Штамм бактерий bacillus subtilis, несущий свойство антибиотикорезистентности, используемый для получения препарата "бактиспорин"

 

Использование: биотехнология, пробиотик, антибиотикоустойчивый штамм Bacillus subtilis 3Н, производство лечебно-профилактических препаратов, дисбактериоз, ферментная недостаточность органов пищеварения, гнойные инфекции, пищевая аллергия. Сущность изобретения: получен антибиотикоустойчивый штамм Bacillus subtilis ГИСК N 248. Размеры клеток 1,5-4,0 мкм на 0,4-0,6 мкм, клетки грамположительны, капсулы не образуют, образуют споры, тип дыхания аэробный. Растет на различных питательных средах. Расщепляет глюкозу, сахарозу, маннит, мальтозу. Гидролизует крахмал, казеин, мочевину, пептонизирует молоко, разжижает желатин. Не расщепляет тирозин. Не образует гемолизин и фибринолизин. Восстанавливает нитраты до нитритов. Утилизирует цитрат. Образует аммиак и сероводород, не образует индол. Подавляет рост стафилококков, протея, клебсиелл, кишечной палочки, дрожжевых грибов, стрептококков и синегнойной палочки. Штамм обладает устойчивостью к полимиксину, рифампицину, малочувствителен к пенициллину, линкомицину, стрептомицину. Штамм может быть использован как производственный для получения препарата из группы пробиотиков, который можно будет применять совместно с антибиотиками. 3 табл.

Изобретение относится к области биотехнологии, в частности к производству лечебно-профилактических препаратов, применяемых при расстройствах желудочно-кишечного тракта, дисбактериозах, ферментной недостаточности органов пищеварения, гнойных инфекциях, пищевой аллергии.

Известен штамм Bacillus subtilis 534, используемый для получения препарата "Споробактерин", который предназначен для профилактики и лечения заболеваний желудочно-кишечного тракта, дисбактериозов.

Однако известный штамм чувствителен к антибиотикам за исключением полимиксина. Это свойство штамма ограничивает сферу применения препарата при тяжелых формах гнойно-воспалительных заболеваний, лечение которых требует совместного введения бактериального препарата и антибиотика.

Целью изобретения является создание нового антибиотикоустойчивого штамма для получения препарата вышеуказанного назначения.

Технический результат, получаемый от использования нового штамма выражается в повышении эффективности лечения за счет возможности сочетанного применения бактериального препарата с антибиотиками. Штамм Bacillus subtilis 3Н депонирован в коллекции ГИСК им. Л.А.Тарасевича под N 248. Штамм Bacillus subtilis 3Н получен в результате многократного пересева штамма Bacillus subtilis 534 через питательный агар с возрастающей концентрацией антибиотика.

Штамм Bacillus subtilis 3Н характеризуется следующими свойствами.

Культурально-морфологические свойства.

Палочки. Величина клеток односуточной агаровой культуры (1,5-4,0)х(0,4-0,6) мкм, часто расположены в цепочках. Клетки окрашиваются положительно по Граму, капсулы не образуют, образуют внутренние центральные споры.

Колонии на мясо-пептонном агаре чаще, шероховатые с фестончатыми краями от белого до серого и бледно-розового оттенков, реже гладкие с ровными краями.

На мясо-пептонном бульоне при 37^oС через 18-24 ч образуют пленку на поверхности и придонный осадок.

Физиологические признаки.

Аэроб, оптимальные условия роста при температуре 37^oС и рН 6,0-7,5.

Биохимические свойства.

Расщепляет глюкозу, сахарозу, маннит, мальтозу. Дает положительную реакцию Фогес-Проскауэра на ацетоин. Гидролизует крахмал, казеин, мочевину, пептонизирует молоко, разжижает желатин. Не расщепляет тирозин. Продуцирует каталазу, лецитиназу. Не образует гемолизин и фибринолизин. Восстанавливает нитраты до нитритов. Утилизирует цитрат. Образует аммиак и сероводород, не образует индол.

Антагонистические свойства.

Подавляет рост стафилококков, протея, клебсиелл, кишечной палочки, дрожжевых грибов, стрептококков и синегнойной палочки.

Штамм обладает устойчивостью к полимиксину, рифампицину, малочувствителен к пенициллину, линкомицину, стрептомицину.

Сравнительные данные по антибиотикочувствительности и антагонистической активности штаммов Bacillus subtilis 3Н и известного представлены в табл. 1 и 2 (соответственно).

Данные табл. 1 показывают, что новый штамм обладает высокой антибиотиокоустойчивостью Как видно из табл. 2, антагонистическая активность штамма Bacillus subtilis 3Н становится более высокой по сравнению с исходным штаммом Bacillus subtilis 534.

Использование штамма иллюстрируется следующими примерами.

Пример 1. Для выращивания штамма Bacillus subtilis 3Н используют синтетическую среду, содержащую пептон, мальтозу, минеральные соли и микроэлементы.

Штамм Bacillus subtilis 3Н высевают на матрасы с агаризованной синтетической питательной средой, содержащей пептон, мальтозу, минеральные соли, микроэлементы и помещают в термостат при 37^oС на 18-20 ч. Далее смытую с агара культуру засевают в ферментер для подращивания на среде того же состава в объеме 5 л и растят 3-4 ч до достижения культурой фазы экспоненциального роста. Эту культуру используют в качестве посевного материала для засева реактора "Биор" вместимостью 100 л. Выращивание проводят в течение 16-20 ч до перехода культуры в споровую форму. Полученную бактериальную массу концентрируют до (100-120)·10⁹ кл/мл, отмывают от питательной среды стерильным 0,9% -ным раствором хлорида натрия. Разливают в ампулы по (1,0±0,1) мл и высушивают. Полученный препарат назван "Бактиспорин", представляет собой смесь живых вегетативных клеток и спор.

Препарат "Бактиспорин" безвреден, не содержит посторонней микрофлоры. Остаточная влажность не превышает 3,5% Обладает специфической активностью: количество клеток в одной дозе препарата (1-5)·10⁹ кл/мл, антагонистическая активность (зона задержки роста тестовых штаммов микроорганизмов) составляет 25-40 мм.

Таким образом, полученный нами штамм может быть использован как производственный для получения препарата из группы пробиотиков, который можно будет применять совместно с антибиотиками.

Формула изобретения

Штамм бактерий Bacillus subtilis ГИСК N 248, несущий свойство антибиотикорезистентности, используемый для получения препарата "Бактиспорин".

РИСУНКИ

Рисунок 1, Рисунок 2