Лечение жирными кислотами

 

Изобретение предназначено для лечения и/или предотвращения патологической кальцификации любых тканей за счет введения гамма-линоленовой кислоты и/или ее метаболитов и/или эйкозапентаеновой кислоты и/или ее предшественников, стеаридоновой кислоты и 20:4 н-3 и метаболитов, докозагексаеновой кислоты или докозапентаеновой кислоты (22:5 н-3) как они есть или в виде солей, или в других фармакологических формах. Соединения особенно пригодны для предотвращения или лечения нефрокальциноза и/или образования камней в почках. Изобретение расширяет арсенал способов лечения или профилактики патологической кальцификации тканей. 4 з.п.ф-лы, 2 табл.

Настоящее изобретение относится к способам лечения с помощью жирных кислот, в частности к лечению и/или предотвращению патологической кальцификации тканей, более конкретно к лечению или предотвращению нефрокальциноза почек.

Жирные кислоты Пути превращения основных рядов полиненасыщенных жирных кислот в организме представлены в таблице 1.

Вышеуказанная схема обычно необратима так же, как в организме человека ряды кислот н-3 и н-6 не являются взаимопревращаемыми.

Кислоты, которые по своей природе все существуют в цисконфигурации, систематически именуются как производные соответствующих октадекановой, эйкозановой или докозановой кислот, например дельта-9, 12-октадекадиеновой кислотой или дельта-4, 7, 10, 13, 16, 19-докозагексаеновой кислотой, но более применимы цифровые обозначения такие, как 18:2 н-6 или 22:6 н-3 соответственно. Далее используются также сокращения EPA для 20:5 н-3 кислоты (эйкозапентаеновой кислоты - eicosapentaenoic acid) или ДНА ил 22:6 н-3 кислоты (докозагексаеновой кислоты - docosahexaenoic acid), но это невозможно в тех случаях, когда н-3 и н-6 кислоты одной и той же длины цепи и степени ненасыщенности существуют, например, с 22:5 кислотами. Представленные тривиальные названия более или менее общеприняты для н-6 серии. Для н-3 серии только 18: 3 н-3 имеет общепринятое тривиальное название, альфалиноленовая кислота, хотя становится употребительным тривиальное название стеаридоновая кислота для 18:4 н-3 кислоты, и название эйкозапентаеновая кислота и докозагексаеновая кислота сами по себе также используются. Альфа-изомер линоленовой кислоты был охарактеризован ранее, чем гамма-линоленовая кислота, и поэтому ссылки в литературе на линоленовую кислоту относятся (особенно в более ранних работах) к альфа-кислоте.

Патологическая кальцификация, обсуждение и эксперимент Патологическая кальцификация может возникать по ряду причин и может быть в первую очередь вызвана или может быть вторичным результатом конкретных болезненных состояний. Отложение кальция в мягких тканях (эктопическая минерализация) почти всегда патологична, и часто ее причина неизвестна. В тех случаях, когда уровень циркуляции кальция достаточно высок, может происходить минерализация многих мягких тканей. Поражаемые ткани включают кровеносные сосуды, роговицу, конъюктиву, кожу, мозг и почки. При недостаточной функции паращитовидной железы, например, кальцификация наблюдается у оснований нервных узлов и на коже, тогда как при первичном или вторичном гиперпаратироидизме кальцификация происходит в кровеносных сосудах и вокруг суставных тканей. Опухолевый кальциноз представляет собой такое состояние, при котором эктопическая минерализация характеризуется наличием значительной массы кальция вокруг крупных суставов. Кальцификация может наблюдаться в тканях, пораженных такими заболеваниями соединительных тканей, как склеродерма и дерматомиозитис, причем первая наблюдается иногда в связи с синдромом Rayhaud и телеангиоэктазией (CRST - синдром).

Радиационные повреждения микрососудов мозга, возникающие в результате радиотерапии, могут привести к некрозу и кальцификации окружающих тканей и серого вещества.

Хондрокальциноз представляет собой образование минерала вне скелета, обычно в суставах. С такими отложениями кальция связан целый ряд заболеваний, например хроническая пирофосфатная артропатия, острые кальциевые периартриты (острые синовиты) и остеоартриты.

Весьма обычной формой эктопической кальцификации является нефрокальциноз или кальцификация почек. Наиболее частыми причинами являются гиперпаратироидизм, гипервитаминоз Д и хронические интерстициальные нефриты. Другие случаи включают остеопороз, саркоидоз, почечный трубчатый асидоз, синдром Тони-Фанкони и разрушение тканей за счет метастатической карциномы.

