Средство и способ повышения противоопухолевой активности и уменьшения побочных действий цитостатической терапии

 

Изобретение относится к медицине, а именно, к терапии и онкологии и касается средств и способов модификации цитостатической терапии, заключающейся в повышении противоопухолевой активности и уменьшении побочных действий. Предложено средство их экстракта растения лианы Uncaria tomentosa, (Una degata) и способ модификации цитостатической терапии. Способ и средство высокоэффективны, позволяют снизить общую и гематотоксичность цитостатиков, а также усилить специфическую активность. 2 с. и 3 з.п. ф-лы, 3 ил., 8 табл.

Изобретение относится к медицине, а именно, к терапии и онкологии и касается средств и способов модификации цитостатической терапии.

Известен способ модификации цитостатической терапии, включающий введение препарата растительного происхождения водного экстракта высшего дереворазрушающего гриба ложного трутовика. Препарат снимает лейкопению и анемию, вызванные введением 5-фтор-урацила, а также увеличивает продолжительность жизни животных при введении летальной дозы 5-ФУ. В то же время, препарат не обладает противоопухолевой активностью и не модифицирует специфический противоопухолевый эффект цитостатической химиотерапии (8). Сущность изобретения состоит в том, что для модификации цитостатической терапии используют средство, содержащее экстракт из коры лианы Uncaria tomentosa (лат.), Una degata (исп. ) "Кошачий коготь" (препарат КК) (русск.) и адекватный наполнитель при следующих соотношениях компонентов в расчете на одну капсулу (в г).

Экстракт Uncaria tomentosa 0,002 Наполнитель 0,21 Причем введение препарата осуществляют в эквитерапевтических дозах.

Для снижения общей токсичности цитостатиков препарат КК вводят до и/или после цитостатика курсами различной длительности.

Для уменьшения гематотоксичности препарат КК вводят на 1 3 сутки после цитостатика или однократно на пике цитопении.

С целью удлинения сроков ремиссии проводят совместную терапию цитостатиком и препаратом КК курсом 5 7 дней с коррекцией дозы последнего.

Существенными признаками предложения следует считать состав препарата, использование его по новым показаниям, а также режимы и дозы введения.

Эксперименты показали, что именно использование средства заявленного состава и в заявленных режимах и дозах позволяет максимально проявиться его модифицирующей активности при цитостатической терапии.

Экстракт в составе заявленного средства получают из коры лианы гигантских размеров Unceria tomentosa (лат.), Una degata (исп) "Кошачий коготь" (рус), произрастающей в тропической зоне Южной Америки.

В Перу это лекарство широко используется в народной медицине.

В настоящей работе применяли экстракт КК, полученный лабораторией "Quimica Jnteramerikana" Перу.

Исключительное право использования и распространения этого продукта в России принадлежит Центру народной медицины "Юнона".

Экстракт ункарии сухой представляет собой аморфный порошок от светло-коричневого до коричневого цвета со специфическим запахом и горьким, вяжущим вкусом. Гигроскопичен, слегка комкуется.

Получение сухого экстракта из коры ункарии волосистой состоит из следующих стадий: промывка и измельчение сырья, водная экстракция сырья, фильтрация и сушка путем распыления с применением обволакивающих веществ, которые сохраняют его качества.

Экстракт используется для приготовления капсул заявленного состава.

Капсулы препарата КК рекомендованы к медицинскому применению решением Фармакологического Комитета МЗ РФ.

Для раскрытия сущности изобретения нами представлены результаты экспериментальных исследований по изучению модифицирующего действия препарата КК.

1. Изучение токсико-модифицирующей активности препарата КК.

1.1. Влияние на токсичность цитостатиков.

Опыты проведены на мышах гибридах, самцах массой тела 20 24 г. Всего в исследованиях использовано более 300 мышей. Циклофосфан вводили внутрибрюшинно в 2% концентрации в дозе 400 мг/кг однократно.

Препарат КК вводили в желудок в виде 0,4% взвеси в крахмальном клейстере в дозе 100 мг/кг однократно.

Результаты экспериментов представлены в табл. 1.

