Гидробромид 1-ацетил-2-изотиоуреидо-3-индолинона, защищающий печень от отравления четыреххлористым углеродом

 

Использование: в качестве вещества, защищающего печень от отравления четыреххлористым углеродом. Сущность изобретения: продукт: гидробромид 1-ацетил-2-изотиоуреидо-3-индолинона, т. пл. 256С (с разл). Реагент 1: 1-ацетил-3-индолинон. Реагент 2: элементарный бром. Реагент 3: тиомочевина. Условия реакции: в среде диоксана. 2 табл.

Изобретение относится к новому соединению ряда тиокарбамидных производных индола, конкретно к гидробромиду 1-ацетил-2-изотиоуреидо-3-индолинона формулы I _HBr защищающему печень от отравления четыреххлористым углеродом.

Указанное свойство позволяет предполагать возможность применения этого соединения для предотвращения и лечения у людей острых ингаляционных отравлений парами четыреххлористого углерода.

Значительный рост использования для различных нужд технических жидкостей сопровождается ростом острых отравлений. Хлорированные углеводороды жирного ряда обладают специфическим цитотоксичеким действием, а отравления ими нередко ведут к смертельному исходу. Особую опасность могут представлять хлорированные углеводороды в аварийных ситуациях, когда в силу их высокой летучести ингаляционным отравлениям может подвергнуться большое количество людей.

У всех больных наблюдается тяжелое поражение печени, вплоть до жирового перерождения органа. Широкое применение четыреххлористого углерода в промышленности, сельском хозяйстве и военном деле делает актуальным поиск фрмакологических средств, защищающих организм от воздействия четыреххлористого углерода.

Для ситуации процессов регенерации печени применяются производные пуриновых и пиримидиновых оснований - рибоксин и оротат калия (аналог II) (1), однако их активность недостаточна.

Наиболее близким структурным аналогом заявляемого соединения, содержащем одновременно индольное ядро и тиокарбамидный фрагмент, является N-(1-ацетилиндол-3-он-2-ил) тиокарбамид (аналог III). Известно, что аналог III - наиболее активное соединение, обладающее способностью защищать печень от отравления четыреххлористым углеродом, однако его активность недостаточная (2).

Целью изобретения является создание нового соединения ряда тиокарбамидных производных индола, более эффективно защищающего печень от отравления четыреххлористым углеродом.

Поставленная цель достигается химической структурой нового соединения формулы 1 - тиокарбамидного производного индола, обладающего вышеуказанным свойством.

Заявляемое соединение представляет собой белое кристаллическое вещество, на холоду трудно растворимое в воде, этиловом и изопропиловом спиртах, легко растворимо в метиловом спирте, диметилсульфоксиде и диметилформамиде, при кипении легко растворимо в этиловом спирте. Вещество неустойчиво к нагреванию как в растворах, так и в кристаллическом состоянии. Элементный анализ и спектральные характеристики приведены в примере.

Заявляемое соединения получают по следующей схеме. 1-Ацетил-3-индолинон бромируют элементарным бромом в среде диоксана с последующей обработкой образующегося 1-ацетил-2-бром-3-индолинона тиомочевиной. П р и м е р . К раствору 1 г (5,717 ммоль) 1 -ацетил-3-индолинона в 14 мл диоксана при 20^оС прибавляют раствор 0,29 мл (5,728 ммоль) брома в 14 мл диоксана, выдерживают в течение 1 мин, прибавляют приготовленный при нагревании и охлажденный до 25^оС пересыщенный раствор 0,52 г (6,84 ммоль) тиомочевины в 17 мл изопропилового спирта и кипятят с обратным холодильником 5 мин. Фильтруют в горячем состоянии, осадок промывают изопропиловым спиртом 2 х 1 мл), диоксаном (2 х 1 мл) и эфиром (4 х 2,5 мл), сушат в вакууме над фосфорным ангидридом.

Получают 1,25 г (66,4 % ) гидробромида 1-ацетил-2-изотиуреидо-3-индолинона в виде серовато-белых кристаллов со слабо розовым оттенкмо, т. пл. 525^оС (разл. ). В условиях перекристаллизации, например из спирта, вещество подвергается превращению. Для аналитических целей полученное вещество перемешивают с 7 мл метилового спирта, фильтруют, осадок промывают метиловым спиртом (2 х 2 мл. Фильтрат и промывную жидкость объединяют, перемешивают с 0,38 г активного угля и фильтруют. К полученному фильтрату прибавляют 50 мл эфира, выпавший осадок отфильтровывают, промывают эфиром (4 х 2 мл) и сушат.

