Способ обогащения воды биологически активными веществами
Изобретение относится к биологической обработке вЪды и может быть использовано для ее обогащения биологически активными веществами. Цель изобретения -увеличение содержания в воде витаминов и аминокислот. Для этого суспензию микроводорослей пропускают через двухслойный фильтр, верхний слой которого состоит из песка, а нижний - из частиц гравия. Процесс ведут при 22-34°С. 3 табл.
СОЮЗ СОВЕТСКИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ
РЕСПУБЛИК (19) (11) ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ
ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ
ПРИ ГКНТ СССР
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ
Cd
О
О (7
Ы (21) 4707479/13 (22) 19.06.89 (46) 30.04.92. Бюл. N 16 (71) Институт ботаники АН ЛитССР (72) К.К. Янкявичус, А.С. Антанинене, Г-М.В.
Шлапкаускайте и Г.Ю. Янкавичюте (53) 586(088.8) (56) Авторское свидетельство СССР
¹662043,,кл. А 01 Н 13/00, 1979.
Авторское свидетельство СССР
¹ 731935, кл. А 01 Н 13/00, 1980.
Изобретение относится к биологической обработке (разрушению клеточной стенки) суспензии микроводорослей, заключенных в воде или питательной среде, для обогащения этой воды биологически активными веществами и может быть использовано как в лабораторной практике, так и в сельском хозяйстве при решении ряда практических задач, связанных с обогещением воды, используемой для производственных целей для обогащения кормов, витаминами и аминокислотами.
Известен способ разрушения клеточной стенки микроводорослей, включающий гидролиз стенки ферментными препаратами, полученными из бактерий (Bacillus зоЫ11з
N 43 или Bacillus mesentericus N 56). При проведении гидролиза к биомассе микроводорослей при рН среды 7 — 8 и температуре
40 — 50 С добавляют ферментный препарат в количестве 2 — 3, Время гидролиза 60-70 ч.
Однако данный способ отличается высокой стоимостью, так как требуетдополни(s1)s С 02 F 3/32, А 01 Н. 13/00 (54) СПОСОБ ОБОГАЩЕНИЯ ВОДЫ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫМИ ВЕЩЕСТВАМИ (57) Изобретение относится к биологической обработке воды и может быть использовано для ее обогащения биоло ически активными веществами. Цель изобретения — увеличение содержания в воде витаминов и аминокислот. Для этого суспензию микроводорослей пропускают через двухслойный фильтр, верхний слой которого состоит иэ песка, а нижний — из частиц гравия. Процесс ведут при 22-34 С. 3 табл. тельных затрат, связанных с культивированием микроорганизмов выделением ферментного препарата и его использование в строго определенных условиях.
Известен способ разрушения клеточной стенки микроводорослей путем применения теплообработки суспензии этих водорослей, дальнейшего их охлаждения и ферментного гидролиза. Тепловая обработка осуществляется при 85 — 95 С в течение 3 — 5 мин с последующим охлаждением до 45—
48 С. Ферментная обработка микроводорослей осуществляется культурой гриба
Trichoderma lignorum в течение 1-3 ч, Существенными недостатками известного способа являются разрушение витаминных веществ в процессе теплообработки биомассы микроводорослей в условиях повышенной температуры (до 85 — 95 С), дополнительное культивирование в стерильных условиях гриба Trichoderma
lignorum и в результате этого — высокая стоимость способа.
1730053
Цель изобретения — увеличение содержания витаминов и аминокислот в воде.
Поставленная цель достигается внесением суспензии микроводорослей на двухслойный биофильтр, через который 5 постоянно пропускается вода, В процессе фильтрации гидролитические ферменты сапрофитных гидробактерий разрушают стенки микроводорослей. Процесс ведется при температуре 22 — 34 С, B указанном ин-. 10 тервале температуры проявляется оптимальная активность экзогенных ферментов.
Биофильтр заполнен двумя равными слоями песка и гравия, Верхний слой биофильтра состоит из песка с диаметром частиц 0,1-1,0 мм, нижний слой — из гравия с диаметром частиц 1,0 — 5,0 мм. Песок и гравий промыты и простерилизованы сухим жаром. На торец фильтра надето сито. Емкость биофильтра 1025 мл. Скорость фильтрации суспензии микроводорослей 25 — 81 мл/ч.
Микроводоросли являются основным продуцентом биологически активных веществ, находящихся в водорослевой клетке в связанном состоянии.
