Способ разрушения клеточной оболочки хлореллы

 

ОП--ИКАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

Союз Советских

Социалистических

Республик

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (61) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено 021276 (21) 2426425/З0-1З (51)м

2 с присоединением заявки М

А 01 Н 13/00 (23) Приоритет

Государственный комитет

СССР но дедам изобретений и открытий

Опубликовано 0505.80.. Бюллетень Мо 17

Дата опубликования описания 050580 (53) УДК 66З.4 (088. 8) О.Н. Альбицкая, Л.С.Лосякова, Н.П. Ошанина, С.С. Воронкова и О.П.Кожемякина (72) Авторы изобретения

Всесоюзный научно-исследовательский биотехнический институт (71) Заявитель (54) СПОСОБ РАЗРУШЕНИЯ КЛЕТОЧНОИ ОБОЛОЧКИ

ХЛОРЕЛЛЫ

Изобретение относится к микроби,,ологической промышленности и касается приготовления белково-витаминных обогатителей кормов, используемых в сельском хозяйстве.

Известен способ приготовления напитка из хлореллы, заключающийся в том, что свежую хлореллу суспендируют в воде, к суспенэии добавляют жидкую протеазу, продуцируемую микроорганизмами BaciIIus natto, которая вызывает автолиэ хлореллы (1) .

Недостатком известного способа является невысокий выход белковых веществ. 15

Наиболее близким к изобретению решением является способ разрушения клеточной оболочки хлореллы, предусматривающий тепловую обработку суспенэии хлореллы, охлаждение ее с последующим ферментативным гидролизом (2) .

По этому способу гидролиз хлореллы проводят путем воздействия на оболочку цитолитическим ферментным препаратом, полученным из гриба

Trichotheeium roseum.

Ферментный препарат (5Ъ) вносят и выдерживают в течение 17-48 ч с толуолом. 30

Перед введением ферментного препарата хлореллу стерилизуют (пропаривают) с 10 ч. воды в течение 1 ч и охлаждают до 40 С.

Недостатком этого способа является длительность тепловой обработки (пропаривание до 1 ч и ферментативный гидролиэ до 17-48 ч), недостаточно полное разрушение клеток хлореллы, что снижает усвояемость ее белков при включении в корма для животных, и низкий выход (11е) белковых веществ из клеток. Кроме того, недостатком способа является добавление толуола в гидролизуемую смесь и последующее его отделение.

Целью изобретения является более полное разрушение клеточных оболочек хлореллы и увеличение тем самым выхода белковых веществ.

Это достигается тем, что тепловую обработку суспенэии осуществляют при

85-95 С в течение 3-5 мин с последующим охлаждением до 45-48 С, а ферментативный гидролиз проводят путем обработки водной суспензии хлореллы культурой гриба Trichoderma Eignorum

6 с в течение 1-3 ч.

При этом культуру гриба T.Eignorum 6 с обычно вносят в количестве

731935

15.Время предвари- Количест- 50

jòåëüHoé обработ- во растмин прп

Время ферментативного гидролиз а (ин кубации) ч воримого белка, %

С 85 С

0

2

3

5

5

5,3

7,0

8,6

17,0

16,5

16,2

16,8!

250-400 ед С-фермента на 100 r cyxoro веса хлореллы и ферментативному гидролизу подвергают суспензию биомассы, предварительно высушенной при

110-130 С без ее тепловой обработки.

Способ осуществляют следующим образом.

Суспензию хлореллы с влажностью биомассы не менее 80% нагревают, например, на водяной бане при 85-95 С в течение 3-5 мин с последующим охлаждением до 45-48 С. о t0

Затем проводят гидролиэ в течение

1 — 3 ч в присутствии культуры гриба

Т. Iignorum 6 с, взятой в количестве

250-400 ед. С-фермента на 100 г сухого веса хлореллы.