Получают 0,5 г заявляемого соединения в виде белых кристаллов, т. пл. 256^оС (разл. ). Вещество однородно по данным ТСХ на силуфоле в УФ-254.

Пpи смешивании 5-6 мг соединения 1 с 1 мл 5 н. раствора едкого натра через 30 мин возникает интенсивная синяя окраска вследствие образования индиго (качественная реакция).

Найдено, % : С 39,77, Н 3,92; N 12.89; S 10.00 С₁₁Н₁₁N₃O₂ ˙ HBr.

Вычислено, % : С 40,01, Н 3,66; N 12,73; S 9,71.

Спектр ПМР в Д₂O, 100 МГц, δ м. д. : 2,44 с (3Н, СН₃), 6.11 с (1Н, Н²), 7.15-7.61 м (4Н, Ar); в СД₃ОД: 2.42 с (3Н, СН₃), 6.06 с (1Н, Н²), 7.20-7.66 м (4Н, Ar).

Изучение биологической активности заявляемого соединения 1.

Опыты выполнены на крысах-самцах массой 140-170 г. Четыреххлористый углерод вводили подкожно ежедневно в 50 % -ном молярном растворе в течение 4 дней подряд в количестве 0,4 мл/100 г массы. Одновременно с ССl₄ вводили соединение 1 в дозе 50 мг/кг внутрибрюшинно. Препарат сравнивали с известным гепатопротектором П, а также соединением III. Рибоксин и оротат калия вводили в дозе 100 мг/кг, аналог III - в дозе 50 мг/кг.

Учитывали, что клиническая картина отравления ССl₄ развивается медленно. Основные симптомы тяжелой интоксикации проявляются только к концу 2-х суток и через 4-7 сут приводят к летательному исходу. У всех больных наблюдается тяжелое поражение печени вплоть до жирового перерождения органа. Оценку защитного действия соединения 1 и аналогов II и III проводили, исследуя активность специфической для печени аланиновой трансферазы (АлАТ) и аспартатаминотрансферазы (АсАТ) в сыворотке крови. Кроме того, оценивали продолжительность гексаналового сна, отражающего степень восстановления микросомальной системы печени, метаболизирующей ксенобиотики. Изменение активности АлАТ и АсАТ в сыворотке крови, а также увеличение продолжительности гексаналового сна свидетельствует о повреждающем действии ССl₄ на клеточные мембраны и органеллы клетки. Результаты опытов приведены в табл. 1.

Полученные данные свидетельствуют о том, что применение соединения 1 в 1,59 раза уменьшает концентрацию АлАТ, в 1,25 раза концентрацию АсАТ и сокращает в 1,54 раза продолжительность гексаналового сна. Таким образом, по способности защищать печень от отравления четыреххлористым углеродом с учетом совокупности показателей и влияния препарата на цитолиз, соединение 1 превосходит известное средство II - смесь рибоксина и оротата калия, а также аналог III.

Острую токсичность определяли на белых нелинейных мышцах-самцах массой 18-22 г по известной методике (3). Изучаемое соединение вводили внутрибрюшинно однократно в виде суспензии в воде с добавлением Твина-80. В группу для введения одной дозы включали 2 особи. Общее число групп было равно четырем. Наблюдение за состоянием экспериментальных животных проводили в течение 3 сут. Гибель подопытных животных происходила в первые 48 ч. Выжившие животные затем по внешнему виду и поведению не отличались от контроля.

О токсичности заявляемого соединения 1 судили по величине средней летальной дозы, рассчитанной по методу Прозоровского.

Экспериментальные данные, положенные в основу расчета средней летательной дозы, представлены в табл. 2.

По таблице в работе (3), определяем, что искомая L D₅₀ - 1030 (880-1180). Доверительные границы с 95 % вероятностью - (676-1384).

t= = 6,86, следовательно, уточненная средняя достоверна ( 6,86 > >2,36).

Полученный результат свидетельствует о том, что заявляемое соединение можно отнести к малотоксичным веществам, причем оно менее токсично, чем аналог III. Заявляемое соединение I характеризуется достаточной фармакологической широтой. (56) Рычнев В. Е. , Фролов В. М. Стимуляторы регенерации в терапии вирусного гепатита и других заболеваний печени. Изд. Воронежского университета, 1984, с. 23.

Авторское свидетельство СССР N 1736149, кл. C 07 D 209/36, 1990.

Прозоровский В. Б. и др. "Экспресс-метод определения средней эффективной дозы и ее ошибки", Фармакология и токсикология, 1978, N 4, с. 494-502.

Формула изобретения

Гидробромид 1-ацетил-2-изотиоуреидо-3-индолинона формулы защищающий печень от отравления четыреххлористым углеродом.

РИСУНКИ

Рисунок 1