Питательная среда для получения спор сибиреязвенного микроба

 

Применение: микробиология, среда для выращивания спор. Сущность изобретения: питательная среда содержит в качестве питательной основы аминопептид и ферментативный гидролизат кормовых дрожжей, а также маннит, хлористый натрий, гидроокись натрия, агар и дистиллированную воду при следующем соотношении компонентов, г/л: аминопептид 3-4, ферментативный гидролизат кормовых дрожжей 4-6, маннит 1-1,5, натрий хлористый 4-6, агар 15-17, натрия гидроокись 0,1-0,15, дистиллированная вода - остальное. Среда обеспечивает высокий уровень спорообразования сибиреязвенного микроба /0,6-0,7 млрд спор/мл/ м удобна в использовании. 1 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РеспУБлик (я)з С 12 N 1/20

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ABTOPCКОМУ CBИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4882956/13 (22) 16.11.90 (46) 15.10.92. Бюл. N. 38 (71) Научно-производственое объединение

"Аллерген" и Научно-исследовательский противочумный институт Кавказа и Закавказья (72) С. А. Угримов, О. H. Лопаткин, Н, И.

Пивоварова, М. Г. Соколенко, Л. Н. В1арчукова и В. П. Молотова (56) Yead Stone J. P., Filds P. Simple Culture

medium for Brit. g. Ехрег. path., 1940, 21, р, 161-173. (54) ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ СПОР СИБИРЕЯЗВЕННОГО МИКРОБА

Изобретение относится к медицине, в частности к микробиологии, и касается сред для выращивания спор микроорганизмов из рода Вас111из anthracis.

Известна питательная среда ГладстонаФилдса, содержащая: казеиновый триптический перевар, водный экстракт дрожжей, сернокислое железо, сернокислую «лагне. зию, сернокислый марганец, сернокислый натрий, хлористый кальций, калий фосфорнокислый однозамещенный, калий фоафорнокислый двузамещенный, агар и дистиллированную воду. Среда ГладстонаФилдса предназначена для получения столбнячного токсина, которая в течение многих лет используется для выращивания спор

Вас1ИЬз anthracls.

Однако данная среда имеет недостаток; она не обеспечивает необходимый уровень спорообразования (0,4 млрд спор с 1 мл среды). Ы< 1768634 А1 (57) Применение: микробиология, среда для выращивания спор. Сущность изобретения: питательная среда содержит в качестве питательной основы аминопептид и ферментативный гидролиэат кормовых дрожжей, а также маннит, хлористый натрий, гидроокись натрия, агар и дистиллированную воду при следующем соотношении компонентов, г/л: аминопептид 3-4, ферментативный гидролизат кормовых дрожжей 4-6, маннит 1-1,5, натрий хлористый 4-6, агар 15-17, натрия гидроокись 0,1-0,15, дистиллированная вода — остальное. Среда

Обеспечивает высокий уровень спорообразования сибиреязвенного микроба /0,6-0,7 млрд спор/мл/ и удобна в использовании.

1 табл.

Целью предлагаемого изобретения является разработка сухой питательной среды для получения спор сибиреяэвенного микроба, обеспечивающей высокий уровень спорообраэования Bacillus anthracis, Для этого используют в качестве питательной основы аминопептид и ферментативный гидролизат кормовых дрожжей, иэ источников углевода-магнит, а иэ минеральных веществ натрия гидроокись при следующем количественноМ соотношении, г/л:

Амин опептид 3-4

Ферментативный гидролиэат кормовых дрожжей 4-6

MaHHMT 1-1,5

Натрий хлористый 4-6

Агар 15-17

Натрия гидроокись 0,1-0,15

Дистиллированная вода до литра

1768634

Сухую питательную среду готовят следующим образом из расчета на 1 л дистиллированной воды:

В а р и а н т 1. В шаровой мельнице перемешивают сухие компоненты, г/л: ами- 5 нопептид — 3, ГКД вЂ” 4, маннит — 1, агар — 15, натрий хлористый — 4, натрия гидроокись—

0,1 °

В а р и а н т 2. В шаровой мельнице перемешивают сухие компоненты, гlл, ами- 10 нопептид- 3,5, ГКД вЂ” 5, маннит-1,25, агар — 16, натрий хлористый — 5, натрия гидроокись - 0,1.

В а р и а н т 3. В шаровой мельнице перемешивают сухие компоненты, г/л: ами- 15 нопептид — 4, гидролиэат кормовых дрожжей — 6, маннит — 1,5, агар — 17, натрия гидроокись — 0,15, натрий хлористый — 6, Среду испол ьзуют следующим образом:

30 85 гсухой питательной среды(вариант2) 20 разводят в 1 литре дистиллированной воды, автоклавируют, разливают в матрацы по 0,5 л и вновь автоклавируют,Лредварительно перед посевом на матрац производят высев культуры петлей по 5 мл на бульон Хоттин- 25 гера и инкубируют при 37 С в течение 18-24 ч. При наличии образования роста колоний содержимое пробирки (5 мл) высеваат на плотную среду в матрице и покачиванием равномерно распределяют культуру по по- 30 верхности. Затем выдерживают в течение

3-х часов при комнатной температуре до впитывания жидкости в плотную среду. По истечении времени матрац помещают в термостат при 37 С, выдерживают 6-10 суток и 35 периодически в течение этого времени производят контроль на образование спор. При наличии округлой (гарохообразной) формы процесс образования спор считают завершенным. Смыв спор осуществляют следую- 40 щим образом. Для этого в матрац вносят 50 мл дистиллированной воды и оставляют на

1-1,5;

4-6;

0,1-0,15;

15-17 до1л

15-20 мин, После чего шпателем снимают с поверхности среды биомассу и определяют концентрацию спор чашечным методом или в камере Горяева. При этом получают 0,76 млрд спор сибиреяэвенного микроба с 1 мл среды.

Далее полученную споровую бакмассу используют для получения водорастворимых антигенов споровых форм сибиреязвенного токсина известным способом.

Сравнительную оценку эффективности предложенной среды проводят с контрольной средой Гладстона-Филдса..

Результаты спорообраэования В.

anthracis приведены в таблице.

Предлагаемая среда обеспечивает высокий уровень спорообраэования Вас!Поз

anthracls (0,6-0,7 млрд спор с 1 мл среды), удобна в использовании.

Формула изобретения

Питательная среда для получения спор сибйреязвенного микроба, содержащая питательную основу, источник углевода, минеральные вещества, агар и дистиллированную воду, о т л и ч а ю щ а яс я тем, что, с целью повышения спорообразования, она содержит в качестве питательной основы амин опептид и ферментативный гидролизат кормовых дрожжей, из источников углевода — маннит, а иэ минеральных веществ — хлористый натрий,гидроокись натрия, при следующем количественном соотношении,г/л: аминопептид 3-4; ферментативный гидролизат кормовых дрожжей

-1 маннит хлористый натрий гидроокись натрия агар дистиллированная вода