Как видно из представленной табл. при одновременном введении циклофосфана и препарата КК токсичность усиливается. Так, если при введении одного ЦФ на 3 10 сутки опыта наблюдали гибель 65% животных, то при одновременном введении гибель достигла 100% При введении КК до или после циклофосфана отмечается уменьшение количества павших животных до 20% Вывод: Препарат КК снижает токсичность при введении до или после цитостатика.

1.2 Влияние на гематотоксичность цитостатиков.

В данной серии экспериментов изучали влияние препарата КК на состояние периферической крови, центральное и костномозговое кроветворение.

Циклофосфан вводили в дозе 200 мг/кг однократно.

Препарат КК в дозах 100 и 200 мг/кг вводили как до ЦФ, так и после на 1, 2, 3 сутки. Кроме того КК вводили однократно на пике цитопении. Результаты исследований представлены в табл. 2 5.

Как видно из представленных табл. КК, введенный в дозе 100 мг/кг сразу после циклофосфана и в виде введений на 1; 2 и 3 сутки (в этой же дозе), достоверно тормозил развитие лейкоцитопении и способствовал более быстрому восстановлению числа лейкоцитов периферической крови мышей. К.К. примененный интактным мышам, несколько увеличивал содержание лейкоцитов в периферической крови.

При введении КК на фоне пика цитопении в дозах 100 или 200 мг/кг однократно на третьи сутки после применения ЦФ в МПД, было выявлено, что уже к 5 суткам эксперимента в группах, получавших КК, количество лейкоцитов в 2 раза превышало уровень содержания лейкоцитов у мышей, получавших один циклофосфан. Этот эффект наблюдался на протяжении всего опыта и не зависел от величины примененной дозы КК.

Анализ лейкоцитарной формулы показал, что препарат КК, примененный на пике цитопении, вызванной циклофосфаном, способствует более быстрой ее нормализации. Препарат КК также способствует более быстрому восстановлению массы селезенки и восстановлению количества кариоцитов мозга.

С целью выяснения влияния КК на гематотоксичность других циклостатиков, была проведена серия экспериментов с фармарубицином. Цитостатик вводили однократно в дозе 13 мг/кг. Препарат КК вводили на третьи сутки после фармарубицина, т.е. на пике цитопении в дозах 100-200 мг/кг однократно.

Результаты экспериментов представлены в табл. 6.

Как видно из представленной табл. препарат КК, введенный на пике цитопении, вызванной фармарубицином, достоверно восстанавливал число лейкоцитов в периферической крови мышей.

Вывод: 1.Препарат КК, введенный в дозах 100-200 мг/кг сразу после цитостатика и/или на 1, 2, 3 сутки после его применения, а также однократно на пике цитопении, способствует быстрому восстановлению числа лейкоцитов, количества кариоцитов костного мозга и массы селезенки.

2. Излучение влияния препарата КК на противоопухолевую активность цитостатиков.

Эксперименты проведены на модели перевиваемой опухоли карциномы 755 (Ca-755) на мышах. Введение препаратов осуществляли на 3-8 сутки после перевивки опухолей. В первой группе препараты не вводили, она считалась контрольной. Во второй группе животным вводили винкристин в дозе 0,2 мг/кг 5 раз внутрибрюшинно. В третьей группе вводили препарат КК в дозе 250 мг/кг 5 раз перорально. В четвертой группе химиотерапию винкристином дополняли введением препарата КК курсом 5 дней в указанных дозах.

Результаты исследований представлены на фиг.1.

Как видно из представленных материалов, в результате лечения винкристином наблюдали торможение опухоли (ТРО,) на 7 сутки после окончания лечения и в меньшей степени на 14 и 21 сутки после лечения. В третьей группе, получавшей один препарат КК, было выявлено значительное уменьшение роста опухоли на три срока наблюдения. При совместном применении винкристина и препарата КК на 7 сутки после лечения опухоль не возникала, а на 14 и 21 сутки рост опухоли значительно тормозился. Средний объем опухолей в этой группе составил лишь 237 мм³ (в контроле 2800 мм³), а на 21 сутки всего 4 мм³, против 6700 мм³ в контроле, т.е. наблюдалось полное исчезновение опухоли.

