Способ получения карбоксилсодержащих полимерных носителей для иммобилизации белковых антител

 

Сущность изобретения: взаимодействие с азотной кислотой продуктов реакции макропористого хлорметилированного сополимера стирола и дивинмлбензола с гликолями формулы НО(СН2СН20)пОН, где , при 10-60°С, концентрация азотной кислоты 10-30% до содержания карбоксильных групп 0,48-1,60 ммоль/r. Условия реакции сополимера с гликолями: 160- 200°С, 7-12 ч, молярное соотношение количеств хлорметильных групп и гликолей 1:(7,8-20). 1 табл.

COIO3 СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

<и> ИЛ<и> 1754727 Al (sf)s С 08 F 212!14; А 61 К 39/44 // (С 08

6) госУдАРственный коМитет F 212/14, 212:3

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Изобретение относится к химии вйсоко- ных сополимеров на осйове стирола и дивимолекулярных соединений, а именно к пол- нилбензола азотной кислотой. учению полимерных носителей для Недостатком этого способа является иммобилизации белковых антител, и может низкая специфическая активность белковых быть использовано в биотехнологии и меди-; антител, иммобилизованных на носйтеле. цине для создания иммуйосорбентов, аф- . Цель изобретения. — повышение специфинных сорбентов и биокатализаторов. - фической активности иммобилизованных

Известен способ получения карбоксил- белковых антител. . содержащих носителей для иммобилизации .. П:р и м е р 1. 20 г хлорметилированного белковых антител обработкой оксиэтилме- . макропористого сополимера"стирола-и 15% такрилатного геля бромцианом и последую- дивинилбензола, получейного в п) исутстщим взаимодействием с аминокапроновой вии 120Д бензина и содержащего 4,51 кислотой; . ммоль хлора на 1 r, загружают в колбу, залиl lедостатками известного способа явля- вают 100 мл этиленгликоля, нагревают до ются сложность получения, необходимость 160 Си выдерживаютприэтойтемпературе

:использования высокотоксичного бромциа- . и перемешивании 12 ч. Затем сополимер на. отделяют, промывают водой до нейтральНаиболее близким к предлагаемому по ной.реакции, переносят в колбу и заливают технической сущности и достигаемым ре- 100 мл водного 10%-ного раствора азотной зультатам является способ получения кар- кислоты. Реакционную смесь выдерживают боксилсодержащих полимерных носителей 8 ч при 40 С и перемешивании, после чего для иммобилизации белковых антител, полимерный носитель отделяют и промывавключающий обработку реакционноспособ- ют водой до нейтральной реакции промыв! (Л ь.

Ы

«4

1 (21) 4735527/05 (22) 07.09.89 (46) 15,08.92. Бюл. М 30 (71) Научно-производственное объединение

"ИРЕА" (72) В. Д. Горчаков, О. Н. Власовская;

M. В Денисова и Ю. С. Лебедин (56) Valeritova О. et. al,-Biochem et blophys

acta, 1975, V403, N. 1, р. 192.

Тростянская Е, Б, и др, Заводская лаборатория, 1957, N. 9, с. 1042 — 1049. .(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ КАРБОКСИЛСОДЕРЖАЩИХ ПОЛИМЕРНЫХ НОСИТЕЛЕЙ

ДЛЯ ИММОБИЛИЗАЦИИ БЕЛКОВЫХ АНТИТЕЛ (57) Сущность изобретения: взаимодействие с азотной кислотой продуктов реакции макропористого хлорметилированного сополимера стирола и дивинилбензола с глиКо М формулы НО(СН2СН20)пОН, t +e п=1 — 3, при 10-60 С, концентрация азотной кислоты 10-307; до содержания карбоксильных групп 0,48-1,60 ммоль/г. Условия реакции сополимера с гликолями: 160200 С, -12 ч, молярное соотношение количеств хлорметильных групп и гликолей

1:(7,8-20). 1 табл.

1754727 ных вод. Полученный носитель содержит 1,6 ммоль/г карбоксильных групп.

