Способ получения активированных онкосфер цестод

 

Изобретение относится к области ветеринарии , а именно к получению активированных онкосфер гельминтов, и может быть использовано при приготовлении биопрепаратов . Цель изобретения - повышение выхода активированных онкосфер для дальнейшего их культивирования In vftro. Способ включает освобождение яиц онкосфер цестод из зрелых члеников, обработку яиц в искусственном желудочном соке при 37,5- 38°С в течение 2 ч и в искусственном кишечном соке, содержащем липазу в количестве 0,01-0,03% и 5-20% свежей желчи крупного рогатого скота, при 37,5-38°С в течение 25 мин. Данный способ позволяет получить 60% активированных онкосфер. 1 табл. ЧиГ Ё

союз советских

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК.. Ы 1813410 А1 (sl)s А 61 В 10/00, G 01 N 33/48

ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕ

ВЕДОМСТВО СССР (ГОСПАТЕНТ СССР) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

2 (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АКТИВИРО(21) 4937428/15 (22) 17.05.91

ВАННЫХ ОНКОСФЕР ЦЕСТОД (57) Изобретение относится к области вете(46) 07.05.93. Бюл. N. 17 (71) Всесоюзный научно-исследовательский ринарии, а именно к получению активироийститут гельминтологии им. К,И. Скрябина ванных онкосфер гельминтов, и может быть (72) Н.Е, Косминков и Т.И. Судьина использовано при приготовлении биопре. (56) 5Ичегаап Р.Н. Studies on the biology of паратов. Цель изобретения — повышение

some tapeworms of the genus Тасп1а, 1.: выхода активированных онкосфер для дальFactors affecting hatching and activation of нейшего их культивирования In vitro. Cnotaemld ova, and зове criteria of their еоб включает освобождение яиц онкосфер

vlablluty//Annals of Тгор!са1 Medicine апб цестод из зрелых члЕников, обработку яиц в

Parasitology, 1954, v. 48, р. 207-215.. искусственном желудочном соке при 37,5-

Heath Р.D., $ауй О,P. lnvltro cultivation .. 38 С в течение 2 ч и в искусственном кишечof Echinococcus granuiosus, Taenia ном соке, содержащем липаэу в количестве

hudatigena, T. ovls, Т. plsiformls and T. 0,01-0,03,4 и5-20g, свежейжелчи крупного . serlalls from oncocphere to cystIk рогатого скота, при 37,5-38 С в течен

larva,//Parasitology, 1970, v. 61, р. 329-343.. 25 мин, Данный способ позволяет получи

60 активированных онкосфер. 1 табл.

Изобретение относится к области биоnorw, в частности к получению активированных онкосфер гельминтов, и может быть использовано при приготовлении биопре. паратов.

Цель изобретения — повышение выхода активированных онкосфер для дальнейшего их культивирования ln vitro с использованием отечественных недорогих компонентов.

Поставленная цель достигается тем, что на стадии обработки онкосфер искусственным кишечным соком в его состав дополнительно вводится липаза и повышается процентное содержание желчи.

Примеры конкретного исполнения.

Пример 1, Зрелые членики цестод помещают в.чашки Петри с физиологическим раствором, с помощью препаровальных игл из них извлекают яйца. Взвесь яиц . в количестве 200 тыс. в физиологическом раство0е переносят в центрифужные пробирки и центрифугируют при 3000 об/мин в течение 3 мин. Надосадочную жидкость сли° ааай вают, а к осадку добавляют ИЖС и плотно © закрывают пробирки пробками. ИЖС имеет следующий состав: пепсина 1 $, кон центри- (h) рованной соляной кислоты 1$ и физиологи- фь, ческого раствора до 100 мл. рН ИЖС а составляет 1,0-1,5, инкубацию проводят в термостате при 37,5-38 С в течение 2 ч.

После обработки в ИЖС пробирки с взвесью яиц снова центрифугируют при 3000 об/мин в течение 3 мин, надосадочную жидкость сливают, к осадку приливают 5 мл ИКС.

