Средство для снижения агрегации тромбоцитов

 

Изобретение относится к медицине, в частности к лекарственным веществам, воздействующим на систему крови, а именно к веществам, снижающим агрегацию тромбоцитов . Предлагается использовать М-хлорпроизводные аминои мми но-кислот в качестве средства для снижения агрегации тромбоцитов, 3 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (51)5 А 61 К 31/195

ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕ

ВЕДОМСТВО СССР (ГОСПАТЕНТ СССР) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ПАТЕНТУ

«-СН-СН-С- (1 "1

2 2 2!1 нн — — Ю

Q-N-O

СН=СН

CHIC . СН (1.15), CH-CH

СН2С -OH (1.16);

СН=СН

2 CH-CH (21) 4445509/14 (22) 18.04.88 (46) 15;08.93. Бюл. N 30 (71) 2-.й Московский государственный инсти. тут им.Н.И.Пирогова., Научно-исследова,: тельский физико-химический институт (72) М.А.Мурина, В.И.Сергиенко и Д.И.Ро- щупкин (73) М.А,Мурина, В,И.Сергиенко и Д.И.Рощупкин (56) В,И.Метелица, Справочник кардиолога по клинической фармакологии, М„1987, 293-294, Изобретение относится к медицине, в частности к лекарственным веществам, воздействующим на систему крови, а именно к веществам, снижающим агрегацию тромбоцитов.

Цель изобретения — изыскание отечественного лекарственного- вещества, по эффективности не уступающего тренталу.

Эта цель достигается тем, что для ослабления процесса агрегации тромбоцитов и стимуляции дезагрегации агрегированых тромбоцитов используется соединение, относящееся к N-хлорпроизводным природных Омино- и иминокислот:

N-хлораминокислоты общей формулы где R обозначает Н(1.1), СНЗ (1.2), .. Ж 1834659 АЗ

2 (54) СРЕДСТВО ДЛЯ СНИЖЕНИЯ АГРЕГАЦИИ ТРОМБОЦИТОВ (57) Изобретение относится к медицине, в частности к лекарственным веществам, воздействующим на систему крови, э именно к веществам, снижающим агрегацию тромбоцитов. Предлагается использовать Й-хлорпроизводные амино- и иминокислот в качестве средства для снижения агрегации тромбоцитов, 3 табл.

СН-СНЪ (1 Ъ,1, CH2-(H-СНъ(1.41 !

СНЪ СНъ сН-сн2-снъ (.в) СН2 СН2-СН2-СНз (1.6), СН3

СН2-Он (1.7), СН СНъ(1 8)

0Н аав?ай . СН2-COOH (1.9) сн -с-1чн2 (1.1o)

2 СН2 COOH (1.11) СН2 СН2 С ь Н2(1 12)

О (.л

Сн -СН -СН2 ИН2 (1 13} О

1834б59

N-хлориминокислоты общей формулы

В1-СН СН 2 (,2 ) СН2 СН-СООТГ, N

С1 где R< обозначает Н(2.1) или ОН (2,2).

На фиг,1 представлены типичные кинетические кривые агрегации тромбоцитов кролика в контроле и при дезагрегирующем действии хлораланина; на фиг.2— типичные кинетические кривыв АДФ-индуцированной агрегации тромбоцитов человека при действии хлораланина.

Изобретение поясняется следующими конкретными примерами.

Пример 1. N-Хлор- а -аланин (N-хлораминопропионовая кислота) был приготов10

20 лен следующим образом: (1) готовили раствор аланина в физиологическом растворе в концентрации 200 мМ путем. растворения 0,178 г в 10 мл 0,9 раствора хлористого натрия; 25 (2) при интенсивном перемешивании к

18 мл гипохлорита натрия в концентрации

200 мМ добавляли 2,2 мл полученного раствора (1). При этом молярная концентрация аминокислоты превышает концентрацию гипохлорита примерно на 107;.

Выход N-хлор- а -аланина контролировали спектрофотометрически.

В опытах исследовалась обогащенная тромбоцитами плазма (ОТП) крови кролика.

