Способ определения антистрессовой активности брассиностероидов

 

Использование: физиология растений, анализ физиологически активных веществ. Сущность изобретения: определение антистрессовой активности брассиностероидов проводится путем воздействия на высечки из листьев ячменя брассиностероидов и стрессового фактора 0,3-0,5 М раствора хлорида натрия с последующим определением содержания пролина в высечках из листьев ячменя, обработанных и необработанных брассиноСтероидами. 1 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

1 (21) 4812781/13 (22) 19.03.90 (46) 30.07.92. Бюл . ¹ 28 (71) Институт физиологии растений им. .К.А.Тимирязева (72) Г.А.Бокебаева, В,A.Õoõëîâà, В.А,Хрипач и О.Н,Кулаева (53) 631.811.982(088,8) (56) Кулаева О.Н. и др. Брассиностероиды в регуляции синтеза белка в листьях пшеницы. Докл. АН СССР, т.305, №.. 5, с.1277-1279, 1989.

Изобретение относится к биотехнологии, а именно к анализу физиологически активных веществ, и может быть использовано для определения антистрессовой активности брассиностероидов при засолении.

Известен способ определения анти- . стрессовой активности брассиностероидов путем измерения устойчивости проростков бобов в условиях водного стресса (Zhao

lu.Ju. "The Yffet of 24-epibrassino1ide on

Stem eIongatIon and resistance to

enviromnetalsgess In munIg bean seedings".

Тезисы международного совещания в Галле (ФРГ) "Брассиностероиды-химия, биоактивность, применение", 1990, с.26).

Известен способ определения антистрессовой активности брассиностероидов путем определения общего синтеза. белка в условиях повышенной температуры.

Этот способ заключается в осуществлении контакта биообъекта — тестера — листьев пшеницы, предварительно обработанных брассиностероидом, со стрессовым факто„„. Ж „„1750493 А1 (sl)s А 01 G 7/00; G 01 N 21/00 (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АНТИСТРЕССОВОЙ АКТИВНОСТИ БРАССИНОСТЕРОИДОВ (57) Использование: физиология растений, анализ физиологически активных веществ.

Сущность изобретения: определение антистрессовой активности брассиностероидов проводится путем воздействия на высечки иэ листьев ячменя брассиностероидов и стрессового фактора 0,3-0,5 М раствора хлорида натрия с последующим определением содержания пролина в высечках из листьев ячменя, обработанных и необработанных брассиностероидами. 1 табл, ром — повышенной температурой и последующем сравнении количества образовавшегося белка с белком в необработанных листьях пшеницы.

Недостатками способа являются невозможность его использования для определения антистрессовой активности при засолении, а также его трудоемкость иэ-эа сложности и- длительности выделения белков.

Цель изобретения — получение возможности определения влияния брассиностероидов на устойчивость растений к солевому стрессу и упрощение способа.

Поставленная цель. достигается способом определения антистрессовой активности брассиностероидов путем осуществления контакта и биообъекта-тестера с брассиностероидом и стрессовым фактором и определения степени влияния брассиностероидов на реакцию растения, причем в качестве биообъекта- тестера используют отрезки листьев ячменя, в качестве стрессового фактора — раствор хлорида

1750493 натрия, взятое количество отрезков листьев ячменя делят на четыре части, контакт первой и второй частей с раствором брассиностероида осуществляют 1,5 — 2,0 ч, контакт третьей и четвертой частей с дистиллированной водой осуществляют то же время, затем вторую и четвертую части подвергают воздействию хлорида натрия в концентрации 0,3 — 0,5 M в течение 23 — 25 ч, а определение степени влияния брассиностероидов на реакцию растения производят по содержанию в них пролина сравнением между собой разниц показаний между второй частью и первой, а также между четвертой частью и третьей, где пеовая и третья части служат контролем.

