4-замещенные производные пиперидина и способ их получения

 

Изобретение относится к новым 4-замещенным производным пиперидина, относящимся к непептидным антагонистам нейрокинина 2 (НК2), которые могут быть использованы, например, при лечении таких заболеваний, как астма, и способу их получения. 4-Замещенные производные пиперидина соответствуют общей формуле I, где значения m, D, G, J, L, М, Δ имеют значения, указанные в формуле изобретения. Способ получения соединений формулы I заключается в том, что соединение формулы I подвергают конденсации с диактивированным карбонильным или тиокарбонильным производным, соответственно, с последующим при необходимости окислением полученного пиперидинового производного для получения N-оксида, или алкилированием соединения, где R¹² - алкил. 2 с. и 7 з.п. ф-лы, 3 ил., 1 табл.

Настоящее изобретение относится к терапевтическим гетероциклам и, более конкретно, к новым 4-замещенным производным пиперидина, которые являются антагонистами фармакологического действия одного из эндогенных нейропептидных тахикининов, известных как нейрокинины, в особенности на рецепторе нейрокинина 2 (НК2). Новые терапевтические гетероциклы могут быть использованы в тех случаях, когда необходим такой антагонизм. Следовательно, рассматриваемые соединения могут иметь значение при лечении тех заболеваний, при которых существенную роль играет НК2-рецептор, например при лечении астмы и близких к ней состояний. Изобретение также предлагает фармацевтические композиции, содержащие новые терапевтические гетероциклы, для применения при лечении таких заболеваний, способы их применения, а также способы и промежуточные соединения для производства новых терапевтических гетероциклов.

Нейрокинины млекопитающих составляют класс пептидных нейропередатчиков, обнаруженных в периферической и центральной нервной системах. Тремя основными нейрокининами являются Вещества P (SP), Нейрокинин A (NKA) и Нейрокинин B (NKB). Существуют также удлиненные через концевой атом азота формы, по меньшей мере в случае NKA. Известны также по меньшей мере три вида рецепторов для трех основных нейрокининов. Исходя из относительной селективности к нейрокининовым агонистам SP, NKA и NKB, рецепторы классифицируются как рецептор нейрокинина 1 (NK1), рецептор нейрокинина 2 (NK2) и рецептор нейрокинина 3 (NK3), соответственно. На периферии нейрокинины SP и NKA локализованы в C-афферентных сенсорных нервных клетках, которые характеризуются не-миелинизированными нервными окончаниями, известными как C-волокна, и выделяются путем селективной деполяризации этих нервных клеток или при селективном раздражении C-волокон. C-волокна сосредоточены в эпителии дыхательных путей, а тахокинины, как известно, вызывают глубокие эффекты, которые несомненно аналогичны многим симптомам, наблюдаемым при астме. Симптомы, возникающие при выделении или введении тахокининов в дыхательные пути млекопитающих, включают бронхостеноз, повышенную проницаемость микрососудов, вазодилатацию и активацию тучных клеток. Таким образом, тахокинины вовлекаются в патофизиологический процесс и гиперчувствительность дыхательных путей, которые наблюдаются при астматических явлениях; и блокада выделения тахокининов может быть полезной при лечении астмы и связанных с ней состояний.

Сообщалось о пептидных антагонистах NK2. Например, в качестве селективного антагониста NK2 описан циклический гексапептид, известный как L-659,877. Известны и непептидные антагонисты NK2, например, некоторые пептиды представлены в Европейских патентных заявках N 428434, 474561, 512901, 512902, 515240 и 559538. Ряд пептидных антагонистов NK2 описан в Международной заявке WO 94/10146.

Мы открыли ряд новых непептидных антагонистов NK2, которые и составляют основу настоящего изобретения. Одним из объектов настоящего изобретения являются 4-замещенные производные пиперидина, в которых заместитель в положении 4 представляет собой N-связанный гетероцикл (описанный ниже). Например, мы выявили 4-(2-оксо-1,3-оксазолидин-3-ил)пиперидино-производное, представленное ниже в Примере 1, которое является потенциальным антагонистом NK2 при проверке in vitro, которая описана ниже в Опыте A, и при функциональной оценке, описанной ниже в Опыте B.