Опыты проведены с фитоценозом микроводорослей, характерных для пресноводных экосистем и состоящих иэ сине-зеленых — Anabaena viguieri Denis et Fremy, Aphanizomenon f los — aquae (,) Ralfs, Gloeocapsa limnetica (Lemm.) Hollerb., Gomhosphaeria lacustris Chod., Lyngbya
limnetica Lemm., Merismopedia punctata
Meyen, Microcystis aeruginosa Kutz. emend
Е епК„диатомовых — Diatoma elongatum (Lyngb.) Ag., Asterionella formosa Hass„
Fragilaria crotonensis Kitt., F. construens (Ehr.) Grun, ч. venter (Ehr.) Grun., Melosira
granulata (Ehr.) Raifs, М. islandica О. Mull, Navicula sp., Nitzschia vermicularis (Kutz.)
Grun., Synedra acus Kutz„Stephnodiscus
hantzschii Grun.. St. astraea (Ehr.) Огоп., Surirella sp., Tabellaria fenestrata (Lyngb,); зеленых — Ankistrodesmus falcatus (Corda)
Ralfs, Closterium aciculare Tuff. West, Coelastrum microporum Naeg., Cosmarium
undulatum Corda, Oocystis lacustris Chodat., О. solitaria Winr., Pediastrum, boryanum (Turpin) Menegh., P. duplex Meyen, Scenedesmus quadricauda (Turp.) Breb., Sc, obIiquus (Turp.) Kg, Биомасса микроводорослей с целью количественного ее определения собирается из водоема планктонным капроновым ситом с мелкими порами. Перед внесением биомассы на биофильтр ее разбавляют водой в соотношении 1:15, которая пропускается через биофильтр. После загрузки биофил ьтра биомассой микроводорослей
55 через него постоянно пропускается вода, в которой находится комплекс сапрофитных гидробактерий, состоящий из Bacillus
amarus, Вас. mycoides, Вас. cereus, Вас, е!едапз, Вас. luteus, Bac. gracilis, Вас.
flexus, Вас. formosus, Bacterium album, Mycobacterium globlforme, Pseudomonas
fluorescens, Ps. liquefaciens, Ps. liquida, Sarcina f lava, S. alba, Micrococcus гпасегапз в концентрации 1,0 — 1,5 млн. кл/мл воды и разрушающий стенки клеток микроводорослей продуцируемыми ими гидролитическими ферментами. Для того, чтобы процесс проходил при требуемой температуре, биофильтры содержат в помещениях с температурой 22 или 34ч-2ОС. При таких условиях автолиз и минерализация микроводорослей проявляется на 2-3 сут и продолжается до полного разрушения клеток внесенной биомассы микроводорослей (примерно до 15 сут). Обогащение профильтрованной воды биологически активными веществами зависит не только от количества загруженной биомассы микроводорослей, но и от содержания ее в подаваемой воде. Если биомасса микроводорослей в воде, непрерывно пропускаемой через биофильтр, большая (40 — 90 мг/л), то дополнительная загрузка биофильтра суспензией микроводорослей не нужна.
За счет проходящего в биофильтре процесса автолиза и минерализации органического вещества микроводо рослей бактериальным населением биофильтра, в зависимости от времени пребывания микроводорослей в биофильтре фильтрат по концентрации витаминных веществ и аминокислот превышает направляемую в биофильтр воду соответственно в 2 — 57 и 2 — 46 раз, Способ осуществляют следующим б8разом, Биофильтры, состоящие из вертикального цилиндра длиной 120 см, диаметром 5 см, емкостью 1025 мл, заполнены песком и гравием, промытыми и простерилизованными сухим жаром. На торец цилиндра надето мельничное капроновое сито М 59, Каждый вариант испытания проводят в двух повторностях, Биомассу планктона, сырой вес которой
13,414 г (сухой — 3,607 r), разбавля ют 200 мл воды и вводят в биофильтр. Через биофильтр пропускают воду с присутствующим в ней небольшим количеством биомассы микроводорослей, вес которой установлен и учитывается при вычислении результатов опыта.
В табл, 1 приведен расход воды и заключенной в ней биомассы микроводорослей в течение опыта.