Из-за широкого распространения кальцификации мягких тканей при болезненных состояниях заявитель создал животную модель эктопической кальцификации почек для исследования эффекта лечения 6-ненасыщенными жирными кислотами как н-6, так и н-3 серий. 74 самки крыс PVG разделили на 7 групп, как указано далее: Группа 1: контрольная, которую обрабатывали 1,5 мл 10% глюконата кальция ежедневно в течение 10 дней для того, чтобы вызвать нефрокальциноз (н = 10); Группа 2: давали эйкозапентаеновую кислоту (EPA) по 33 мг через зонд ежедневно в течение 4 дней до и в течение 10 дней введения глюконата кальция как группе 1 (н = 10); Группа 3: давали гамма-линоленовую кислоту (GLA) 66 мг плюс EPA 60 мг как группе 2 (н = 10); Группа 4: давали гамма-линоленовую кислоту по 83 мг в день как группе 2 (н = 10); Группа 5: давали 1 мл подсолнечного масла в день как группе 2 (н = 10); Группа 6: давали 1 мл оливкового масла в день как группе 2 (н = 10); Группа 7: вводили внутрибрюшинно физиологический раствор в течение 10 дней (н = 14).

Наличие кальцификации на 15 день оценивали количественно гистологически, используя окрашивание ализарином и von kassa, и количественно жидкостным химическим спектроскопическим анализом. Полученные результаты приведены в табл. 2.

Полученные результаты указывают на то, что как отдельно взятые EPA и GLA, так и взятые в сочетании могут существенно снизить кальцификацию почек у крыс, даже если уровни циркулирующего кальция чрезвычайно велики.

Изобретение
На основании вышеуказанного один из аспектов изобретения состоит в использовании /i/ GLA и/или ее EPA метаболитов, в частности быстро образующегося DGLA и/или EPA, и/или его предшественника, стеаридоновой кислоты и 20:4 н-3, и метаболитов, докозагексаеновой кислоты (DHA) или докозапентаеновой кислоты (22: 5 н-3) для предотвращения и/или лечения патологической кальцификации любых тканей как у животных, так и у людей. Патологическая кальцификация может быть основной причиной одного из ранее перечисленных заболеваний или может быть результатом других заболеваний.

В другом варианте настоящее изобретение можно расценивать как способ получения лекарства для лечения или предотвращения патологической кальцификации любых тканей у человека или животных за счет введения (i) GLA и/или ее EРA метаболитов, и, в частности, быстро образующегося DGLA, и/или (ii) EPA и/или ее предшественников, стеаридоновой кислоты и 20:4 н-3, и метаболитов, докозагексаеновой кислоты (DHA) или докозапентаеновой кислоты (22:5 н-3).

Как было указано ранее, GLA в организме очень быстро превращается в дигомо-гамма-линоленовую кислоту (DGLA); поэтому DGLA оказывает действие, весьма близкое к GLA.

Как будет обсуждаться далее, основные жирные кислоты можно использовать как таковые или в любой подходящей форме, включая, не ограничиваясь триглицеридами, диглицеридами, моноглицеридами, свободными жирными кислотами и соответствующими сложными эфирами, и любыми подходящими солями, включая соли лития, натрия, калия, цинка, магния или другие соли, фосфолипиды, амиды или любые другие фармакологически приемлемые соли.

Предпочтительные дозы находятся в интервале значений от 0,01 до 1,000 мг/кг/день, более предпочтительно от 0,5 до 100 мг/кг/день и очень предпочтительно от 2 до 30 мг/кг/день GLA или DGLA, причем лекарства легко приготовить в единичных дозах для приема таких количеств (в расчете на 70 кг веса взрослого пациента).

Способ приема лекарств
Подходящие способы введения лекарств включают оральный, парэнтеральный (подкожный, внутримышечный, внутривенный или любые другие подходящие способы), энтеральный, поверхностное нанесение в форме соответствующих EРA-содержащих мазей, кремов, лосьонов, паст и т.п. вагинальный или ректальный.

Производные EРA
Как было указано ранее, кислоты можно использовать как таковые или в виде фармацевтически приемлемых и физиологически эквивалентных производных, например подробно указанных здесь GLA и DGLA, и ссылки на любые кислоты следует рассматривать как включающие кислоты, когда они представлены в форме таких производных.

Эквивалентность демонстрируется тем, что они включены в указанную схему, что следует из эквивалентности воздействия, соответствующего воздействию кислот или их производных сложных глицеридных эфиров. Так, косвенное определение полезных производных проводится по ценности воздействия на организм самой кислоты, но превращение может быть непосредственно продемонстрировано с помощью газохроматографического анализа их концентрации в крови, в жировых тканях или в других тканях с помощью стандартных методик, например таких, которые описаны Pelick et al., стр. 23 "Analysis of Lipids and Lipoproteins" Ed. Perkin, American Oil Chemists Society, Champaign, Jllinois U.S.A.