В соответствии с настоящим изобретением предлагается заявляемое Соединение, которое представляет собой соединение формулы I (формула представлена ниже после Примеров, вместе с другими формулами, обозначаемыми римскими цифрами), где: m принимает значения 2, D представляет остаток формул Ia, где Q представляет фенил, который может содержать один или два заместителя, выбираемых независимо друг от друга из группы, включающей атом галогена, Q^a представляет атом водорода, R¹ представляет атом водорода или метил; R² представляет -C(= O)R³, где R³ представляет фенил, незамещенный или замещенный одним или более атомами галогена, гидрокси, (1-4C)алкокси или (1-4C)алкилом; G обозначает простою связь;
J означает оксо или тиоксо группу;
М означает -О-, -S- или -NR¹²;
L означает L¹;
R¹² представляет атом водорода, C_1-3-алкил, R^aOC(=O)CH₂- или R^bR^c=NC (= 0) CH₂-;
R^a представляет (1-3C)-алкил;
R^b и R^c независимо друг от друга, представляют атом водорода, (1-3C)алкил или бензил;
L¹ представляет метилен, триметилен или тетраметилен;
или N-оксид соединений формулы I при атоме азота пиперидинового фрагмента, обозначенного как Δ;
или фармацевтически приемлемые соли указанных соединений формулы I.

Четвертичная аммонийная соль указанного соединения формулы I, в которой атом азота пиперидинового фрагмента, обозначаемого как Δ, представляет собой четырехвалентный аммонийный атом азота, где четвертый радикал при этом атоме представляет собой (1-4C)алкил или бензил, а связанным противоионом является фармацевтически приемлемый анион.

Следует отметить, что соединение формулы I содержит один или несколько асимметрично замещенных атомов углерода так, что эти соединения могут быть выделены в виде оптически активных изомеров, рацемической и/или диастереоизомерной форм. Также необходимо отметить, что соединение формулы I может существовать в таутомерных формах, и что это соединение может проявлять полиформизм. Следует понимать, что настоящее изобретение охватывает любую рацемическую, оптически активную, диастереоизомерную, таутомерную, полиморфную или стереоизомерную форму, или их смеси, и эта форма обладает свойствами антагониста NK2, причем в данной области хорошо известно, как получить оптически-активную форму (например, путем расщепления рацемата или при синтезе из оптически активных исходных материалов) и как определить наличие свойств антагониста NK2 с помощью стандартных опытов, описанных далее. Предпочтительным может быть использование соединения формулы I в форме, которая содержит, например, по меньшей мере 95, 98 или 99%-ный избыток энантиомера. Кроме того, предпочтительным может быть использование соединения формулы I, которое соответствует соединению формулы Ic, в форме, содержащей, например, 95, 98 или 99%-ный избыток энантиомерной формы с (S)-конфигурацией у центра, обозначаемого в формуле звездочкой^*.

В настоящем описании заместители R^a, R^b, R¹, R² и др. означают общие радикалы и не имеют других значений. Следует понимать, что общее понятие "(1-3C)алкил" включает как линейные, так и разветвленные алкильные радикалы, а ссылки на индивидуальные алкильные радикалы, такие как "пропил" только линейный радикал ("нормальный"), причем разветвленные изомерные цепочки, такие как "изопропил" называются отдельно. Аналогичные приемы используются для других общих групп, например алкокси-групп, алканоильных групп и др. Атомы галогены представляют собой фтор, хлор, бром или йод.

Ниже только для иллюстрации, но не для того, чтобы исключить другие значения в пределах указанных интервалов, перечислены отдельные значения для радикалов, заместителей и индексов заявляемых соединений.

Конкретным значением m является 2.

Конкретными значениями (1-6C) алкильного заместителя являются метил, этил, пропил, изопропил и бутил.

Конкретными значениями (1-3C) алкильного заместителя являются метил или этил.