1730053
15
Через 210 ч было профильтровано дополнительно к предыдущим первому и второму этапам еще 4550 мл воды с биомассой микроводорослей 0,1479. Скорость фильтрации 45,5 мл/ч, В фильтрате 55 по сравнению с контролем (Кз) содержание витаминов увеличилось в среднем Ad
1195, а аминокислот(по сумме) — до 939® (табл. 2 и 3). (В натуральной биомассе микроводорослей сухой вес составляет приблизительно 25%. Испытания проводят при соотношении биомассы (сухой) микроводорослей и емкости биофильтра примерно
1:300.
Микроскопирование фильтрата показывает, что микроводоросли даже самые мелкие, полностью задерживаются на биофил ьтре.
Продолжительность опыта 330 ч. Через 60, 110, 210 и 330 4 в фильтрате определяют количество восьми витаминов группы В и аминокислот.
Контролем служит направляемая на биофильтры вода в естественном необработанном состоянии. Контрольных вариантов было 4, на каждом этапе опыта брали свежую воду; в которой те же ингредиенты Ьыли определены, как и в фильтрате, Пример 1. Процесс фильтрации про-, водили непрерывно при температуре
22 +2 С. Через 60 ч профильтровано 4850 мл воды и с ней дополнительно внесено на биофильтр 0,3643 г биомассы микроводорослей (сырой вес). Скорость фильтрации
80,8 мл/ч.
В табл. 2 показано содержание витаминов группы В в фильтрате (мкг/л).
Как видно из данных табл. 2, через 60 ч в фильтрате опытных вариантов содержание витаминов группы B по сравнению с контролем (К1) увеличилось в среднем до
606%. Та же картина прослеживается также по аминокислотам.
В табл, 3 приведено содержание амикокислот в фильтрате.
Обогащение фильтрата опытных вариантов аминокислотами превосходит контроль до 632% (по сумме аминокисот).
Через 110 ч было профильтровано дополнительно к первому этапу 3750 мл воды с присутствующей в ней биомассой микроводорослей 0,1781. Скорость фильтрации 73 мл/ч. В фильтрате по сравнению с контролем (Кг) содержание витаминов увеличилось в среднем до 787 %, а аминокислот (по сумме) — до 546% (табл. 2 и 3).
Через 330 ч было профильтровано дополнительно к предыдущим первому — третьему этапам еще 3100 мл воды с биомассой микроводорослей 0,2945г. Скорость фильтрации 25,8 мл/ч. В фильтрате по сравнению с контролем (К4) содержание витаминов увеличилось в среднем до 778, а аминокислот (по сумме) — до 750% (табл. 2 и 3).
Пример 2. Процесс фильтрации проводили непрерывно при температуре
34 +2ОС.
Через 60 ч было профильтровано
4850 мл воды и с ней дополнительно внесено на биофильтр 0,3643 г биомассы микроводорослей (сырой вес). Скорость фильтрации 80,8 мл/ч (табл, 1). В фильтрате опытных вариантов по сравнениюконтролем (К ) содержание витаминов увеличилось в среднем до 1067, а аминокислот (по сумме) — до 748% (табл. 2 и 3).
Через 110 ч было профильтровано дополнительно еще 3600 мл воды с биомассой микроводорослей 0,1710 г. Скорость фильтрации 72,0.мл/ч. В фильтрате по сравнению с контролем (К2) содержание витаминов увеличилось до 1201, а аминокислот (по сумме) — до 949% (табл. 2 и 3).
Через 210 ч было профильтровано еще
4250 мл воды с биомассой 0,1381 г. Скорость фильтрации 42,5 мл/ч. В фильтрате по сравнению с контролем (K3) содержание витаминов увеличилось в среднем до 1667, а аминокислот (по сумме) — до 949% (табл, 2 и
3), Через 330 ч было профильтровано дополнительно еще 3000 мл воды с биомассой микроводорослей 0,2850 г. Скорость фильтрации 25,0 мл/ч. В фильтрате по сравнению с контролем (Кд) содержание витаминов увеличилось до 771, а аминокислот (по сумме)— до 650%.
Результаты исследований (табл, 2 и 3) разрушения стенок клеток микроводорослей свидетельствуют о значительном увеличении в фильтрате биофильтров по сравнению с контролем содержания витаминных веществ и аминокислот, Более высокое содержание биологически активных веществ в фильтрате выявлено при температуре 34 С.
