Способ выявления хроматина в лимфоцитах крови на мазках

 

Изобретение относится к медицине , а именно к иммуноцитохимии. Цель - более полное выявление хроматина за счет лучшего контраста хрома - типовых структур. Мазки крови до окрашивания обрабатывают раствором люминисцирующих антител к иммуноглобулинам , а для окрашивания используют 10 М раствор бромистого этидия, приготовленного на 0,01 М трис НС1, при этом окрашивание проводят в течение 10-15 мин. Способ значительно повышает точность и позволяет дифференцировать виды клеток.

„„80„„17 2221

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (51) 5 С 01 N 1/28

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГННТ СССР

Яф Fgr) gpnq

ОПИ(АНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н А ВТОРСКОММ СРИДЕТЕЛЬСТВУ

1 (21) 4664137/14 (22) 29.03.89 (46) 07.05.92. Бюл. V 17 (71) Научно-исследовательский инсти" тут онкологии и медицинской радиологии (72) А.E. Океанов и Л.Б. 1Осупова (53) 616-0 88.8 (088.Р) (56) Колесников В.А., Сондоре 0.6. . и др. Использование этидия для цитохимического изучения хроматина.

Цитология, 1979, Н 21,9,1029. . (54) СПОСОБ ВИЯВЛЕНИЯ ХРОМАТИНА

В ЛИМФОЦИТАХ КРОВИ НА МАЗКАХ

Изобретение относится к медицине, а именно к иммуноцитохимии, и может быть использовано для оценки имиуно-. логического состояния организма.

Цель изобретения - полное выявление хроматина за счет лучшего контраста хроматиновых структур.

Способ осуществляют следующим образом.

Из крови, взятой из пальца, гото" вят стандартные мазки. Мазки фиксируют на предметных стеклах в смеси ацетон:этанол 1:1, проводят через гистологическую батарею спиртов с понижающейся концентрацией (96, 70, 30 } .дистиллированную воду и наносят на них несколько капель раствора анти" сыворотки к иммуноглобулинам человека, меченной ФИТЦ, или раствора моноспецифических антител к определенному классу иммуноглобулинов человека, меченных ФИТЦ в рабочем разведении.

2 (57) Изобретение относится к медицине, а именно к иммуноцитохимии.

Цель - более полное выявление хроматина за счет лучшего контраста хрома- . тиновых структур. Мазки крови до окрашивания обрабатывают раствором лю.Минисцирующих антител к иммуноглобу линам, а для окрашивания используют

10 М раствор бромистого этидия, приготовленного на 0,01 М.трис HCI, при этом окрашивание проводят в течение

10-15 мин. Способ значительно повы-. шает точность и позволяет дифференцировать виды клеток .

Мазки помец ают во влажную камеру и оставляют в термостатируемом шкафу при 37 С на 30 мин, после чего отмывают дважды по 15 мин физиологическим раствором и проводят флуорохромирование 10 М раствором бромистого. этидмя на. физиологическом растворе, забуференном 0,01 М трис НСХ (рН 8) в течение 10 мин и снова отмывают физиологическим раствором 1 мин, Для измерения интенсивности люминесценции Флуорохромированных лимфоцитов

: препарат помещают на предметнйй столик микроскопа"цитофлуориметра с Фотометрической люминесцентной насадкой и цифровым вольтметром. Люми, несценцию возбуждают светом с дли= ной волны 436 нм. Интенсивность smминесценции измеряют. при длине волны .

615 нм.

Цитофлуориметром измеряют Интенсивность люминесценции: 20 лимфоциСоставитель Л. Стебаева с, Техред M,дидык Корректор М. Самборская

Редактор И. Стрельникова

ЮЮЮЮ °

Заказ 1577 Тираж Подписное

ВНИКЛИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Иосква, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-иэдательский комбинат "Патент", г.Ужгород, ул. Гагарина, 101

3 173222 ,тов, несущих поверхностные иммуноглобулины, отличаются от остальных характерным зеленым свечением мембраны и 20 лимфоцитов, не имеющих иммуноглобулиновых детерминант, и находят средние значения, выраженные в отно" сительных единицах. На мазках, обработанных растворами моноспецифических антител к I>A, Е С, I>M, I>D . 10 или Е Е, меченных ФИТЦ, определяют интенсивность. люминесценции I A-, IgC- I M- I В- или I Г. - ПоложиЭ <) Ф 4) 9 тельных лимфоцитов соответственно.

Активность хроматина лимфоцитов в норме M+m (оценена в группе,состо" ящей из 10 здоровых человек) состав ляет: 23,7030,71 отн.ед. у I клеток; 24,50%1,02 отн.ед. у I+ - кле- ток. 20

Пример 1. Больной П., 50 лет.

Диагноз при поступлении: смешанный цирроз печени, портальная гипертензия. В анализе крови: лейкоциты

7,6 10 /л, лимфоциты - 27"6, СОЭ - 25

31 мм/ч. В иммунологическом профиле крови; Т-лимфоциты " 593, В"лимфоциты - 214.

При проведении цитохимического анализа выявлено. значительное подав- 30 ление активности хроматина как в субпопуляции I>- лимфоцитов, так и

I — лимфоцитов. Значения .интенсив1ности их люминесценции составляли

13,86 и 8,53 отн.ед., соответственно, что ниже нормы на 41,54 и 65,23.

При дальнейшем обследовании больного установлен диагноз первичного рака печени. Лапароскопически установлено наличие множественных метастазов.

Пример 2. Больной Б., 47лет, Диагноз при обследовании, хронический абструктивный бронхит с астматическим компонентом, эмфизема легких, диффузный пневмосклероз ДН Е-ЕЕ. В периферической крови " лейкопения

4 (3,6 10 /л). В иммунологическом проФиле: T-лимфоциты - 504, В-лимфоциты - ?2Ф.

При цитохимическом анализе субпо- ° пуляций лимфоцитов активность хроматина I - клеток находилась в пределах нормы и составляла 21,30 отн.ед., тогда как функциональная активность хроматина Š— лимфоцитов, оцениваемая по интенсивности их люминесценции, была снижена по сравнению с нормой на 47,81 и соста вляла

12,38 отн.ед. Больной прошел курс симптоматического лечения, после чего отмечалась нормализация этого показателя, Способ повышает точность за счет исключения диссоциации хроматина и более полного связывания красителя путем проведения Флуорохромирования в 10 M растворе бромистого этидия, приготовленного на забуференном физиологическом растворе, а также за счет проведения отмывки препаратов от неспецифически связанного краси-! теля. Кроме того, способ сокращает

;время Флуорохромирования, 1

;Формула изобретения

Способ выявления хроматина в лимФоцитах крови на мазках путем их

Фиксации и окрашивания в растворе бромистого этидия с последующим спект рофлуорометрическим исследованием, о т и и ч а ю шийся тем, что, с целью полного выявления хроматина за счет лучшего контраста хроматиновых структур, мазки до окрашивания обрабатывают раствором люминисцирующих антител к иммуноглобулинам, а для скрашивания используют 10 +М раствор бромистого этидия, приготовленного на 0,01 М трис НС1, при этом окрашивание проводят в течение 1015 мин.