Способ выявления антигенов в биологических жидкостях

 

Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии, и может применяться при диагностике инфекционных, аллергических , онкологических заболеваний. Целью данного изобретения является повышение чувствительности выявления антигенов в биологических жидкостях. Цель достигается тем, что в известном способе выявления антигенов в биологических жидкостях , основанном на регистрации антитело - антиген взаимодействий методом лазерной корреляционной спектроскопии, используют антитела, ковалентно связанные с альдоенолдекстраном мол.м. 500000, в концентрации 0,1-0,15 мг антител на 1 мл биологической жидкости, а реакцию взаимодействия антитело - антиген осуществляют при рН 7-8. 1 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (яis G 01 N 33/53

ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕ

ВЕДОМСТВО СССР (ГОСПАТЕНТ СССР) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4835139/14 (22) 15.03.90 (46) 15.08,93; Бюл. ¹ 30 (71) Ленинградский институт ядерной физики им.Б.П.Константинова (72) С.Н.Дробченко, P.Ç,ÂàBðèí, В.А.Носкин, В.С,Омельченко, А.И.Банников, О.И,Кисель и А.А.Яковлев (56) Сопеп В -Bencdek G.Â. Immunch, 1975, 12, 4, 349-351. (54) СПОСОБ ВЫЯВЛЕНИЯ АНТИГЕНОВ В

БИОЛОГИЧЕСКИХ ЖИДКОСТЯХ (57) Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии, и может применяться при диагностике инфекционных, аллергиИзобретение относится к медицине, в частности к иммунологии, и может применяться при диагностике инфекционных, аллергических, онкологических заболеваний.

Целью изобретения является повышение чувствительности выявления антигенов в биологических жидкостях, Поставленная цель достигается тем, что в известном способе выявлении антигенов в биологических жидкостях, основанном на регистрации антитело-антиген взаимодействий методом лазерной корреляционной спектроскопии, используют антитела, ковалентно связанные с альдоенолдекстраном мол. м. 500000, в концентрации 0,1-0,15 мг антител на 1 мл биологической жидкости, а реакцию взаимодействия антитело-антиген осуществляют при рН 7-8, Сущность способа заключается в следующем.

Используют антитела, ковалентно связанные с альдоенолдекстраном мол,м.

» Я,, 1833818 А1 ческих, онкологических заболеваний.

Целью данного изобретения является повышение чувствительности выявления антигенов в биологических жидкостях. Цель достигается тем, что в известном способе выявления антигенов в биологических жидкостях, основанном на регистрации антитело - антиген взаимодействий методом лазерной корреляционной спектроскопии, используют антитела, ковалентно связанные с альдоенолдекстраном мол.м. 500000, в концентрации 0,1 — 0,15 мг антител на 1 мл биологической жидкости, а реакцию взаимодействия антитело - антиген осуществляют при рН 7 — 8. 1 табл, 500000 (антитела-декстран), Концентрация 3. антител 0,1-0,15 мг на 1 мл биологической жидкости.

Из снятых экспериментально спектров исходных декстронов молекулярных масс для использования в заявленном способе декстраны мол,м, 500000 были выбраны с целью регистрации достоверных увеличе- а ний размеров частиц в результате взаимодействий антиген - антитело (связанное с декстраном).

Концентрация используемого в способе антитела, связанного с декстраном, выбрана экспериментально оптимальной 0,1-0,15 мг на 1 мл жидкости из спектров светорассеивания комплексов (агрегатов), образующихся в результате добавления антигена к декстран-антителам в концентрации от

0,05- до 0,20 мгlмл. Избыток антител по сравнению с антигеном необходимом для образования крупных комплексов в результате взаимодействия антитело-антиген.

1833818

Уменьшение концентрации до 0,05 мгlмл уменьшает размеры комплексов, что ухудшает достоверность регистрации. Увеличение концентрации до 0,2 мг!мл нецелесообразно, т.к. не изменяет размеров, образующихся комплексов (no ñðàâíåнию с концентрацией 0,15 мгlмл).

Данные декстран и антитела добавляют к контролируемой биологической жидкости (например, крови), При этом, рН среды поддерживают 7-8, Если в биологической жидкости присутствует антиген к данным антителам (которые в заявляемом способе пришиты к альдоенолдекстранам), что происходит ре- "5 акция антиген-антитело, приводящая к появлению в жидкости крупных агрегатов, которые регистрируют методом лазерной корреляционной спектроскопии, рН среды, при котором осуществляют реакцию вэаи- 20 модействия антитело-антиген, был выбран

7-8, исходя с одной стороны, из условий, благоприятных для взаимодействия антитело-антиген; с другой — из условий, в которых не наблюдается еще деградация используемо- 25 го полисахарида.

Использовались.альдоенолдекстраны. мол.м. 500000, к которым при рН 7 присоединены антитела против овальбумина.

Получение альдоенолдекстрана:

0,428 г 1ча!04 растворяют в 20 мл дистиллированной воды, Раствор охлаждают до 10-13 С и при перемешивании осторожно присыпают 0,496 г декстрана мол.м.

500000. Реакцию проводят при рН 3, при температуре 20 C в течение 24 ч, в темноте.

Затем реакционную массу помещают в проточный диализатор. Диалиэ ведут в течение

5сут при рН 6. Продукт лиофильно высушивают. К 0,2 мл физиологического раство- 40 ра, содержащего декстран-антитело против овальбумина в концентрации (0,5-0,75) мг антител на 1 мл, добавляют 0,8 физиологического раствора (биологической жидкости), 45 содержащего 2 10 овальбумина на 1 мл

-11 (антигена). рН среды поддерживают 0,0t М фосфатн ы м буфером в пределах 7 — 8. Реакцию антиген-антитело (образование комплекса агрегатов) регистрируют методом

Л КС. В заявляемом способе использована гетеродинная схема измерений, в которой регистрируется биение между рассеянным светом и опорной волной. Гетеродинная схема измерений применена потому, что она позволяет получить в 2 раза большую статистическую обработку данных измерений. Математическая обработка результатов эксперимента состоит в том, чтобы по имеющемуся спектру мощности фотона восстановить искомую ФР процессов, происходящих в излучаемой системе по соответствующим лоренцианам с полуширинами, или по временам релаксации.

В таблице представлено сравнение l10 чувствительности на антиген (сыворотка) для различных методов: по экспериментальным данньил и по данным литературы.

Таким образом, при использовании заявляемого способа достигается увеличение чувствительности в 100 †10 раэ. Следует отметить высокую воспроизводимость результатов и специфичность выявления антигенов.

Формула изобретения

Способ выявления антигенов в биологических жидкостях, включающий регистрацию реакций антитело-антиген методом лазерной корреляционной спектроскопии, отличающийся тем,что,сцелью повышения чувствительности, используют антитела, ковалентно связанные с альдоенолдекстраном, мол.м. 500000, в концентрации 0 1-0 15 мг антител на 1 мл биологической жидкости и реакцию взаимодействия антитело-антиген осуществляют при рН 7-8,