Формула изобретения
Способ обогащения воды биологически активными веществами, предусматривающий разрушение стенок клеток микроводорослей, отличающийся тем,что,c целью увеличения содержания в воде витаминов и аминокислот, разрушение клеточных стенок осуществляют путем пропуска
1730053 суспензии микроводорослей через двухслойнь!й фильтр, верхний слой которого состоит из песка с диаметром частиц 0,1 — 1,0 мм, а нижний слой — из частиц гравия с диаметром частиц 1,0 — 5,0 мм, и ри этом и ропуск суспензии осуществляют со скоростью
25 — 81 мл/ч при температуре 22 — 34 С.
Таблица !
Количество биомассы планктона на биофипьтре, Г сырого/сукого вясд
Количество прог>ильтровлнной волы, мл
Скорость
Оильтрации, мл/v
Продолнительность спыта, ч
Условия огыта
С хчее с начала опыт
Сбцее
На разных этапах
Внесенное в начале опыта ооь.та
К< с 22 С
34 C
I-й этап
0,3643/0,0243
0,3643/0,0243
13,414/3,6074
j3,41ч/3,6074
80,8
80,8
13,7783/3,6317
13,7783/3,6317
4850
4850
КО с" 22 С с 34 С
II-й этап
1l0 (60+50) 0,1781/0,0236
0 1710/0 0227
13,9564/3,6553
13,9ч93/3,6544
8450
3600
75,0
72,0
III-й этап
210 (110+100) К, t 22 С с 34 С
14,1043/3,6703
14,0374/3,6684
О, 1479/0,0150
0,I381j0,0140
45,5
42,5
4250
12700
IV-й этап
330 (i!0+120) К с 22 С с 34 С
0,29<5/0,0260
0,2о50/О 0252
14,3988/3,6963
14,3724/3,6936
i5,8
25,0
i 6250
15700
ЗССО
Т а о л и ц а 2
Витамин В,. плотин ч" оэ ия оп<в та
Пар-минобезойная
Инозит
Нико".инпьая кислота
Пирндоксин
Пантотеновая кислота мкг/л 8 мкг/л мкг/л мкг/л
<<срез 60 ч
1 1<77. 100
14 с425 1302
17,0953 1489
0,0139
0,0422
|"й
571
304
0,010 100
0,0171 171
0,0193 193
0,0115 IСО 2 948
0,1633 1420 23,883
0,3886 3379 17,708
0,0031 100
0,0056 13!
0,0063 203
810 ойl
25,33 100
33,87 l53 ч1,56 164
Через 110 ч
0,0089
0,0421
0,0474
0,0032
0,0174
0,0384
544
1200
473
532
0,0086
0,0164
0,0190
С 0028 !СО
0,0037 132
0,0068 243
191
?21
2,324
14,560
15,723
0,0143 100
0,4722 ЗЗС2
0,7279 5090
l00
626
677
17,55 100
31,35 179
26,03 148
Через 210 ч
0 0052 100 1 0058
0,1026 1973 С;С416
О, 1 II 1 271 3 Э, 04 31
717
/ч3
1,8780 i00
23,5640 1255
4! ВС85 2230
312
219
0,010
0,0312
0,0219
0,0017 100
О 0123 723
0,0144 612
16,26 100
56,02 344
47,74 294
283
738
0,0031
0,033(0,0368
0,0056
0,0288
0,0375
1ОЗ
409
454!
514
670 0,9933 100
l0,4722 1054
13,1 37 1324
0,0090
0,0329
0039
377
0,0078 100 4,047
О, 1717 2201 9 941
0,1263 1619 7,779
24,96 100
212,47 851
202,34 811
0,0031 100
0,0182 587
0,0074 239
246
192
55
Контроль с 22 C с 34 С
Контроль
К
22 С
r 34 С
Контроль
К
r.22 С
r3<С
Контроль
К. с 22 С
Зч С
0,0123 100 4,545
0,4864< 3954 12,876
0,7058 5738 35,805
".врез ЗЗО
Внесенное с оипьтруемой водой на разных этапах огыта
1,2226 100
10,3880 ВсО
18,2879 1496
0,0045 100
0,0107 238
0,0998 2213
1730053
I
1 (t
I.
1 I
1 1
1 1
1 I
1 СЪс 1
1 1 с
I W t
1 I х
1 X 1
1 I
1
1
1 м!
I
6I
I 1
Xt со оа
О О о
О сЪСЧ о тл
" 0Ъ о ао
ОСОО
ОЛ
ООЬ оооь
СО 1
X т
X с
М с м
0 мсъ
0Ъ 0Ъ
О о сч л
-3 «со ъО еО ъО сеъ о сч-т ! со м
° 0 0Ъ с
301
tt3 t
3 — 1
1 !