Для получения ОТП кровь, взятая из краевой вены уха кролика, смешивалась с 3,8 Д раствором цитрата натрия, приготовленном на физиологическом растворе, в соотноше- . нии 9;1 по объему, затем центрифугирова- 40 лась при 100-200g в течении 20 минут при комнатной температуре. Супернатант, представляющий собой ОТП, использовался в дальнейшей работе после 1 часовой. инкубации при комнатной температуре. 45

Бремя работы с ОТП данного выделения не превышало 4 часов с момента забора крови, Агрегация тромбоцитов вызывалась добавлением аденозиндифосфата (АДФ) и регистрировалась турбидиметрическим 50 методом Борна, После введения индуктора агрегации светопропускание образцов ОТП возрастает за счет их агрегации. Количественным показателем способности тромбоцитов к агрегации служила разница 55 светотпропускания (h. Т) образца до и после достижения максимальной агрегации; в дальнейшем будем называть эту величину степенью агрегации:

N-Хлораланин добавляли в объеме О,1 мл на 1 мл ОТП при ее интенсивном перемешивании. При введении N-хлоранилина в

ОТП (примерно эа 1 мин до АДФ) агрегация тромбоцитов ослабляется,Противоагрегационное действие N-хлораланина усиливается при возрастании его концентрации; степень агрегации тромбоцитов снижалась coQTBBTGTвенно примерно с 80 до 20 при повышении конечной концентрации хлораланина от

0,25 до 1 мМ (табл.1), Аналогичным действием обладает Nхлор- Р -аланин.

На фиг.1 представлены типичные кинетические кривые агрегации тромбоцитов, индуцируемой 50 мкМ АДФ (стрелка 3 указывает момент введения индуктора), а обогащенной тромбоцитами плазме кролика, По оси ординат - изменение светопропускания (Т, в относительных единицах). По оси абсцисс — время (t, мин).

Хлораланин в конечной концентрации 1

ММ, введенный в ОТП кролика после полной агрегации клеток (этот момент указан стрелкой 5), оказывает сильное дезагрегирующее действие (кривая 2). В контрол ьн ы и образец

ОТП (кривая 1) в момент полной агрегации тромбоцитов (стрелка 4) добавлялся 0;1 мл физиологического раствора.

Пример 2. По способу, описанному в примере 1, получали N-хлорглицин. Это соединение испытывалось на обогащенной тромбоцитами плазме крови кролика, методом, описанным в примере 1.

Введение N-хлорглицина в концентрации 1 мМ за 1 мин до введения АДФ в ОТП вызывает ингибирование.агрегации тромбоцитов. Степень агрегации составляет

3 + 0,6 по отношению к контролю (в контрольные образцы ОТП вводился глицин в конечной концентрации 1 MM), В используемой концентрации сам глицин не вызывает изменения агрегации тромбоцитов, Пример 3. По способу, описанному в примере 1, получали N-хлорвалин.. Его вводили в обогащенную тромбоцитами плазму крови кролика за 1 мин до добавления 10 мкМ

АДФ. Агрегация регистрировалась способом, описанным в примере 1. В конечной концентрации 1 MM хлорвалин ингибировал агрегацию тромбоцитов примерно на 50, Пример 4, По способу, описанному в примере 1, получали N-хлорлизин. Изучение агрегации тромбоцитов методом, описанным в примере 1, показало, что N-хлорлизин вызывает сильное подавление АДФ-индуцированной агрегации тромбоцитов в составе ОТП кролика. Так, при введении в ОТП 1

1834659

15

25 полной агрегации тромбоцитов человека (стрелка 7 — момент введения 2 мМ хлорала-, нина) наступает частичная деэагрегация 35

40 мМ хлорлизина степень агрегации составляла 9% по отношению к контрольному образцу ОТП, куда добавлялся лизин в конечной концентрации 1 мМ, Пример 5, Получали й-хлорпролин по способу, описанному в примере 1. Агрегация тромбоцитов регистрировалась описанным в примере 1метадом, Иминокислота пролин, добавленная в ОТП кролика в конечной концентрации 1 мМ, не влияет на АДФ-индуцированную агрегацию тромбоцитов. При введении N-хлорпролина в конечной концентрации 1 мМ степень агрегации тромбоцитов составляла 22 2% по отношению к контролю.

fl р и м е р 6. В опытах исследовалось влияние N-хлор- а -аланина на агрегацию тромбоцитов человека. Хлораланин добавляли в ОТП человека до введения АДФ, Агрегация тромбоцитов регистрировалась по описанному выше способу. Получено, что хлараланин значительно снижает максимальную степень агрегации тромбацитов человека (табл.2), На фиг,2 представлены типичные кинетические кривые агрегации тромбоцитов человека, индуцированной 2 мкМ

АДФ (стрелка 5- момент введения индуктора).

Обозначения по осям те же. что и на фиг.1, При действии хлораланина (стрелки 8 и 9- момент введения соответственно 1 и 1,5 мМ хлараланина). Через 1-3 мин после добавления АДФ наблюдается значительная дезагрегация (кривая 3 и 4). При введении хлораланина после (кривая 2). 8 контрольном образце (кривая

1) стрелка 6 указывает момент введения 0,1 мл физиологического раствора, Пример 7. Кролику № 1 в краевую вену уха медленно вводился N-хлараланин в абъеме 6 мл на 1 кг массы. Концентрация й-хлораланина в вводимом растворе составляла

10 мМ. Исследовали агрегацию тромбоцитов по описанному выше методу. Через 5 мин, 1 и 24 часа после окончания введения хлораланина степень агрегации составляла около 90, 40, 70% от степени агрегации до введения препарата.

