Среда для разбавления и хранения спермы хряков

 

Использование: искусственное осеменение свиней. Сущность изобретения: с целью увеличения сроков хранения спермы до 5 суток и более, повышения санирующего эффекта среды биологической полноценности и оплодотворяющей способности сперматозоидов, а также с целью повышения плодовитости и сохранности приплода в среду включены следующие ингредиенты (на 1000 мл дистиллированной воды), г: глюкоза 53,0; трилон Б 3,5; натрий двууглекислый 1,0; натрия цитрат 3,7; ампицилина натриевая соль 0,35-0,7; гентамицина сульфат 0,35-0,2; полимиксина сульфат 0,025; левамизол гидрохлорид или камизол 0,06-0,15. 1 з. п. ф-лы, 2 табл.

Изобретение относится к биологии, преимущественно к зоотехническому методу воспроизводства свиней, и может найти широкое применение на племпредприятиях, свинокомплексах и других хозяйствах свиноводческого направления для хранения половых клеток спермы вне организма в специальных синтетических средах при искусственном осеменении свиней.

Известно ряд разбавителей спермы хряков: глюкоза-хелато-цитратный (а.с. N 183901, 1964); глюкоза-хелато-цитратно-сульфатный (ГОСТ -17637 72); "Среда для разбавления и хранения спермы хряков" (а.с. 1466044,1986), которая нами разработана и зарегистрирована Государственным Комитетом СССР по делам изобретений и открытий товарным знаком "БИОКОНСАН" (с. N 82839, 1987), Включение впервые нами в 1961-1963 гг. в состав разбавителя Трилона Б (хелатон, селектон, комплексон III, этилендиаминотетраацетат -Na₂ЭДТА) позволило значительно улучшить качество и повысить эффективность среды и, главное, хранить (консервировать) сперму при комнатной температуре в течение 2-3 суток без снижения оплодотворяющей способности спермиев (а.с. 183901, 1964).

Положение дел в мире с разбавителями для хранения спермы хряков изложено в недавно вышедшей в свет книге А.Гордона "Контроль воспроизводства сельскохозяйственных животных". Перевод с английского. Москва ВО "Агропромиздат", 1988, с.290. В этой книге отмечается, что из разбавителей, применяющихся в современном производстве, наиболее широко известным является разбавитель на основе этилендиаминотетраацетата. Этот разбавитель называется "Киевским" или разбавителем "Мерка" и "Варома", препарат удобен простотой приготовления и возможностью использования разбавленной им спермы до 3 дней без снижения оплодотворяющей способности и будущей плодовитости. И далее отмечается: ". с 1970 г. Киевский разбавитель заменил иллинойский и в Великобритании и других странах Западной Европы стали применять преимущественно его". Разработанный нами еще в 60-е годы ГХЦ разбавитель автор книги называет "Киевский", "Мерка" или "Варома", т.е. по названию фирм, производящих эту среду, например в Германии фирма " Merck".

Целью данного изобретения является удлинение срока хранения, повышения биологической полноценности и оплодотворяющей способности сперматозоидов, увеличение плодовитости cвиноматок, а также повышения защитной способности свиноматок и рождаемых поросят с более равной и высокой живой массой.

Для достижения указанной цели в известную среду по авт. св. N 1466044 дополнительно вводят природные антибиотики и иммуномодуляторы, например Левамизол или Камизол.

Известно, что санирующий эффект (обезвреживание) зависит от дозы антибиотика чем доза выше, тем выше эффект. Однако увеличение дозы привoдит не только к усилению антимикробного действия препарата, но и к повышению его токсичности (3). У различных животных различная видовая чувствительность половых клеток к препаратам. Например, на спермиях быка незаметна токсичность стрептомицина и комбинированной смеси под названием спермосан -3 в дозах 75-100 тыс. ед. в то время как для спермиев хряка и жеребца безвредная доза смеси этих препаратов составляет только 30 тыс.ед./100 мл. Увеличение дозы санирующих препаратов снижает выживаемость спермиев на 20% заметно снижается и оплодотворяемость животных (3). Поэтому количество пенициллина и стрептомицина (в том числе и спермосана) в средах, согласно инструкций и ГОСТА, снижено с 400-500 тыс.ед. до 250-300 тыс.ед. на 1000 мл среды. Однако при пониженных дозах этих препаратов, наряду с уменьшением токсичности, снижается и санирующий эффект.

В этой связи мы испытали комбинацию полусинтетического антибиотика (ампициллина натриевая соль) с природными антибиотиками (гентамицина сульфат, канамицина сульфат, сигмамицин, полимиксина сульфат). Такие комбинации позволяют снизить в разбавителе количество каждого из антибиотиков, не снижая качества синтетической среды. При таком сочетании антибиотиков увеличились сроки хранения спермы.

Из известных сред, используемых для разбавления и хранения спермы хряков, по составу ингредиентов наиболее близкой к заявляемой среде является среда по авт.св. N 1466044 (1986), которую мы избрали в качестве прототипа: Глюкоза,г 55,0 (55-60) Трилон Б,г 3,5 (2,45-3,5) Натрий двууглекислый,г 1,0 (0,8-1,0) Натрия цитрат, г 3,7 (1,85-3,7) Ампициллина натриевая соль, г 0,7 (0,5-5,0) Вода дистиллированная, мл 1000 Результаты влияния сред (по примерам 1,2) с полусинтетическим и природными антибиотиками на выживаемость спермиев приведены в табл.1.