Когда D представляет собой формулу Ia, Q^a представляет собой атом водорода, конкретным значением заместителя R¹ является метил, а конкретным значением заместителя R² является -COR³. Конкретным значением заместителя R³ является фенил, и более конкретно, фенил, где арил (или фенил) может содержать в качестве заместителя один или два атома хлора или фтора.

Конкретным значением Q является, например, фенил, который может содержать один или два заместителя, выбираемых из группы, включающей атом галогена, трифторметильную группу или метилендиокси-группу; более конкретно, Q представляет собой 3,4-дихлорфенил или 3,4-метилидендиоксифенил.

Конкретным значением Q является, например, одинарная связь или метиленовая группа; или одинарная связь. Конкретным значением J является, например, оксо, тиоксо, имино, метилимино или этилимино; и, более конкретно, оксо или тиоксо. Конкретное значение M представляет собой окси, тио или NH; и, более конкретно, окси или NR. Конкретным значением L является, например, этилен, цис-винилен или триметилен; и, более конкретно, этилен или триметилен.

Конкретную группу соединений формулы I представляют соединения формулы Ic, где: Q^b представляет собой фенил, который содержит один или два заместителя, независимо друг от друга выбираемых из группы, включающей атом галогена, а G, J, L и M принимают любые значения, определенные для соответствующего радикала в соединении формулы I; или N-оксид указанного с соединения формулы I при атоме азота пиперидина, обозначаемом Δ; или фармацевтически приемлемая соль указанного соединения формулы I и указанного N-оксида; или четвертичная аммонийная соль указанного соединения формулы I, которой атом азота в пиперидиновом фрагменте, обозначаемый Δ, представляет четырехвалентный аммонийный атом азота, где четвертый радикал при атоме азота представляет (1-4C)алкил или бензил, а связанным противоионом является фармацевтически приемлемый анион.

Другой конкретной группой соединения формулы I являются соединения формулы Ic, где: R¹² представляет атом водорода или (1-3C)алкил; Т и U представляет атом водорода; а^w представляет метил; и их фармацевтически приемлемые соли.

Предпочтительными соединениями являются (S)-N-[2-(3,4-дихлорфенил) -4-[4-(2-оксопергидропиримидин-1-ил)пиперидино] бутил]-N-метилбензамид; (S)-N-[2-(3,4-дихлорфенил)-4-[4-(3-метил-2-оксопергидропиримидин-1-ил) пиперидино] бутил] -N-метилбензамид; (S)-N-[2-(3,4-дихлорфенил)-4-[4-(3-этил-2-оксопергидропиримидин-1-ил) пиперидино] бутил] -N-метилбензамид; и (S)-N-[2-(3,4-дихлорфенил)-4-[4-(2-оксопергидропиримидин-1-ил)пиперидино] бутил]-N-этилбензамид; и их фармацевтически приемлемые соли.

Конкретные соединения описаны в соответствующих Примерах.

Фармацевтически приемлемая соль представляет собой соль, полученную с использованием кислоты, которая дает физиологически приемлемый анион. Фармацевтически приемлемые соли представляют собой соли, которые образуются на основе сильной неорганической или органической кислоты, поставляющей физиологически приемлемый анион, такие как, например, соляная, серная, фосфорная, метансульфоновая кислота или n - толуолсульфокислота.

Рассматриваемое соединение может быть получено способами, которые включают известные в химии способы получения структурно похожих гетероциклических соединений.

Такие способы и промежуточные соединения для получения соединения формулы I, или N оксидов указанного соединения формулы I при пиперидиновом атоме азота, обозначаемом Δ, или фармацевтически приемлемых солей указанного соединения формулы I или их N-оксидов; или четвертичных аммонийных солей названного соединения формулы I, в котором пиперидиновый атом азота, обозначаемый Δ, представляет собой четырехвалентный аммонийный атом азота, где четвертым радикалом при атоме азота является (1-4C)-алкил или бензил, а противоионом является фармацевтически приемлемый анион; которые определены выше, являются еще одним признаком настоящего изобретения и иллюстрируются следующими методиками, в которых, если не оговорено особо, значения общих радикалов принимают значения, определенные выше.