В описанном способе образцы плазмы (1 мл) экстрагируют смесью хлороформ: метанол (2:1). Полученный экстракт фильтруют через сульфат натрия, выпаривают досуха и помещают в смесь 0,5 мл хлороформ:метанол. Липидные фракции выделяют с помощью тонкослойной хроматографии или на пластинах силикагеля. Фосфолипидную фракцию, взятую как более чувствительно определяющую содержание основных жирных кислот, метилируют, используя трехфтористый бор-метанол. Полученные сложные метиловые эфиры жирных кислот разделяют и определяют с помощью газового хроматографа Хьюлетт-Паккард 5880 с 6-футовыми колонками, набитыми 10% Silar на Chromosorb WAW 106/230. Газ-носитель гелий (30 мл/мин). Температура термостата запрограммирована так, что повышается со 164 до 190^oC со скоростью 2^oС в минуту. Температура детектора 220^oC, а температура инжектора 200^oC. Времена удерживания и площади пиков рассчитывается автоматически интегратором Хьюллет-Паккард Level 4. Пики идентифицируют по сравнению со стандартными метиловыми сложными эфирами жирных кислот.

Диетические композиции
Настоящее изобретение описано главным образом с точки зрения способов лечения и использования GLA или ее метаболитов и/или EPA или ее метаболитов при получении фармацевтических композиций, но следует учитывать, что гамма-линоленовая и другие ЕГ кислоты, будучи по своей природе дополнениями к пище, могут быть включены в диетические маргарины или другие пищевые продукты, и эти продукты следует рассматривать как входящие в термин фармацевтическая композиция или медикамент в рамках настоящего изобретения (включая формулу изобретения), если их используют для указанной цели.

При желании фармацевтическую композицию можно приготовить для использования в способе настоящего изобретения за счет соединения природных или синтетических кислот как таковых или в виде их производных с приемлемыми фармацевтическими носителями. Однако удобно обеспечивать, по крайней мере, в виде доступного масла с высоким содержанием GLA, причем здесь такие формы будут именоваться "маслами".

Одним из таких источников, доступных в настоящее время, являются семена энотеры видов Oenothera biennis L и Oenothera lamarckiana, экстракт масла из которых содержит около 8% GLA и около 72% линолевой кислоты в форме их глицеридов, наряду с другими глицеридами (процент указан в расчете на полное содержание жирных кислот). Другими источниками GLA являются виды бораго Borago officinalis, которые обеспечивают источники более богатые, нежели масла Oenothera. Масла из семян членов семейства Ribes также часто богаты GLA. Последние исследования грибков, которые можно культивировать, в процессе ферментации обещают получение источника масла грибкового происхождения. Некоторые водоросли также продуцируют GLA, и их можно собирать или культивировать. Возможен также синтетический путь получения.

Масло экстрагируют из семян одним из известных способов экстракции, например холодным прессованием, с помощью винтового пресса после частичной варки семян или с помощью экстракции растворителем.

В результате фракционирования типичного образца масла энотеры, использованного в описываемой работе в форме его сложных метиловых эфиров, были получены следующие соотношения:
Пальмитат - 6,15
Стеарат - 1.6
Олеат - 10,15
Линолат - 72,6
Гамма-линоленат - 8,9
Экстракты масла семян, указанные ранее, можно использовать как таковые или можно при желании фракционировать до получения композиции масла, содержащей триглицериды гамма-линоленовой кислоты и линолевой кислоты в качестве основных компонентов жирных кислот, причем при желании содержание гамма-линоленовой кислоты будет основным. По-видимому, экстракты масла семян оказывают стабилизирующие действия на DGLA, если присутствуют.

GLA, EPA и другие EF кислоты или их производные или метаболиты можно получить любым известным способом, включая химический синтез, ферментацию (микробную или водорослевую), экстракцию из животных, растительных или других источников, возможны и агрономические способы получения.

Фармацевтические композиции
Как было коротко указано ранее, композиции могут быть в удобной форме, подходящей для орального, поверхностного, парэнтерального или других способов введения в подходящем фармацевтическом носителе, обычно хорошо известном практически для любого вида препаратов. Так, например, при необходимости можно приготовить таблетки, капсулы, жидкости для приема внутрь или порошки, а также препараты для поверхностного нанесения, когда гамма-линоленовая кислота или другие кислоты адсорбируются через кожу. Растворы для инъекций гидролизованного масла энотеры или другого масла можно получить, используя альбумин для растворения свободной кислоты. Эмульсии или соли также можно вводить вливаниями или инъекциями.