После тепловой обработки фермент и хлореллу суспендируют в воде (1000 мл воды на 100 r сухого вещества) при рН 4,8 и инкубируют 1-3 ч при 48-50 С. 20

В случае разрушения клеточной оболочки высушенной хлореллы ферментативному гидролизу подвергают суспензию биомассы, предварительно высушенной при 110-130 С без ее, тепловой обработки при соотношении между водой и абсолютно сухим веществом хлореллы 10;1.

П р и м е, р 1. Пастообразную хлореллу (влажность биомассы не менее 80%) нагревают на водяной бане

3-5 мин при 85 и 95 С и проводят гидролиз, используя культуру гриба

T.Iignorum 6 с в количестве 400 ед

С-фермента на 100 r сухого веса хлореллы.

После тепловой обработки хлореллу суспендируют в воде (1000 мл воды на 100 r сухого вещества добавляют фермент) при рН 4,8 и инкубируют 1-3 ч при 48-50 С с периодичес- 40 ким перемешиванием.

Для определения степени гидролиза клеток смесь центрифугируют

5 мин при 6000 об/мин и в надосадочной жидкости определяют количество 45 растворимого белка.

Данные исследований приведены в таблице.

Результаты показывают, то после гидролиза в течение 3 ч содержание белка в супернатанте составляет 17% от общего количества белка в пробе (в контроле 5,3%), т.е. все белки из клеток перешли в раствор. Проведение предварительной тепловой обработ— ки хлореллы в течение 3 и 5 мин обеспечивает одинаковое количество растворимого белка.

Пример 2. К 100 r хлореллы, высушенной при 110 С, добавляют 5 г о культуры гриба Т.Iignorum 6 с (400 ед

С-фермента на 100 r сухого веса) и проводят гидролиз аналогично примеру 1, но беэ предварительной тепловой обработки суспенэии клеток хлореллы, при соотношении между водой и абсолютно сухим веществом хлореллы 10:1.

После гидролиэа содержание белка в супернатанте составляет 17% от общего его количества в образце.

Преимуществом предлагаемого способа разрушения клеточной оболочки хлореллы является сокращение времени проведения ферментативного гидролиза примерно в шесть раэ, исключение добавления в гидролизуемую смесь толуола, являющегося токсичным, легко воспламеняющимся веществом, сокращение времени тепловой обработки до

5 мин со снижением температуры до

85-95 С, исключение тепловой обработки суспенэии высушенной хлореллы, сокращение расхода электроэнергии в 5-16 раэ и увеличение выхода белка в раствор до 17% от общего количества.

Формула изобретения

1. Способ разрушения клеточной оболочки хлореллы, предусматривающий тепловую обработку суспенэии хлореллы, охлаждение ее с последующим ферментативным гидролизом, о т л и ч а ю шийся тем, что, с целью более полного разрушения клеточных оболочек и увеличения тем самым вы хода белковых веществ, тепловую обработку суспенэии осуществляют при

85-98 С. в течение 3-5 мин с последуюа щим охлаждением до 45 — 48 С, а ферментативный гидролиз проводят путем обработки водной суспензии хлореллы культурой гриба Trichoderma Iignorum

6 с в течение 1-3 ч.

2. Способ по п.1, о т л и ч а ю шийся тем, что культуру гриба

Trichoderma Iignorum 6 с вносят в количестве 250-400 ед С-фермента на

100 г сухого веса хлореллы.

3. Способ по п.1, о т л и ч а ю шийся тем, что ферментативному

731935

Составитель О. Великославинская

Техред Ж.Кастелевич Корректор М.Выгула

Редактор Т.Шарганова

Заказ 1578/2 . Тираж 723 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП Патент r. Ужгород, ул. Проектная, 4 гндролизу подвергают суспензию биомассы, предварительно высушенной при

110-130 С без ее тепловой обработки.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Патент Японии М 17945, кл. 36 (2) D, опублик. 1971.

2. Авторское свидетельство СССР

Р 276886, кл. С 12 D 13/06, 1968 (прототип) .