(а) Алкилирование пиперидина формулы II альдегидом формулы IV, восстановительным алкилированием или с использованием алкилирующего агента формулы V, где заместитель представляет собой уходящую группу. Типичными уходящими группами являются йод, бром, метансульфонат, п-толуолсульфонат, трифторметансульфонат и др. Алкилирование предпочтительно проводят путем обычного восстановительного алкилирования, например, в соответствии с методикой, описанной в Примере 1, путем катализируемого кислотой образования in sity аммонийной соли с последующим восстановлением цианборгидридом натрия в спиртовом растворителе.

(б) Для соединения формулы I, где G (представляет собой одинарную связь; J представляет собой оксо или тиоксо, соответственно; M представляет собой окси, тио или NP¹², L принимает значения L¹; циклизации соединения формулы III с помощью диактивированного производного карбоновой кислоты или диактивированного тиокарбонильного производного, соответственно. К диактивированным производным карбоновой кислоты относятся, например, 1,1'-карбонилдиимидазол, хлорформиаты (такие как метилхлорформиат, этилхлорформиат или фенилхлорформиат) и дикарбонаты, а также фосген, дифосген и трифосген; к диактивированным тиокарбонильным производным относятся, например, 1,1'-тиокарбонилди-2(1H)-пиридон, 1,1'-тиокарбонилдиимидазол, фенилхлордитиоформиат и тиофосген. Циклизацию обычно проводят в инертном растворителе, например в хлороформе, тетрагидрофуране или толуоле, при температуре приблизительно от комнатной температуры до температуры кипения реакционной смеси, например, в соответствии с методикой, описанной в Примере 3. Если диактивированное производное карбоновой кислоты или диактивированное тиокарбонильное производное представляет собой хлорангидрид кислоты, то может быть предпочтительным проведение циклизации в присутствии основания в качестве акцептора кислоты, такого как, например, триэтиламин.

(в) Для соединения формулы I, которое имеет формулу Ic, взаимодействие амина формулы VIII c подходящим хлорангидридом кислоты. Реакцию можно проводить в инертном растворителе, например, таком как тетрагидрофуран, диэтиловый эфир, толуол, хлороформ или метиленхлорид, при температуре в интервале от -78 до 100^oC, предпочтительно в интервале от -20 до 50^oC. Реакцию можно проводить, например, в условиях, аналогичных условиям, описанным в Примере 17.

(г) Для соединения формулы I, которое имеет формулу Ic, взаимодействие амина формулы VII с активированным производным карбоновой кислоты. Реакцию можно проводить в инертном растворителе, например, таком как тетрагидрофуран, диэтиловый эфир, толуол, хлороформ или метиленхлорид, при температуре в интервале от -78 до 100^oC, предпочтительно в интервале от -20 до 50^oC, в присутствии подходящего активирующего агента, например, в присутствии хлоргидрата 1-(3-диметиламинопропил)-3-этилкарбодиимида. Реакцию можно проводить, например, в условиях, аналогичных условиям, описанным в Примере 20.

(д) Для N-оксида соединения формулы I при пиперидиновом атоме азота, обозначаемом Δ, окисление пиперидинового атома азота, обозначаемого Δ, с использованием обычной методики, например, путем окисления перекисью водорода в метаноле, надуксусной кислотой или 3-хлорпероксибензойной кислотой в инертном растворителе (таком как дихлорметан) или диоксираном в ацетоне. Подходящие для проведения этой реакции условия описаны в Примере 21.

(е) Для соединения формулы I, где заместитель R¹² - представляет собой (1-3C)алкил, RaOC(=O)CH₂- или RbRCNC(=O)CH₂-, алкилирование соответствующего соединения формулы I, где заместитель R¹² представляет собой атом водорода с использованием соответствующего алкилирующего агента. Алкилирование может быть проведено в инертном растворителе, например в тетрагидрофуране, диэтиловом эфире, толуоле или 1,2-диметоксиэтане, при температуре в интервале от -78 до 100^oC, предпочтительно в интервале от 0 до 50^oC, в присутствии подходящего основания. Соответствующие условия описаны, например, в Примере 22.