1
1
I
I
I
I
I
I
1
1
I
1
1
1
1
1 !
lA I оасо t оьо t
° е»0\1
- т 00 о-т а
o mo
«СЧ СЧ со о4т т о м-т
-СО СЧ мл о б-т о о сч
a N
О т ам
"О мл
О«4 о о сч ол
О ъО
О ма
«СЧ
O еO оа
- т "О
О %CO
О Ма о
ОСГ о ъО е
СО СЧ
0ъ -т ч0 со сч о е- Геб о м аСО М .О СЧ е.0
«cV сЧ ол 00 ъО л сч е — СЧ N а о О оа
М о ао о лсъ
О СЧ
Оч:б Сч
«-т а о сч
О СЧЧ3
CO Л
О 0 оа
CO! О о .о о мо сч
СI а л .т ОО
WО СЧ
-«СЧ м о ю с а а сч а о сч сч о
1 I
1 I! I
I еГГ 1
1 1
I 1
1. 1
1 С 1
1 Л 1
1 I х
1 X !
1 б
1 I
I 1
1 !
1 1
I Сбс 1
1 3
I х
1 X а
1 1О
1 t
1
I !
1
I
1 S
1 Ф
1 Е
1
1
1 !
1
1 Z
1 S
1 1"
1 X х а
О
1
3 о ОС0 о 0ъо мм о О
o cO
«СЧ
О .0 CA обчм
N м
О СЧ СЧ
ОЪОа
С 4 СеЪ
-т от еО 1У\ 0 Ъ
CO СЧ сЧ о л
"О л сч у
О
О
C.3
C
6 за
С 4 оа
О О! оом а 03N
-т л
I 1 с
1 I ! х
1 X ! I о О а а м сч м сЧ тМОЪ
;О 0Ъ 0 \ м м сч
Оо ъО 0Ъ 0Ъ со СО Г м сч! л
ОЧ:б ЪО ао о
-т м м
3
1 д Р
1
1 с
1 I х
1 X
О
О о о о
О О
«оа
О
C сч о
О С сэ с с с сч о о с с с
С.б О О
I
1
I
I
1
1
1
I оа о м а
О О
О б"Ъ
Г
О - 3
О 0Ъ сч
ON
О CO
C) с
r3A еи о соо С
Ч3 СЧ и м °
-т а с
0ъ-т 1-3 с о а ! С 4 сч о
ЫМ и с о а сч ! Сч
О и с )
-т м с о
О. б
С 4
СЧ
О
ЫЫи сэ
- т м
1 дФ 1
Z 1 а k — — !
6 t C о
1 I I х
I X i — — — -3
1 I
CC I I
П3 1 1
aI 1 1
О 1 1
Х I Ф 1
S 1 1
Ъ Ctt 44 бб3 I I 1 съo с
ЯС1 1
CV! 3.
О S I ЪС 1
cX Y 1 X I
1 1
1 1
Z I
S 1 1
Х14Е!
S 1 I
D. 1 сс! с
I 1
Х I O
1 X 1
1 I
1 1
1 б
0.0 х 1
S ! 1
v I
1 !
I 1 1
1 Y
1 X I
3- —.—.—
1 I т 3
1
1 Ф l5 1
Об 1 ! С бб 1
v c 1
Л О 1 б
I
1
1
1
I
1
I
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
I
1
1
1 !
I
1
I
1
1
1
1
I !
1
1
1
1
1
1
1 !
I
1
1
t
1
1
1
I
1
1
1
I
1 ! !
1 !
1 !
I
I
I
1 !
I
1
I
1
1 !
1
1 б
1 о м
СОСО М т=ГМ о
0ЪСЧ М сб
6 осчсч а
ocQcO 6
О О 0 с о оо а
3- сч -т
Z СЧ съ о
aX uu
Ом т
О ом сч +cc. о тъ МСЧ м
Ф 6
6 ) 6
ОС0 О 0.
6 а О С 6
0 Со б ° Ъ ъО
lA ъО
03 сЧ
° 0
0 Ъ Сес а еО
СЧ
CO а
СЧ
lA со
00 ! л
0Ъ а
О
C 4 с с 3 с
CJ
1-3
:т
С Ъ бб
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1 !
I
I
1
1
1
1
1
I
I
I !
I
1
1
1
1
1
3 !