В контроле (вливание аланина в физиологическом растворе в концентрации10мМ, в объеме 6 мл на 1 кг массы) степень агрегации тромбоцитав через 5 мин и 24 ч составляла около 90% степени агрегации да вливания, fl р и м е р 8, Кролику ¹ 2 в краевую вену уха вводился N-хлораланин (в количестве, как в примере 7). Агрегация тромбацитов в

55 обогащенной трамбоцитами плазме измеряли через 15 мин, 1 и 24 часа; ее степень составляла соответственно около 65, 35 85%.

Пример 9, Кролику №№ 3 в краевую вену уха вводился N-хлораланин (в количестве, как в примере 7), Способность тромбоцитов к агрегации в ОТП измеряли через 30 мин и 24 часа после окончания введения

N-хлораланина. Степень агрегации составляла соответственно около 40 и 70% от степени агрегации до введения препарата, Таким образом, внутривенное вливание хлораланина вызывает быстрое и резкое ослабление агрегации тромбоцитов, Пример 10. По способу, описанному в примере 1, получали N-хлорпроизводные различных классов аминокислот. Их противоагрегационная активность испытывалась на обогащенной тромбоцитами плазме крови кролика методом, описанном в примере

1. Значительное подавление агрегации имеет место при действии хлорпраизводных многих аминокислот (табл.3). Исключением являются хлорпраизводные триптофана и серосодержащих аминокислот. Их слабая противаагрегацианная способность обусловлена тем, что хлораминовая группа реагирует с индольным кольцом или с атомами серы, Это следует из того, что Й-хлараланин в смеси с триптофаном или метионином утрачивает способность подавлять агрегацию трамбацитав (табл,3).

Таким образом, в качестве средства для ослабления агрегации трамбоцитав могут быть использованы N-xnopnpovaaopave всех природных аминокислот кроме триптофана и серосадержащих аминокислот.

Сейчас в клинике с целью ослабления агрегации тромбоцитав используется трентал. Трентал обладает умеренной пративоагрегацианнай способностью. У многих пациентов ан слабо подавляет агрегацию тромбацитав. В наших опытах степень агрегации тромбацитов после введения трентала в ОТП кролика в конечной концентрации

0,7 мМ (в такой концентрации трентал используется в клинике) составляла 84 6% от контроля.

Более сильный эффект подавления агрегации тромбоцитов получается при действии ряда N-хлараминакислат (см.примеры

1,2,7).

Таким образам, предлагаемое средство имеет важное народно-хозяйственное значение.

Формула изобретение

Применение й-хларпроизвадных амина- и иминокислот в качестве средства для снижения агрегации тромбоцитов.

1834659

Табл ица1

Влияние N-хлор- гт -аланина в разных концентрациях на агрегацию тромбоцитов кролика в составе ОТП, Агрегация индуцировалась 10 мкМ АДФ.

Таблица2

Влияние N-хлор- а -аланина на агрегацию тромбоцитов человека в составе ОТП, Агрегация индуцировалась 10 мкМ АДФ.

Таблица3

Влияние N-хлораминокислот на агрегацию тромбоцитов в ОТП. Агрегация индуцировалась

10 мкМ АДФ.

Степень агрегации, (, от контроля

Соединение

Используемая концентрация, мМ

Номер формулы

Название

100

N100

N—N—

N—

N—

N—

N—

N—

NN—

N—N—

N—

N—NN—

N—хлорлейцин хлоризолейцин хлорнорлейцин хлорсерин хлортреонин хлораспарагиновая кислота хлораспарагин хлорглютаминовая кислота хлорглютамин хлораргинин хлорфенилаланин хлортирозин хлороксипролин хлортриптофан хлорменионин хлораланин в смеси с триптофаном (I мМ) хлораланин в смеси с метионином (1мМ) 1,4

1,5

1,6

1,7

1.8

1,9

1,10

1,11

1,12

1,14

1,15

1,16

2,2

76 ":4

61 4

74 -4

54 ч 11

57+ 3

66+17 .48 -3

69 13

74 -4-10

44 ч-6

53+7

70 13 .78+8

93 7

88 1

1

1

0,8

1

1

0,5

0,5

1834659 иа

Фиi. g

Составитель М.Мурина

Техред М.Моргентал Корректор О Мандзич

Редактор

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина. 101

Заказ 2693 Тираж .Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб.. 4!5