Выбор заявляемых интервалов определяется оптимизацией всех условий способа, Пример 1, Растения ячменя сорта

Винер выращивают в ящиках с почвой. У растений в возрасте 10 — 12 дней срезают листья первого яруса. Отбирают выравненные по размеру листья. Из них вырезают отрезки длиной 2,5 см и раскладывают по 9 штук по чашкам Петри диаметром 10 см на фильтровальную бумагу, смоченную 8 мл раствора брассиностероида, на 2 ч. Для каждого варианта опыта используют 3 чашки. При круглосуточном освещении исследуloT набор концентраций брассиностероида

10, 10, 10, 10, 10 9, 10 "o М, Контролем берут листья, инкубированные в 8 мл дистилированной воды. Через 2 ч прединкубации отрезки переносят на растворы брассино"стероида тех же концентраций, содержащие 0,5 M NaCI. Часть контрольных листьев переносят на 8 мл NaCI. Таким образом опыт имеет три контроля: на дистиллированной воде, на растворах брассиностероида, на растворе хлористого натрия. Через 24 ч определяют содержание пролина по методу Bates (Bates et at., 1973, Rapid de

termination of free proline for vater-strees

Studies P1antsoll 39: 205-207). Для каждой пробы берут по три отрезка и для каждого варианта проводят по три определения. Отрезки растирают в 5 мл 3%-ной сульфбсалициловой кислоты. Полученный раствор фильтруют через фильтр Сынпор М 4. 2 мл фильтрата приливают в пробирку, содержа.. щую 2 мл ледяной уксусной кислоты и 2 мл нингидрйнового красителя, который готовят по методу Bates. 1,25 мл нингидрина разводят в 20 мл 6 M ортофосфорной кислоты и 30 мл ледяной уксусной кислоты. Пробирки с исследуемым материалом кипятят на водяной бане 1 ч. После охлаждения измеряют оптическую плотность раствора на спектрофотометре при длине волны 522 нм против контрольного раствора, Пример показывает, что предлагаемый способ позволяет определить влияние брассиностероидов и их синтетических аналогов на устойчивость растений к солевому стрессу по снижению накопления пролина s ответ на солевой стресс. Результаты представлены в таблице.

10

Снижение содержания пролина (от контроля) в отрезках листьев ячменя при воздействии брассиностероидов и хлорида натрия

Пример 2, Проводят аналогично

Формула изобретения

Способ определения антистрессовой

45 активности брассиностероидов путем воздействия на биологический тест-объект стрессового фактора и сравнения физиолого-биохимических показателей тест-объектов, обработанных и необработанных

50 брассиностероидами, отличающийся тем, что, с целью упрощения способа, в качестве стрессового фактора используют 0,30,5 М раствор хлорида натрия, в качестве тест-объекта — высечки из листьев ячменя, а

55 в качестве физиолого-биохимического показателя определяют содержание пролина. примеру 1 с той разницей, что контакт примера-тестера с анализируемым раствором осуществляют 1,5 ч, а опытный объект подвергают воздействию смеси растворов хло20 рида натрия в течение 23 ч, Результаты представлены в таблице.

Пример 3. Проводят аналогично . примеру 1 с той.разницей, что контакт объекта-тестера с анализируемым раствором

25 проводят 2,5 ч, а опытный объект подверга- ют воздействию смеси раствором брассино- . стероидэ и хлорида натрия, либо одного хлорида натрия в течение 25 ч, Результаты представлены в таблице, 30 Пример 4. Проводят аналогично примеру 1 с той разницей, что концентрацию хлорида натрия берут 0,3 М, Результаты испытаний представлены в таблице.

Пример 5. Проводят аналогично

35 примеру 1 с той разницей, что концентрацию хлорида натрия берут 0,4 M.

Результаты примеров показывают, что появилась возможность определить влияние брассиностероидов на устойчивость

40 растений к солевому стрессу при упрощении способа.

1750493

Составитель В. Инякина

Редактор И. Касарда Техред M,Ìoðãåíòàë Корректор А. Козориз

Заказ 2629 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101