(ж) Для четвертичной аммонийной соли соединения формулы I, алкилирование пиперидинового атома азота, обозначаемого в соединение формулы I Δ, с использованием подходящего алкилирующего агента. Алкилирование может быть проведено в инертном растворителе, например, в таком как тетрагидрофуран, диэтиловый эфир, толуол или 1,2-диметоксиэтан, при температуре в интервале от -78 до 100^oC, предпочтительно в интервале от 0 до 50^oC, в присутствии подходящего основания.

В некоторых случаях, при проведении описанных способов желательно использование защитных групп, либо на всех этапах проведения реакции, либо на некоторых стадиях. Защитная группа затем может быть снята.

В любом из описанных выше способов, когда требуется получение фармацевтически приемлемой соли соединения формулы I или фармацевтически приемлемой соли R-оксида соединения формулы I, такая соль может быть получена при взаимодействии соответствующего соединения формулы I или его N-оксида с кислотой, которая поставляет физиологически приемлемый противоион, или с помощью любой другой известной методики.

Следует отметить, что некоторые из необязательных заместителей рассматриваемых Соединений могут быть введены с помощью стандартных реакций ароматического замещения или получены путем обычных модификаций функциональных групп до или после описанных выше способов и, таким образом, также входят в изобретение по объекту "способ". К таким реакциям и модификациям функциональных групп относятся, например, введение нитро-группы или атома галогена, а также восстановление нитро-групп. Реагенты и условия проведения таких реакций хорошо известны в химии.

Если исходные материалы, необходимые для проведения описанных выше способов, не являются коммерческими продуктами, то они могут быть получены по методикам, которые выбираются из числа стандартных для химии гетероциклов, методик, которые аналогичны методикам синтеза известных, структурно похожих соединений, а также из числа методик, которые аналогичны описанным выше, или методикам, описанным в Примерах. Исходные продукты и способы их получения также являются дополнительными объектами настоящего изобретения.

Удобным промежуточным соединением для получения исходных соединений формул III, IV и V является спирт формулы VI (или VIc). Получение спирта формулы VIc, где Q^b представляет собой 3,4-дихлорфенил, описано в примере 1, стадии а)-е); а получение соответствующего оптически активного спирта описано в Примере 2, стадии а)-д). Спирт формулы VI может быть затем окислен до альдегида формулы IV, например, с помощью оксалилхлорида, диметилсульфоксида и триэтиламина, как это описано в Примере 1.ж), или с использованием периодинана Десса-Мартина (1,1,1-триацетокси-1,1-дигидро-1,2-бензиодоксол-3(1)-он), как это описано в Примере 2.е), или он может быть превращен в алкилирующий агент формулы V с использованием обычных методик. Альдегид формулы IV может быть превращен в соответствующий амин формулы III по методике, аналогичной методике, описанной в Примере 3, стадии а)-д). По методике, описанной в Примере 1, альдегид формулы IV может быть превращен в пиперидион формулы VII; амин формулы III может быть получен путем восстановительного алкилирования амина формулы HM-L-NH₂ с использованием пиперидона формулы VII и в соответствии с методикой, описанной в Примере 1.з) или в Примере 3, стадии а-д).

Для получения исходного пиперидона формулы II 4-пиперидин, содержащий в положении 1 защитную группу, может быть использован для проведения восстановительного алкилирования с последующей циклизацией по методике (б), описанной выше, с последующим снятием защитной группы, например, по методике Примера 1, стадии з)-к). Обычно исходный пиперидин формулы II может быть получен из 1-защищенного 4-аминопиперидина или 1-защищенного 4-пиперидона с использованием обычных методик.

Для квалифицированного в данной области специалиста понятно, что для получения исходных материалов может быть использован ряд реакционных схем и схемы реакций, приводящие к исходным материалам и продуктам настоящего изобретения, могут быть соответствующим образом изменены.

