Способ микроклонального размножения раувольфии

 

Использование: биотехнология, медицина , фармакология. Сущность изобретения: растения различных видов раувольфии размножают с высоким коэффициентом размножения путем введения в культуру пазушных почек и пассирования на питательные среды специально подобранного состава. 1 табл.

СОЮЗ СОВГ ТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (я)5 С 12 N 5/04 ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕ

ВЕДОМСТВО СССР (ГОСПАТЕНТ СССР)

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ПАТЕНТУ (21) 4918432/13 (22) 12,03.91 (46) 07,04.93. Бюл. ¹ 13 (71) Институт молекулярной биологии и генетики АН УССР (72) В.А.Кунах (73) Институт молекулярной биологии и генетики АН Украины (56) Авторское свидетельство СССР № 1566722, кл. С 12 N 5/00, 1988, Изобретение относится к биотехнологии и может применяться для ускоренного размножения растений с их одновременным оздоровлением от фитопатогенных микроорганизмов.

Целью изобретения является разработка способа микроклонального размножения разных видов раувольфии, в том числе видов, являющихся, источником ценных алкалоидов, используемых в медицине, Пример. Вычлененные из однолетних побегов пазушные почки с участком побега после поверхностной стерилизации переносят в асептических условиях на простерилизованную питательную среду следующего состава, мг/л:

Макросоли по Мурасиге-Скугу 1/3, микроэлементы по Мурасиге-Скугу;

Fe-хелат 5 мл/л

Глицин 2

Аскорбиновая кислота 3-5

ИУК 0,3-0,5

БАП 0.01-0,1

Гумат натрия 30-50

„, 5U „„180801 1 АЗ (54) СПОСОБ МИКРОКЛОНАЛЬНОГО РА3МНОЖЕНИЯ РАУВОЛЬФИИ (57) Использование; биотехнология, медицина, фармакология, Сущность изобретения: растения различных видов раувольфии размно>кают с высоким коэффициентом размножения путем введения в культуру пазушных почек и пассировэния на питательные среды специально подобранного состава. 1 табл.

Сахароза 15-20 г/л

Агар 5-7 г/л

Пробирки с высаженными пазушными почками помещают в термостатировэнные условия (22-28 С) с 12-16-часовым световым днем и с освещением 1000-2000 люкс.

Через 30-50 дней из почек вырастают стебельки, которые в асептических условиях отделяют от остатка стебля исходного рас-, тения. В дальнейшем стебельки либо укореняют, либо размножают далее, С целью размножения стебельки разрезают на фрагменты с одной пазушной почкой и культивируют в тех же условиях.

Дальнейшее размножение выросших из пазушной почки растений проводят либо на среде указанного выше состава, либо же на среде следующего состава, мг/л:

Макросоли по Мурасиге-Скугу 80%, микроэлементы по Мурасиге-Скугу, Fe-хелат 5 мл/л Аденин 5

Кинетин 1 а- НУК 0,5

Тиамин 1

Аскорбиновая кислота 3-5

1808011

Гумат натрия 30-50

Сахароза 20 г/л

Агар 5-7 г/л

Укореняют растения на питательной среде следующего состава, мг/л:

Макросоли по Уайту, микроэлементы по

Мурасиге-Скугу, Fe-хелат 5 мл/л

Глицин 2

Аскорбиновая кислота 3

ИУК ° 0,5

Гумат натрия 50

Сахароза 10 г/л

Агар 5-7 г/л

Укорененные растеньица высаживают в почву и выращивают, как это принято для тропических растений.

По изложенному способу были размножены, укоренены, высажены в почву и выращены до взрослого состояния раувольфии змеиная Rauwolfia serpentine, раувольфия мутовчатая Rauwolfia verticillata, раувопьфия седоватая Rauwolfia canescens, раувольфия рвотная Rauwolfia vonlitori, раувольфия китайская Rauwolfia сЫпепз!з, раувольфия кафрская Rauwolfia caffra. Bce размноженные in vitro растения нормально развивались, цвели и плодоносили, отличались здоровым внешним видом. Других отличий по сравнению с исходными растениями не установлено. В таблице даны результаты микроклонального размножения разных видов раувольфии на основе культивирования пазушных почек стебля, Наиболее легко по изложенному способу размножается раувольфия рвотная, относительно трудно — раувольфия китайская и раувольфия седоватая, Последние два вида для эффективного размножения необходимо выращивать попеременно на приведенных составах питательных сред, Таким образом, предлагаемый способ позволяет размножать разные виды раувольфии. Это особенно важно для тропических, фармакологических ценных видов как при их выращивании в теплице, так и для ускоренного размножения ценных форм с одновременным их оздоровлением от фитопатогенных микроорганизмов.