1
I
1
1
1
1
t
1
I
1
I
1
1
1
1
1
1
1
I
I
1
1
1
1730053 с> .О ОЪ о -т -.т
cA m с» mcA о м-т
ОЪ О\ о счсо о м-т ,О < л сч (Ч СО ОЪ (Ч-т л сО .О ъо (Ч с>4 (Ч
С» Г
-»- I <Л
С> Г .О л-т а
Сч (3 ю л сЧ "О ГЧ ла
-т а м (4 ГЧ о с» оаоь ю ч» -т
<л
О4ГМ ю ач»
Ю о а-т ю ам
LA а о с> сч м (ч — л (ч (Ъ с» о л с» Г (Ч (»»
Ю . о оm с> оъ
<л (Ч о аа сч сч м о лм
- Ом
-т
m оom л ооэ о л
СЧ МIA г т- со
o m с> л»»
О С>
О с< с> с>
D D Сч
-т-т съ
lAocO сч(ъсч сч ал
lA -(4 С 4 с 3 о м м
-т ма (4 сч -т
Ю ОЪСО ю-т м
-т "О о сосо о сЧ ГЧ мм
ОСОЮ
О «СО
-» I
С» (Ч (Ч сЧ-О лm (Ъ Г> > а(ъс"ъ
СЧ СО СО
0>
43
CL
43
:т о
ГЧ о м
+ м
Г>
>»» LA (33 ооъ т о.
С> С> .0 43 т -т з.т с»ам о осО с»
С» о м с»«а м с» л (чov сч оч» а а лл
СО ЪО СЧ
-» СО (Ч .мм (Ч .О ог м а мо о сч-т о со .О СО о с»
ОЪ (4 С 4 спсч о.О CO
М СО
-т оъ а т» с4 (4 съ г м ч»
С>» (D
ОЪ
О (AÅ
oIm м (Ч с»
oг л
DD m — с4 о с» о мм м -т с>< м с> м о м спсч г
О (Ч а м ма м о -т а — сч м
> г
СО О
-т с» m м (ч
55!
1 I
1 1
I 1
I I
1 1
I 1
I 1
< 1 м 1
1 be I
1 1 (» 1 1 о с ! 1 а>
o х (О (3> I 1
X I
cz !
О I а
1 у I
< с
3 33
>s
g< >с ! с
I I
> с
S 1 х (3> 1 сМ I ! !
3 — -В
z s
s z (g (g C < Y (О (g I X I
1 1
l=.
I
t I
1 1
z I ae
z о
s . о
С< I X
< I I —I I I I z I S 1 Оъ0 ГС 1 С 1 — — О.! С 3Y z I 04 О с с с ! ! ! Y I 1 I z 1 »С I oe 1 < — > «с! с ! ! с I У 1 1 I < 1 I 1 I ! 3 0 0 1 I 1 S 1 i с 1 о,< х 1 11.. ! 1 1 P I 1 ig 1 1 С> 1 О Z 1 0Ч0 < 1 S ((< < Z<- Г» — т <<О< С с » (» 1 С S I Y 1 Z 1 I LA I м 1!!!! 3 т I м 3 м м !! 1!! 1 (4 1 м I I м 1 I 3 о м ! 1 I с! 1 CO 1 (ч 1 I (ч I .О сЧ 1 1 а 1 (4 I I (Ч 1 1 м сЧ I I (Ч. с 4 1 1 1 (4 ! 1 Ю с3 I I О \ I 1 СО 1 1 о г LA CO О о m -ocO т мс» с3 (Ч (Ч СЧ с» со сo .О мсЧСО ЪО СО (3> с >3> 1 1 о о о с»аа 3 I О 1 I о ю -т I СО .О I 3 СОъо (4 1 I (4 I с» !ла с>«м (Ч ОЪ ! I! л (Ч А< -т ! СЧ ъо — (-4 o ogO с» -т .д 1 I.Г\ ОЪ I 1!! >ОГ 1 » -т съ I ОмО 1 о (ъ 1 о о о г 1 -т м(ч Г а 1 с< (Ч О <ЛОЪ 1 О-т< а "О I I --т Г (со --т 1 <л л 1 1 + ++1 С> СО I С> ОЪ О I о о! -» (" 1 с> мм ъосО о с4 (Ч м «с> I (Чл 1 С> LA О Ъ 1 (Ч I "О -> м -т ММО! л ! < I о а о о ОСО LA I — (Ч с< М I ссм < мтм а