Применение рассматриваемого Соединения может быть показано с помощью стандартных тестов и клинических испытаний, в том числе описанных ниже.

Оценка связывания рецептора нейрокинина A (NKA) (Тест A)
Способность Соединения подавлять связывание NKA рецептором NK2 может быть показана с помощью теста, в котором используется рецептор NK2 человека, экспрессированный в клетки эритромиелоза мышей (MEL). В тесте применяются мембраны клеток MEL (MEL М), которые отличаются рецепторами NK2C высоким сродством и селективностью. Методика проведения теста описывается ниже.

Краткое описание чертежей.

Фиг. 1: показывает создание вектора экспрессии МЕ1-клеток конечного продукта pMEG3/hNH2R.

Фиг. 2: показывает создание вектора экспрессии конечного продукта GSE1417/hNK2R.

Фиг. 3: показывает экспрессию человеческого рецептора NK2 в клетки MEL C88.

Экспрессия человеческого рецептора NK2 (hNK2R) в MEL - клетки
Гетерогенная экспрессия протеина в клетки эритромиелоза мышей (MEL) использует область контроля локуса человеческого глобина (LCR) (F.Grosveld et al. , Cell, 1987, 51, 975-985). кДНК-ы вводятся между промотором человеческого бета-глобина и вторым интроном гена человеческого бета-глобина, и эта кассета экспрессии затем помещается вниз LCR и трансфекцируется в MEL-клетки (M.Needham et al., Nucl Acids Res., 1992, 20, 997-1003). кДНК человеческого рецептора NK2 (A. Graham et al., Biochem. Biophys. Res. Commun. 1991, 177, 8-16) выделяют из РНК легкого человека путем взаимодействия цепочки полимеразы и ДНК-последовательности. кДНК человеческого рецептора NK2 субклонируют в "челночный" вектор (pMEG3), содержащий промотор бета-глобина и 3'-часть гена человеческого бета-глобина (фиг. 1), кДНК человеческого рецептора NK2 ограничивают с помощью Eco 0109 (5' конец) и Bam H1 (3' конец). Олигонуклеотидный линкер-адаптор, содержащий внутренний сайт Hind III и 3'-конец сайта Eco 0109 сшивают с фрагментом hNK2R и кДНК. Последовательность верхней цепи олигонуклеотида = 5'd (GCGCAAGCTTATGGG) (SEQ ID NO:1) и нижней цепи олигонуклеотида = 5'd(GTCCCCATAAGCTTGCGC) (SEQ 1D NO:2). Их гибридизируют и сшивают с фрагментом hNK2R с использованием стандартных способов. После расщепления с помощью Hind III полученный фрагмент клонируют в сайты Hind III и Bam HI в полилинкере "челночного вектора" рМЕG3. Конечный продукт (рMEG3/hNK2R) контролируют путем рестрикционного картирования и секвенирования места соединения концов 5' и 3'. Затем его превращают в E.coli DН5 альфа и стандартными методами выделяют плазмиду ДНК и проверяют путем рестрикционного картирования и секвенирования. Фрагмент Clal/Asр718, который несет промотор бета-глобина, человеческий рецептор NК2 кДНК и фрагмент 3' гена бета-глобина, вырезается и субклонируется в плазмиду pGS Е1417 (фиг. 2). Конечный продукт pMEG3/hKNK-2R расщепляется с помощью Clal и ASp718 и клонируется непосредственно в сайты Clal и Asp718 (3' LCR) в экспрессии вектора GSE1417. Конечный продукт CSE1417/hNK2R (13.9 кb) контролируют путем рестрикционного картирования. Е.coli: DH альфа преобразуют и рекомбинантные плазмиды контролируют путем рестрикционного картирования. Клетки MEL, C88 (A. Deisseroth et al., Cell (1978), 15, 55-63) подвергают электропорации (М. Antoniou, Methods Molecular Biology (1991), 7, 421-434) с помощью PVU 1-линеаризованной pGSE1417/hNK2R ДНК. Сразу после трансфекции клетки разбавляют в культуральной среде до концентрации 10⁴-10⁵ клеток/мл и аликвоту в 1 мл помещают в каждую лунку 24-луночного планшета.

