатанта. Хранится реактив в замороженном состоянии.

Пример 1. Для определения глутатион-редуктазы использовали реактив, приготовленный при следующем соотношении компонентов,мас.%:четыреххлористоводородная соль золота 0,003; цитрат натрия 0,5; окисл ен ный глутатион 0,005; сывороточн ы и альбумин 0,005; вода — до 100 мл.

Для гистологического исследования брали ткани желчного мешка и печени крыс, фиксировали в 4%-ном растворе параформальдегида и после обычной гистологической проводки заливали в парафин-воск.

Изготавливали полутонкие срезы, монтировали на стеклах, депарафинИровали и регид1721468

Для контроля специфичности окрашивания реактивом на срезе ткани ставили следующие реакции контроля: наслоение на срез ткани раствора альбумина, меченного коллоидным золотом; блокирование активных центров глутатион-редуктазы в срезе ткани нанесением раствора окисленного глутатиона, а затем воздействие реактивом; неспецифическая ингибиция редуктаз при помощи перикиси водорода.

50

Составитель Л, Стебаева

Техред M.Ìîðãåíòàë Корректор М. Пожо

Редактор Н. Рогулич

Заказ 947 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101 ратировали обычными способами, затем наслаивали полученный реактив и оставляли на ночь во влажной камере при комнатной температуре.

Результаты исследования.

Отчетливо видна локализация расположения глутатион-редуктазы по дольке. Центролобулярные районы имеют более интенсивное красное окрашивание. Окрашивание локализуется на границе материнских и плодовых тканей.

Для электронно-микроскопического исследования аналогичные ткани фиксировали в 4%-ном растворе параформальдегида и после обычной электронно-микроскопической проводки заливали в эпонаралдит, изготавливали ультратонкие срезы, монтировали их на медных сетках и оставляли плавать в капле реагента на ночь. Материал исследовался в электронном микроскопе. В результате в желчном мешке крысы фермент расположен на границе материнских и плодовых тканей, в печени крыс — во вторичных лизосомах. В первичных лизосомах фермент отсутствует.

В первом случае на срез ткани на ночь наслаивали концентрированный раствор альбумин-коллоидное золото. Во втором случае на срез ткани наслаивали окислен5 ный глутатион в дистиллированной воде в количестве 10-20 мг/мл и выдерживали в течение 12 ч. Затем наслаивали полученный реактив и выдерживали в течение 10 ч. В третьем случае на срез ткани наслаивали

10 5%-ный раствор перекиси водорода в метиловом спирте на 1 ч, а затем наслаивали реактив на 12 ч. Окраска не всегда подавлялась полностью. В контроле окрашивание полностью отсутствовало.

15 Предлагаемая среда находит широкое применение при диагностике различных заболеваний, связанных с нарушением процессов перекисного окисления (опухолевых, воспалительных, склеротических), при

20 оценке экспериментального материала, особенно при сопоставлении биохимических и морфологических данных.

Формула изобретения

Среда для окрашивания глутатион-ре25 дуктазы на срезах тканей, содержащая четыреххлористоводородную соль золота и цитрат натрия и воду, отличающаяся тем, что, с целью полного выявления фермента в ткани, среда дополнительно содер30 жит окисленный глутатион и сывороточный альбумин при следующих соотношениях компонентов, мас.%: четыреххлористоводородная соль золота 0,003-0,2; цитрат натрия

0,5-2,0; окисленный глутатион 0,005-0,05;

35 сывороточный альбумин 0,005-0,05; вода— остальное.