Формула изобретения

Способ микроклонального размножения раувольфии, включающий эксплантацию пазушных почек на модифицированную питательную среду Мурасиге-Скуга, получение

15 растительного материала, культивирование его до получения растений-регенерантови их укоренение, отличающийся тем, что эксплантацию осуществляют на питательную среду, содержащую макросоли

20 по Мурасиге-Скугу в концентрации, равной

1/3 указанной в прописи, микроэлементы по Мурасиге-Скугу, 5 мл/л Fe-хелата, 2 мг/л глицина, 3-5 мг/л аскорбиновой кислоты, 0,3-0,5 мг/л ИУК, 0,01-0,1 мг/л БАП, 30-50 мг/л гумата натрия, 15-20 г/л сахароэы, 5-7 г/л агара, культивирование растительного материала осуществляют на питательной среде того же состава или на питательной среде, содержащей макросоли по Мурасиге30 Скугу в концентрации, равной 80 от указанной в прописи, микроэлементы llo

Мурасиге-Скугу, 5 мл/л Fe-хелата, 5 мг/л аденина, 1 мг/л кинетина, 0,5-мг/л а-НУК, 1 мг/л тиамина, 3-5 мг/л аскорбиновой кис35 лоты, 30-50 мг/л гумата натрия, 20 г/л сахарозы, 5-7 г/л агара, и укоренение осуществляют на питательных средах того же состава или на питательной среде, содержащей макросоли по Уайту, микроэлементы по

40 Мурасиге-Скугу, 5 мл/л Fe-хелата, 2 мг/л глицина, 3 мг/л аскорбиновой кислоты, 05 мг/л индолилуксусной кислоты, 50 мг/л гумата натрия, 10 г/л сахарозы, 5-7 г/л агара.

1808011

Ьс>ое>роеамме побегов мз почек

Укоремамме побегов

Эмд растению

На среде 1 а среде 2

На среде 1

На среде 3

Эмса мо по бегов вт.

ФЭор>ро

° апм по беги, \

Ь мса ее мо побегов, ют.

Э мсаюе мо побегов >

Вт.

Укоренилось, t

Укоренилось,8

Фборм>е>ом пои,t коремилось, 2 к>

66>524>7

R.аетрепс1ы

R.тетс1с111аса

30 0 ÝS 2>942>8 53

41 0 37 0 74

79,215>6

82,4t4,4

85 > 0> 4 > 6

56> 1з7,8

2Э

56

3,6с3,5

15 6,786,5 32

38 76,916,6 43

18 0 47

66,6зб 2

95,333,2

В.сапевсепе

Э.тое1сот1а

Э.сЫпепз1а

96,451,6

6S 714,7

49, 1 6,9

95>2з2,7

52,2>7 ° 3

96,252,6

97,922,0

39 51, 3>8,0 51 76,5- 5 ° 9 53

R.саФ2те

Фреде 1, среда 2, среда 3 - номеР среди ° порюдке прмеедемию ее состава а тексте заювки, !

Корректор П.Гереши

Составитель В,Кунах

Техред М.Моргентал

Редактор Л. Волкова

Заказ 1394 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва. Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент". г. Ужгород, ул.Гагарина. 101

S2

41

61

S3

37

3S

54

36

94 6>3 7

90,0t5,5

45,7>6>4

96, 1- 1,9

50,0>8 ° 1

Число кмзмегпо со бммх, морвологмчес км мор>>ельмык ппсТо>>>>п >Рас» ттемк в поч ее

Эсего емсемемо, вт

40 87,5t5 2

53 66, 714 ° 3

24 62,519,9

39 82, 1ь6> 1

53 47 2 6 ° 9

63 95>2Я>7