В ИК-спектрах носителя имеются характеристические полосы поглощения при

1290 см (валентные колебания карбонильного кислорода), 1700 см (карбонильный кислород), 1360 см (деформационные ко-. лебания ОН-группы карбоксила), (1110 см ). (группы простых эфиров).

Пример 2. 20 г хлорметилированного сополимера стирола и 15% дивинилбензола, полученного в присутствии 100 бензина и содержащего 17,27 . хлора, загружают в колбу, заливают 100 мл диэтиленгликоля, нагревают до 180 С и выдерживают при этой температуре и перемешивании 10.ч, Затем сонолимер отделяют, промывают водой до нейтральной реакции, переносят в колбу, заливают 100 мл 20/, †н азотной кислоты и выдерживают при 50 С и перемешивании 4 ч, после чего сополимер отделяю1; промывают водой до нейтральной реакции. Полученный продукт содержит

0,82 ммоль/г карбоксильных групп.

В ИК-спектрах продукта имеются характеристические полосы поглощения карбонильного кислорода карбоксильных групп (1290 и 1700 см "), OH-группы карбоксила, (1360 см ), группы простого эфира (1110см ) . Пример 3, 20 r макропористого хлорметилированного сополимера стирола и

15 дивинилбензола, полученного в присутствии 100 ) бензина и .содержащего

17,2 хлора, загружают в колбу, заливают

100 мл триэтиленгликоля, нагревают до

200 С, выдерживают при этой температуре и перемешивании 7 ч, затем сополимер отделяют, промывают водой до нейтральной

- реакции, переносят в колбу, заливают

100 мл 30),-ной азотной кислоты и выдерживают 1ч при 60 C и постоянном перемешивании. Затем сополимер отделяют, промывают водой до нейтральной реакции.

Полученный носитель содержит 0,48 ммоль/г карбоксильных групп.

В ИК-спектрах носителя имеются характеристические полосы поглощения карбонильного кислорода карбоксильных групп (1290 и 1700 см ), 0H-группы карбоксила (1360 см ), группы простого эфира (1110 см 1).

Для получения иммуносорбентов карбоксилсодержащие носители активировали обработкой эпихлоргидрином и затем иммобилизовывали соответствующие белковые антитела, Готовые иммуносорбенты отмывали от непрореагировавших антител последовательной обработкой 5 -ным растрия.

Результаты сорбции показаны в таблице.

Как видно из данных таблицы, применение полученных по предлагаемому способу карбоксилсодержащих носителей позволяет по сравнению с прототипом существенно увеличить специфическую активность иммобилизованных белковых антител, что выра20 жается в способности связывать находящиеся в плазме крови соответствующие иммуноглобулины.

Носители, полученные по предлагаемому способу, механически прочны, не набухают в биологических жидкостях и могут быть применены для приготовления иммуносорбен ов, применяемых в биотехнологии и медицине для очистки крови больных.

Формула изобретения

30 Способ получения карбоксилсодержащих полимерных носителей для иммобилизации белковых антител, включающий обработку реакционноспособных сополимеров на основе стирола и дивинилбензола

35 азотной кислотой, отличающийся тем, что, с целью повышения специфической активности иммобилизованных белковых антител, в качестве реакционноспособных сополимеров используют хлорметилиро40 ванные сополимеры стирола и дивинилбензола, которые предварительно подвергают взаимодействию с гликолями формулы

НО(СНгСНгО)ПОН. где п=1 — 3, при 160в

200 С в течение 7- l2 ч, при молярном соотношении количеств хлорметильных групп и гликолей 1:7,8 — 20, а обработку производят водным раствором азотной кислоты с концентрацией.10-30 j при 40-60 С до содержа н и я ка рбоксильных групп 0,4845

50 1,60 ммоль/г, 10 твором альбумина, 3; -ным раствором

Твин-100 и 0,14 M раствором хлорида на6

1754727

Составитель И. Стояченко

Редактор Н. Киштулинец Техред М.Моргентал Корректор 3, Салко

Заказ 2867 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4(5

Производственно-издательский комбинат "Патент", r. Ужгород, уд.Гагарина, 101