Вывод: При совместном использовании винкристина и препарата КК пролонгируются сроки ремиссии, опухоль определяется лишь на 7 и 14 сутки, объем ее более чем в 10 раз меньше, чем в контроле, а затем опухоль полностью регрессирует.

Препарат КК, введенный в течение 14 дней половозрелым мышам ВДР₁ в дозе 200 мг/кг статически значимо снижал количество эстральных дней с 8,2 до 3,8 (табл.7), что свидетельствует о снижении эстрогенной функции яичников. После прекращения приема препарата КК функция яичников восстанавливается. Из табл. 7 также видно, что препарат КК оказывает угнетающее действие на функцию яичников только в условиях эстрогенной насыщенности организма: количество эстральных дней на 2 недели в опытной группе 7 было 8, 2, тогда как в контрольной 5, 3.

Снижение функции яичников под действием препарата КК в условиях повышенной эстрогенной их активности реализует дополнительное воздействие препарата на опухоли, рост которых сопровождается высоким уровнем эстрогенных гормонов в организме. К таким опухолям относится рак тела матки, а также рак молочной железы. Введение препарата КК мышам с аденокарциномой молочной железы привело к значительному торможению роста этой опухоли на 64% (фиг. 2).

Вывод: В отличие от модификаторов других групп, препарат КК обладает противоопухолевой активностью.

Препарат КК, примененный совместно с винкристином, демонстрирует синергизм, цитотоксической активности на культуре трансформированных фибробластов джунгарского хомячка. На мышах с чувствительной к винкристину опухоли даже при условии уменьшения дозы цитостатика до минимальной эффективной, совместное применение винкристина и препарата КК 5-ти дневным курсом приводит к полному торможению роста опухоли на протяжении 3-х недель (фиг. 3).

Пример 1. Опыт проведен на мышах-гибридах весом 20-24 грамма. Всего в эксперименте использовано 80 мышей. В первой группе мышам вводили циклофосфан (ЦФ) в дозе 400 мг/кг однократно, во второй ЦФ + экстракт КК в желудок в виде 0,4% взвести в крахмальном клейстере в дозе 100 мг/кг. В 3 группе препарат КК вводили после ЦФ. В 4 группе введение КК осуществляли до ЦФ.

В первой группе из 20 животных погибло 13, т.е. 65% Гибель животных наблюдалась на 3-10 сутки опыта. Во второй группе выявлена 100% гибель животных. В 3 группе из 20 мышей погибло лишь 4 (20%). Такой же результат отмечали в 4-й экспериментальной группе.

Пример 2. Опыт проведен на 100 половозрелых мышах-гибридах весом 20-25 г. ЦФ вводили в дозе 200 мг/кг однократно. Препарат КК вводили в дозах 100 и 200 мг/кг, как сразу после ЦФ, так и в течение 3-х дней. Кроме того препарат КК вводили однократно на пике цитопении, вызванной ЦФ. При введении одного ЦФ у животных в периферической крови наблюдалось постепенное снижение общего количества лейкоцитов. Так, если для мыши N 1 фоновое значение составляло 12620, то на 3 день 1500, на 6 день 3200; а на 9-й 6900.

При введении ЦФ и сразу после препарата КК количество лейкоцитов на 3 день 3400; на 6 день 9120; на 9 день 12110.

При использовании препарата КК на 1, 2, 3 сутки после введения ЦФ показатель количества лейкоцитов на 3 сутки 2420; на 6 5900; на 9 13430.

При однократном введении препарата КК на пике цитопении в дозе 100 мг/кг однократно показатели периферической крови составили: на 3 сутки 16200; на 6 сутки 16900; на 9 сутки 13260.

Изучение морфологического состава периферической крови показало, что на 5 день после введения ЦФ в дозе 200 мг/кг клеточный состав белой крови составляли, бляшки 0,8; миелоциты 1,0; юные 4,6; калоглоядерные 7,2; сигментоядерные 26,4; зозинофилы 0,8; базофилы 0; моноциты 26,2; лимфоциты 33,0.

