Среда для изготовления постоянных микропрепаратов из биологических объектов

 

Изобретение относится к методам микроскопической техники и может быть использовано при подготовке образцов биологических объектов для световой микроскопии . Целью изобретения является улучшение просветляющей способности и увеличение прочности препаратов. Для этого в состав сверху в качестве формообразующей основы вводят поливинилпирролидон при следующих соотношениях, мае. % хлоралгидрат 50-60; поливинилпирролидон 15-25; глицерин 5-7; вода - остальное. 5 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (!9) (!! ) (5!)5

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТ

ГОСУДАР СТВЕ ННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4670660/13 (22) 09.02.89 (46) 07.04.92. Бюл, М 13 (71) Всесоюзный научно-исследовательский институт гельминтологии им. акад.

К.И,Скрябина (72) А.В.Хрусталев (53) 576.3(088.8) (56) Ромейс Б. Микроскопическая техника.—

М., 1953, с.101 — 205.

Роскин Г.И., Левинсон Л,Б, Микроскопическая техника. — М., 1957, с.124-169.

Буланова-Захваткина Е.М. Панцирные клещи-орибатиды. — М „1967, с.88-90.

Изобретение относится к методам микроскопической техники и может быть использовано при подготовке образцов биологических объектов для световой микроскопии.

Цель изобретения — улучшение просветляющей способности и увеличение прочности препаратов, Для этого в состав среды, содержащей просветляющее и мацерирующее вещество — хлоралгидрат, пластификатор-глицерин и воду, в качестве формообразующей основы вводят поливинилпирролидон при следующем соотношении компонентов, мас. :

Хлоралгидрат 50 — 65

Поливинилпирролидон 15 — 25

Глицерин 5 — 7

Вода Остальное

Примеры конкретного выполнения среды представлены в табл,1.

Для приготовления среды указанные компоненты смешивают в любой последо(54) СРЕДА ДЛЯ ИЗГОТОВЛЕНИЯ ПОСТОЯННЫХ МИКРОПРЕПАРАТОВ ИЗ БИОЛОГИЧЕСКИХ ОБЬЕКТОВ (57) Изобретение относится к методам микроскопической техники и может быть использовано при подготовке образцов биологических объектов для световой микроскопии. Целью изобретения является улучшение просветляющей способности и увеличение прочности препаратов. Для этого в состав сверху в качестве формообразующей основы вводят поливинилпирролидон при следующих соотношениях, мас, % хлоралгидрат 50-60; поливинилпирролидон 15-25; глицерин 5-7; вода — остальное. 5 табл. вательности и оставляют на 24 ч до полного их растворения и исчезновения пузырьков.

Готовая среда хранится неограниченно долгое время в закрытой склянке из темного стекла. При загустении в нее добавляется вода или 700-ный спирт.

Пример 1. Неокрашенные препараты членистоногих.

Куриных клещей (Dermanyssus gatllnac), хранящихся в 70 -ном спирте, непосредственно из фиксатора переносят в каплю заключающей среды, приготовленной по прописям, приведенным в таблице, Монтируют микропрепараты по 5 экземпляров клещей на каждом стекле, Результаты испытаний заключающей среды на препаратах из куриного клеща представлены в табл.2.

Пример 2. Препараты нематод, окрашенных кармином.

Паразитических нематод Metastrongylus

apri из легких свиней фиксируют в жидкости

Карнуа и окрашивают в течение суток ацето1725093

Таблица 1

Состав, мас,т

Свойства

Сохраняет окраску

65 15 5

Быстро, проникает в ткани, хооошо просветляет и слабо дееормирует объект.

Плохо и долго затвердевает, (5-7 дней)

Быстро (за 1 сут) и,прочно затвердевает. Плохо проникает в ткани. Деформирует. тонкие структуры, Ка рмином

50 25 7

18.

То же

60 18 6

16..Достаточно прочно затвердевает (за 2-3 дня). Умеренно быстро проникает в ткани, хорошо сохраняет структуры объекта.

60 18

То же

Гематоисилином кармином. Из красителя червей переносят на 10 мин в 50%-ную уксусную кислоту, после чего их заключают в микропрепараты с различными средами (так же, как в примере

1).

Результаты испытания заключающих сред на окрашенных кармином препаратах нематод представлены в табл.3.

Время затвердевания препаратов такое же, как и в примере 1.

Пример 3. Препараты растительных тканей, окрашенных кармином.

Кусочек листа бегонии фиксируют жидкостью Карнуа и окрашивают в течение суток ацетокармином. Маленькие, около 1 мм окрашенные кусочки отмывают в 50 ной уксусной кислоте в течение 10 мин и заделывают в микропрепараты, используя указанные в примере 1 среды.

Результаты испытания заключающих сред на окрашенных кармином препаратах листа бегонии представлены в табл. 4.

Пример 4. Препараты растительных тканей, окрашенных гематоксилином.

