Способ получения иммуноглобулинового препарата

 

Изобретение относится к медицине, в частности к иммунологии, и может быть использовано для иммунотерапии и иммунопрофилактики бактериальных и вирусных заболеваний, в том числе ротавирусной инфекции. Цель изобретения - повышение антиротавирусной активности препарата. Спиртовой осадок Б (111 фракция Кона) экстрагируют в растворе хлористого натрия, с целью удаления липопротеидов обрабатывают хлороформом и декстрансульфатом. Осаждение из экстракта иммуноглобулиновой фракции проводят в присутствии 12% полиэтиленгликоля. Антиротавирусная активность препарата при этом увеличивается по сравнению с прототипом в 3 раза (в заявляемом препарате титр антиротавирусных антител 1 : 128000, в прототипе 1 : 32000).

Изобретение относится к медицине, в частности к иммунологии, и может быть использовано для иммунотерапии и иммунопрофилактики бактериальных и вирусных заболеваний, в том числе ротавирусной инфекции. Целью изобретения является повышение антиротавирусной активности препарата. Способ осуществляют следующим образом. К солевому экстракту осадка Б (III фракции Кона) добавляют хлороформ, затем декстрансульфат. Для осаждения фракции иммуноглобулинов добавляют полиэтиленгликоль (ПЭГ) до конечной концентрации 12% П р и м е р. 1 кг осадка Б экстрагируют в десятикратном объеме 0,9%-ного охлажденного раствора хлорида натрия при постоянном перемешивании. Затем смесь доводят до десятикратного объема, хорошо перемешивают и оставляют на ночь (18 ч) при температуре 4-6^оС, рН смеси 5,5±0,3. На следующий день смесь центрифугируют в течение 1 ч при 3000 об/мин на центрифуге с охлаждением. Осадок удаляют, в полученном экстракте определяют содержание белка, которое равно 2% Объем полученного экстракта составляет 10600 мл. К экстракту осадка Б добавляют 10600 мл охлажденного до 4-6^оС хлороформа (10% по объему). Смесь медленно перемешивают в течение 2 ч при температуре 4-6^оС. К смеси экстракт с хлороформом добавляют 233 мл 5%-ного раствора декстрансульфата (конечная концентрация 0,1%). Смесь энергично встряхивают в течение 5-10 мин и центрифугируют при 3000 об/мин на центрифуге с охлаждением до получения прозрачного центрифугата. Осадок удаляют. Объем центрифугата составляет 8 л, содержание белка 0,4% К 8 л экстракта для концентрирования иммуноглобулинов добавляют 50% -ный раствор полиэтиленгликоля (6000 мм) до конечной концентрации 12% при постоянном перемешивании. Осадок иммуноглобулинов отделяют путем декантации и центрифугирования в течение 15-30 мин при 3000 об/мин на центрифуге с охлаждением. Осадок промывают 300-400 мл дистиллированной воды, подкисленной до рН 5±0,2, при температуре 0-2^оС. Осадок иммуноглобулинов растворяют в охлажденном 0,9%-ном растворе хлорида натрия до содержания белка около 5-6% рН=6,3. После растворения осадка препарат центрифугируют 15 мин при 3000 об/мин на центрифуге с охлаждением для удаления нерастворимых примесей. К раствору после центрифугирования добавляют глюкозу до конечной концентрации 2% в качестве стабилизатора. После стерилизующей фильтрации через миллипоровые фильтры 0,2 препарат разливают по ампулам и лиофилизируют. Хранят в сухом темном месте при температуре (6-4^о)С. Срок хранения 3 г. После растворения осадка иммуноглобулинов в готовом препарате определяют титры антител к ротавирусу и количественное содержание различных классов иммуноглобулинов. Титры антител против ротавируса, определяемые методом иммуноферментного анализа (ИФА), составляли в иммуноглобулин (IgM 1:64000), IgG 64000, (IgM+IgG) суммарная активность 1:128000, т.е. антиротавирусная активность в заявляемом препарате в 3 раза выше, чем в прототипе (в прототипе суммарная активность 1:32000). Состав препарата: IgG 68% IgМ 17% IgA 15% Количество иммунологически неактивных примесей составляет не более 3-5% что регламентировано НТД на иммуноглобулин.

Формула изобретения

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ИММУНОГЛОБУЛИНОВОГО ПРЕПАРАТА из крови человека путем солевой экстракции спиртового осадка сыворотки крови, обработки его хлороформом и декстрансульфатом с последующим выделением целевого продукта осаждением в присутствии полиэтиленгликоля, отличающийся тем, что, с целью повышения антиротавирусной активности целевого продукта, осаждение фракции иммуноглобулинов проводят в присутствии 12%-ного раствора полиэтиленгликоля.