В препараты выгодно вводить консерванты. Было обнаружено, что альфа-токоферол в концентрации около 0,1% по весу пригоден для этой цели и является одним из возможных стабилизаторов, хорошо известных специалистам, возможно также применение, например, аскорбилпальмитата и стеарата.

Следует учитывать, что абсолютное количество активных материалов, присутствующих в любой единичной дозе, не должно превышать количество, необходимое для соответствующей частоты и способа введения, но, с другой стороны, желательно, должно быть соответствующим, чтобы обеспечить нужную дозу введения, которую можно достичь рядом небольших доз. Вводимые дозы, в основном, зависят от конкретного желательного фармакологического действия.

Композиции могут быть также в виде растворов, эмульсий, суспензий, суппозиториев, пессариев, приспособлений или введения препарата через кожу, или в любых других формах.

Примеры
Далее приводятся и обсуждаются примеры композиций и их введения для указанных ранее целей.

1. Введение от 100 мг до 2000 мг GLA в день в форме твердых желатиновых капсул или таблеток, содержащих:
a) 40-80 мг в капсуле GLA в виде масла энотеры,
b) 50-150 мг в капсуле GLA в форме масла бораго, черной смородины, грибкового или другого подходящего масла,
c) 100-150 мг GLA в капсуле в форме триглицерида GLA или любой соответствующей соли GLA, например соли лития, кальция, магния, цинка или калия.

2. Введение 100 мг - 2000 мг EPA ежедневно в форме мягких или твердых желатиновых капсул или таблеток, обеспечивающих
a) 90-180 мг на капсулу EPA в форме рыбьего жира из рыб, обитающих в холодных морях,
b) 200-600 мг на капсулу ЕРА в форме обогащенного EPA масла,
c) 400-1000 мг EPA на капсулу в форме триглицерида EPA или любой подходящей соли EPA, например в виде соли лития, кальция или магния, цинка или калия.

3. Введение DGLA в дозе от 100 до 2000 мг ежедневно в формах, указанных ранее в пункте 1c.

4. Введение GLA или DGLA вместе с EPA с добавлением DHA или без него, например, в количестве от 40 до 80 мг GLA на капсулу в форме масла энотеры вместе с 10 мг на капсулу EPA в форме рыбьего жира из рыб холодных морей.

5. Введение GLA или DGLA в форме растворимого порошка или любым образом полученных гранул любой подходящей соли GLA по пункту 1c, указанному ранее, и таких эксципиентов, как моногидрат лимонной кислоты, бикарбонат натрия или другие двухосновные кислоты, такие как, например, виннокаменная или малеиновая кислота, плюс подслащивающий агрегат, например сахароза или сорбитол, и отдушки или вкусовые агенты.

6. Введение GLA или DGLA в форме жидкого масла энотеры или бораго, или другого подходящего масла, либо в виде масла как такового, либо в растворе или эмульсии, приготовленных с соответствующими вкусовыми агентами и стабилизаторами.

7. Введение EPA или DHA в любой подходящей химической форме, микрокапсулированной с помощью крахмала, желатина, гуммиарабика или других подходящих композиций.

8. Введение GLA в форме пессариев, суппозиториев, пластырей для кожи или любым другим подходящим способом.

Формула изобретения

1. Способ лечения или предотвращения патологической кальцификации мягких тканей кровеносных сосудов, роговицы, коньюнктивы, кожи или головного мозга человека или животного введением гамма-линоленовой кислоты (ГЛК), и/или ее метаболитов, и/или эйкозапентаеновой кислоты (ЭПК), и/или ее предшественников, стеаридоновой кислоты и 20 : 4 н-3, и метаболитов, докозагексаеновой кислоты (ДГК) или докозапентаеновой кислоты (22 : 5 н-3), причем основные жирные кислоты вводят как таковые или в виде солей или в других фармакологически приемлемых формах в дозе 0,01 - 1000 мг/кг/день каждой кислоты.

2. Способ по п.1, отличающийся тем, что метаболитом указанной гамма-линоленовой кислоты является дигомогамма-линоленовая кислота.

3. Способ по любому из п.1 или 2, отличающийся тем, что каждую из основных жирных кислот вводят в дозе 0,5 - 50 мг/кг/день.

4. Способ по п.1 или 2, отличающийся тем, что каждую из основных жирных кислот вводят в дозе 2 - 30 мг/кг/день.

50. Способ по любому из пп.1 - 4, отличающийся тем, что жирные кислоты вводят в форме стандартной дозы.

РИСУНКИ

Рисунок 1