Пример (рецепт) 1. Среда характеризуется следующим составом на 1000 мл дистиллированной или бидистиллированной воды, г: Глюкоза 55,0
Трилон Б 3,5
Натрий двууглекислый 1,0
Натрия цитрат 3,7
Ампициллина натриевая соль 0,35
Гентамицина сульфат 0,35
Полимиксина сульфат 0,025 (250000 ЕД)
Пример (рецепт) 2. Среда характеризуется следующим составом на 1000 мл дистиллированной или бидистиллированной воды, г:
Глюкоза 53,0
Трилон Б 3,5
Натрий двууглекислый 1,0
Натрия цитрат 3,7
Ампициллина натриевая соль 0,7
Гентамицина сульфат 0,2
Полимиксина сульфат 0,025
Во второй серии лабораторных исследований мы впервые изучили влияние иммуномодуляторов (левамизол, камизол), включенных в разбавитель, на выживаемость спермиев с целью последующего применения этой среды для разбавления и хранения спермы по примеру (рецепту)3.

Пример (рецепт)3. Среда характеризуется следующим составом на 1000 мл дистиллированной или бидистиллированной воды, г:
Глюкоза 55,0
Трилон Б 3,5
Натрий двууглекислый 1,0
Натрия цитрат 3,7
Ампициллина натриевая соль 0,35-0,7
Гентамицина сульфат 0,35-0,20
Полимиксина сульфат 0,025 (250000 ЕД)
Иммуномодулятор, например левамизол или камизол, 0,06-0,15
Как известно, левамизол (декарис, Г.Рихтер, Венгрия), тетрамизол, камизол или другие препараты этого ряда обычно рекомендуют в качестве противоглистного средства или при инфекционных и злокачественных заболеваниях, а также при иммунодефицитном состоянии. Эти препараты применяют как в медицине, так и ветеринарии для лечебных целей, назначая их внутрь или внутримышечно. Применение препаратов этой группы в синтетических средах, предназначенных для разбавления и хранения спермы, нам неизвестно.

В лабораторных экспериментах нами была поставлена цель изучить оптимальные дозы иммуномодулятора в средах для хранения спермы и влияние его на метаболические процессы половых клеток, а в производственных опытах путем введения в рога матки разбавленной спермы с добавками иммуномодулятора интересовала возможность всасывания последнего через слизистую оболочку полового тракта в организм животного и влияние его на оплодотворяемость, плодовитость и резистентность свиноматок и приплода.

Результаты второй серии лабораторных исследований также приведены в таблице 1 (по примеру рецепту 3).

Из таблицы 1 видно, что новые среды (в том числе из иммуномодулятором) способствовали увеличению сроков выживаемости спермиев на уровне 60% и более примерно на двое суток.

После установления оптимальных доз антибиотиков и иммуномодуляторов в среде и получения положительных результатов в лабораторных экспериментах были проведены научно-производственные опыты. В среды (примеры-рецепты 1 и 2) добавляли иммуномодулятор, например левамизол или камизол (пример 3). В качестве контроля брали известную среду (прототип) без добавки иммуномодулятора.

В связи с тем, что нами планировалось, при получении положительных результатов в этом опыте, направить в Госкомизобретений материалы на предмет изобретения и выдачи патента мы рецепт не раскрывали, т.е. никаких ингредиентов в средах не оглашали. Навески сред в полиэтиленовых пакетах готовили в лаборатории и доставляли в совхоз-комбинат. Известная среда под названием "Биоконсан" являлась контролем, а новую среду с добавкой иммуномодулятора (левавизол или камизол) доставляли в хозяйство под условным названием "Биоконсан -2" (по примеру 3).

Спермой, разбавленной этими средами, было осеменено 1346 свиноматок (по 673 животных в контрольной и опытной группах).

Как показывают данные табл.2, в опытной группе оплодотворяемость свиноматок была на 3,6% выше, а плодовитость на 1,1 поросенка на опорос больше, чем в контрольной группе, в которой использовали сперму, разбавленную известной средой. Следует отметить, что количество хорошо развитых поросят в помете с живой массой не менее 1000 г было больше на 0,9 поросенка.

Формула изобретения

1. Среда для разбавления и хранения спермы хряков, включающая глюкозу, натрий двууглекислый, натрия цитрат, антибиотики и дистиллированную воду, отличающаяся тем, что дополнительно содержит трилон Б и иммуномодулятор, причем в качестве антибиотиков среда содержит ампициллина натриевую соль, гентамицина сульфат и полимиксина сульфат при следующем соотношении компонентов на 1000 мл дистиллированной воды, г:
Глюкоза 55,0
Трилон Б 3,5
Натрий двууглекислый 1,0
Натрия цитрат 3,7
Ампициллина натриевая соль 0,35-0,70
Гентамицина сульфат 0,35-0,20
Полимиксина сульфат 0,025
Иммуномодулятор 0,06-0,15
2. Среда по п.1, отличающаяся тем, что в качестве иммуномодулятора содержит левамизол или камизол.

РИСУНКИ

Рисунок 1, Рисунок 2