Введение препарата КК в дозе 100 мг/кг на 3 сутки после ЦФ меняло морфологический состав крови. Так в мазках отсутствовали бляшки, количество миелоцитов уменьшилось с 1,0 до 0,6; юных с 4,6 до 3,6; калоглоядерных с 28,4 до 24,8; Количество зозинофилов увеличилось с 0,8 до 1,2. Количество моноцитов незначительно уменьшилось, а количество лимфоцитов увеличилось с 33,0 до 44,0. Углубление этой тенденции отмечалось на 7 сутки эксперимента.

Кроме того, если введение ЦФ способствовало уменьшению массы селезенки (с 119,3 в контроле до 65,6 на 5 день после введения цитостатика), то дополнительное употребление препарата КК способствовало увеличению массы этого органа до 105,24 на 5 день.

Кроме того, дополнительное введение препарата КК способствовало оживлению костномозгового кроветворения. Клеточность костного мозга после введения ЦФ на 5 сутки составила 25,8 (млн./бедро), а при дополнительном введении препарата КК в то же время (5 сутки) 38,5.

Пример 3. В эксперименте использованы мыши-гибриды весом 20-25 г. Фармарубицин (ФР) вводили однократно в дозе 13 мг/кг. Препарат КК вводили в дозах 100-200 мг/кг однократно на третьи сутки после цитостатика. Фоновые показатели лейкоцитов периферической крови мышей составили 13,0 15,0. При введении ФР уже на 3 сутки отмечали снижение показателя до 5,8, на 5 сутки до 6,9; на 7 сутки до 9,2. Введение препарата КК способствовало быстрому восстановлению количества лейкоцитов. При введении препарата КК в дозе 100 мг/кг количество лейкоцитов на 3 сутки составило 7,58; на 5 10,38; на 7 сутки 17,2. При введении препарата КК в дозе 200 мг/кг количество лейкоцитов на 3 сутки составило 7,52; на 5 сутки 9,94; на 7 сутки 16,7.

Таким образом, представленные примеры иллюстрируют существенность заявленных параметров способа.

Сравнение результатов собственных исследований с литературными данными по изучаемому вопросу приведено в табл. 8.

В целом, следует отметить, что заявленное средство и способ по сравнению с известными по уровню техники обладает следующими преимуществами: высокой токсико- и химиомодифицирующей активностью, а также собственно противоопухолевой активностью.

Таким образом, заявленное средство и способ перспективны для использования в онкологии и терапии во всех случаях применения цитостатической химиотерапии.

Формула изобретения

1. Средство для повышения противоопухолевой активности и уменьшения побочных действий цитостатической терапии на основе водного экстракта растительного сырья, отличающееся тем, что оно содержит экстракт коры лианы "Кошачий коготь" (Uncaria tomentosa) и наполнитель при следующем соотношении компонентов на одну капсулу: Экстракт коры "Кошачий коготь" 0,02 Наполнитель 0,23 2. Способ повышения противоопухолевой активности и уменьшения побочных действий цитостатической терапии, включающий прием растительных препаратов, отличающийся тем, что в качестве препарата используют средство по п. 1, а прием осуществляют в эффективных дозах.

3. Способ по п. 2, отличающийся тем, что для снижения общей токсичности цитостатиков средство по п. 1 вводят до и/или после цитостатика курсами различной длительности.

4. Способ по п. 2, отличающийся тем, что для снижения гематотоксичности цитостатиков средство по п. 1 вводят в течение 1 3 суток после цитостатика или однократно на пике цитопении.

5. Способ по п. 2, отличающийся тем, что для удлинения сроков ремиссии проводят совместную терапию цитостатиком и средством по п. 1 курсом 5 7 дней с коррекцией дозы последнего.

РИСУНКИ

Рисунок 1, Рисунок 2, Рисунок 3, Рисунок 4, Рисунок 5, Рисунок 6, Рисунок 7, Рисунок 8, Рисунок 9