Кусочки листа бегонии фиксируют как в примере 3 и окрашивают гематоксилином Караччи. Окрашенные кусочки промывают в воде

B течение 1 ч и заделывают в препараты, как в примере 3.

Результаты; в средах 1-3 и в жидкости

Фора — Берлезе окраска полностью разрушилась. В среде 4 на препаратах отчетливо видны окрашенные в синий цвет ядра на чистом прозрачном фоне. Форма клеток и ядер не нарущена.

Пример 5, Препараты хромосом нематод, Хлорал- Поливи- Глицерин Вода гидрат нилпирролидон

У живых нематод Metastrongylus apri в физиологическом растворе препаруюттонады и подвергают их действию гипертонического раствора цитрата натрия в течение 10

5 мин при 37 С, Гонады фиксируют в метанолуксусной (3:1) смеси окрашивают ацетокармином в течение суток. Окрашенные половые трубки промывают 5-10 мин в 50; ной уксусной кислоте, маленькие их кусочки

10 длиной около 1 мм помещают в каплю, заключающей среды, накрывают покровным стеклом и раздавливают.

Результаты испытания заключающих сред на препаратах хромосом, окрашенных

15 кармином, представлены в табл.5.

Во всех случаях время просветления составляет не более 5 мин, благодаря чему препараты можно исследовать практически сразу после их изготовления.

Формула изобретения

Среда для изготовления постоянных микропрепаратов из биологических объектов, включающая хлоралгидрат, глицерин, 25 воду и формообразующую основу, о т л и ч а ющ а я с я тем, что, с целью повышения и росветля ю щей способности и увеличения прочности препаратов, в качестве формообразующей основы используют поливинил30 пирролидон при следующем соотношении компонентов, мас. :

Хлоралгидрат 50-60;

Поливинилпирролидон 15 — 25;

35 Глицерин 5 — 7;

Вода Остальное.

1725093

Табли ца 2

Среда

5-7 дней

2-3 ч

1-1,5 сут

1 сут

10-12 ч

2-3 дня

1 сут

7-9 дней

4 Жидкость фораБерле е

Таблица 3

Среда

Время просветления объектов

Отчетливо видны электривно окрашенные красные ядра на чистом прозрачном фоне. Кожно-мускульный мешок и внутренние органы не деформируются

1-2 ч

Окрашенные структуры (ядра) видны недостаточно отчетливо из-за мутного фона ° Тело у всех нематод сморщивается.

1 сут

4-5 ч

Окрашенные структуры видны отчетливо на чистом прозрачном фоне. Кожномускульный мешок и внутренние органы не деформируются.

Жидкость

ФораБерлезе

Окрашенные структуры видны нечетко из-за мутного фона. Большинство нематод сморщенные.

1 сут

Визуальная оценка качества препаратов

Хитиновые структуры просматриваются очень отчетливо. Мягкие ткани совершенно не видны. Форма тела и мелкие структуры хитинового скелета без изменений

Хитиновые структуры хорошо просматриваются. Видны контуры внутренних органов и слабо проступающие мягкие ткани, несколько снижающие отчетливость мелких структур хитинового скелета. Многие экземпляры клещей немного сморщены.

Хитиновые структуры просматриваются отчетливо. Мягкие ткани не видны.

Форма тела без изменений.

Хитиновые структуры просматриваются отчетливо. Мягкие ткани - едва заметно. ФОрма тела без изменений °

Визуальная оценка качества препаратов

Окраска полностью пропадает

Время зат- . Время просвердевания ветления препаратов препаратов

1725093

Та бли ца 4

Визуальная оценка качества препаратов Время просветления препаратов

Среда

0,5-1 ч

Отчетливо видны интенсивно окрашенные в красный цвет ядра паренхимы и проводящих сосудов на чистом, совершенно прозрачном фоне. Форма клеток и ядер не нарушена.

5-6 ч

1-2 ч

То же

То же

Окраска разрушается

Жидкость

Окрашенные структуры (ядра) видны недостаточно отчетливо из-за несколько мутноватого фона. форма клеток и ядер не нарушена.

4-5 ч

Жидкость

ФораБерлезе

Таблица 5

Се а

Виз альная о енка качества п епа атов

Хороший разброс хромосом. Структуры хромосом четкие. Фон прозрачный.

Плохой разброс хромосом. Все хромосомы слипшиеся. Структура хромосом плохо различима. Фон прозрачный.

Недостаточный разброс хромосом. Многие хромосомы налегают друг на друга. Структуры хромосом четкие. Фон прозрачный.

Окраска разрушена.

Недостаточный разброс хромосом. Большинство хромосом налегают друг на друга. Структура хромосом просматривается плохо. Фон немного мутный.

Жидкость

ФораБе лезе

35

Составитель И.Тареева

Редактор В.Бугренкова Техред М.Моргентал Корректор Л.Бескид

Производственно-издательский комбинат "Патент", r Ужгород, ул.Гагарина, 101

Заказ 1170 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5