Опять плотно закрывают пробирки пробками и помещают их в термостат с температурой 375-38 С на 25 мин. ИКС имеет следующий состав: панкреатина 17ь, бикарбоната натрия 1, трипсина 0,047;, липазы

0,01), свежей желчи крупного рогатого ско1813410 та (КРС) 5 и дистиллированной воды до

100 мл, рН ИКС составляет 8,1 — 8,4. но при соединении с остатком ИЖС снижается до

7,1-7,4. По истечении времени инкубации пипеткой на предметное стекло наносят 5 каплю взвеси яиц (предварительно встрях нув пробирки) и проводят микроскопию при малом (х8) и большом (х40) увеличениях, подсчитывают количество активированных онкосфер. 10

Результаты представлены в таблице.

Пример 2, Получение взвеси яиц и обработку их в ИЖС проводят аналогично примеру 1. После инкубации яиц и центрифугирования, ИЖС сливают, а к осадку добавляют ИКС следующего состава: панкреатина 1, бикарбоната натрия 1, трипсина 0 04, липаэы 0,02, желчи КРС

10 и дистиллированной воды до 100 мл, Дальнейшую обработку и микроскопию 20 взвеси онкосфер проводят аналогично примеру 1.

Результаты представлены в таблице, Пример 3. Получение взвеси яиц и обработку их в ИЖС проводят аналогично 25 примеру 1, После инкубации яиц и центрифугирования ИЖС выливают, к осадку прибавляют ИКС следующего состава: панкреатина 1, бикарбоната натрия 1, трипсина 0,04, липазы 0,03 . желчи КРС 30

20 и дисти ированной воды 100 мл.

Дальнейшую обработку и микроскопию взвеси онкосфер проводят аналогично примеру 1.

Результаты представлены в таблице, 35

Пример 4. Выполняют по известному способу.

Этот способ является прототипом предлагаемого способа получения активированных онкосфер цестод, Яйца цестод 40 первоначально обрабатывают в ИЖС, имеющем следующим состав: пепсина 1, концентрированной соляной кислоты 1 u физиологического раствора до 100 мл, Пробирки закрывают пробками. Инкубацию 45 проводят в течение 1 ч в термостате при

37,5-38 С. По истечении срока инкубации центрифугируют в течение 3 мин при 3000 об/мин, после центрифугирования ИЖС сливают и к осадку добавляют ИКС; пробка- 50 ми плотно закрывают пробирки и помещают их в термастат с температурой 37,5 —.38 С на

30 мин, ИКС состоит иэ панкреатина 1, рбоната натрия 17;, желчи КРС иллированной воды до 100 мл. М ию взвеси онкосфер проводят а о примеру 1.

Результаты представлены в табли

Анализ данных, приведенных в таб зывает, что предложенный спасо ния активированных онкосфер льно повышает процент выхода ованных онкосфер, не тре огостоящих импортных реакти ст в применении, По сравнению с прототипом(2) ак онкосфер повышается в 10 раз. енный способ может усп меняться для получения активир онкосфер в целях их дальнейшего рования In vitro.

Сопоставительный анализ с про позволяет сделать вывод, что зая способ получения активирова осфер отличается от известного в м в состав ИКС липазы и повыш центного содержания желчи.

Анализ известных составов пище ных соков показал, что один из вв в заявляемое решение компонен чь — известен.

Однако ее применение в искусстве ечном соке с панкреатином, бикар натрия и трипсином, но беэ липа спечивает повышения количества ованных онкосфер..

Формула изобретения

Способ получения активированны фер цестод, включающий обработк кусственном желудочном соке и нном кишечном соке, содержащи атин, трипсин, бикарбонат на жую желчь, дистиллированную вод ч а ю шийся тем, что, с целью по выхода онкосфер для дальнейше ьтивирования, в состав искусстве ечного сока дополнительно ввод у при следующем соотношении к тов, мас. :

Панкреатин 1,0

Трипсип 0,04

Бикарбонат натрия 1,0

Липаза 0,01 — 0,04

Свежая желчь 5,0-20,0 бика 5 и дист икроскоп налогичн це. лице, пока б получе значите актиsvip бует дор вов и про тивации Предлож ешно при ованных культиви тотипом вляемый нных онк ведение ением про варитель еденных тов— жел нном киш бонатом зы не обе активир х онкос у яиц в ис искус стве м панкре трия, све у, отли вышения го их кул нного киш ят липаз омпонен

Вода дистиллированная Остальное

1813410

Влияние различного состава ИКС на выход эктивировэнных онкосфер

Составитель Т.Судьина

Техред M. Моргентал Корректор Н.Король

Редактор Л.Волкова

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101

Заказ 1193 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35. Раушская наб., 4/5