Через 24 часа после трансфекции добавляют G418 до концентрации 1 мг/мл для отбора стабильных трансфектантов. Для генерирования популяции индивидуальные клоны собирают или объединяют через 7 - 10 дней после добавления избирательной среды. На фиг. 3 показана стратегия, используемая для выделения трансфецированной линии клеток MEL/hNK2R. Для излучения экспрессии клетки сохраняют в состоянии экспоненциального роста в течение 4 дней и затем добавляют диметилсульфоксид (ДМСО) в концентрации 2% (об/об) для индуцирования дифференцировки и, следовательно, экспрессии. Для определения связывания мРНК и ДНК образцы отбирают через 4 дня после индукции. Полученные результаты показывают, что клон #1 экспрессирует hNK2R на высоком уровне (как hNK2R, мРНК, так специфичное ДНК связывание). Этот клон масштабируют и обычным способом ферментируют при масштабе 20 л/месяц и используют в опыте А.

Препараты мембран (MEL M), приготовленные из MEL-клеток и содержащие обладающие высоким сродством рецепторы NK2, получены в соответствии с опубликованным протоколом (D. Aharony et al., Neuropeptides, 1992, 23, 121-130) со следующими изменениями:
(1) в гомогенизирующий буфер вводят йодацетамид (1 мМ);
(2) гомогенизацию проводят в соответствии с опубликованным протоколом, но в течение более короткого промежутка времени - 10 сек и при более низкой скорости (осадок 10); и
(3) стадия установления равновесия с использованием KC1/ЭДТУ не проводится.

Обычно связывание ³H-NKA (2.5 нМ) с MEL М отличается высокой специфичностью (88 ± 4%) и линейно зависит от концентрации белка, при этом значительное связывание определяется до 26 мг белка/мл. Опыты на установление равновесия показывают связывание с обладающими высоким сродством и высокой плотностью рецепторами при K_D= 1187 нМ, B_max = 2229 f моль/мг белка.

Радио-лиганд ³H-нейрокинина A (³H-NKA) в виде [4,5-³H-Leu⁹] -NKA (типичная удельная активность 117 Кю/ммоль) получают с помощью обычных синтезов, описанных в Cambridge Research Biochemicals, и имеет степень чистоты 95%. Повторный анализ с помощью ВЭЖХ показывает, что лиганд стабилен при соответствующих условиях хранения (силанизированный сосуд с 0.2%-ным меркаптоэтанолом, атмосфера аргона). Также не установлено признаков разложения или метаболизма при проведении оценки на связывание рецептора. Испытания проводят с использованием инкубационного буфера, содержащего 50 мМ хлоргидрата трис(гидроксиметил)аминометана (Трис HCl) (pH 7.4), 5 мМ Mg⁺⁺, 100 мкМ тиорфана, 1 нМ ³H-NKA, 0.02% (мас./об.) сыворотки бычьего альбумина (СБА). 30 мМК⁺ и 300 мкМ дитиотреита; концентрацию мембранного белка поддерживают приблизительно на уровне 0.05-0.025 мг на одну пробирку. Неспецифичное связывание определяют с помощью 1 мкМ NKA. В каждую пробирку добавляют: 150 мкл инкубационного буфера, 20 мкл ³H-NKA, 20 мкл Соединения, подходящие NKA или буфер и 125 мкл мембранной суспензии. Реакцию инициируют путем добавления мембранной суспензии. Пробирки инкубируют в течение 60 мин при 25^oC во встряхиваемой бане. Реакцию останавливают при промывании пробирок 10 мл охлажденного льдом 50 мМ буфера Трис HCl с использованием ячейки Брандела в качестве собирающей системы с фильтрами Whatman GF/B, которые для сбора мембран пропитывают в течение по меньшей мере 4 часов при комнатной температуре в 0.01% (об./об.) полиэтиленимине. Фильтры помещают в сцинтилляционные сосуды и изучают с помощью сцинтилляционного счетчика Beckman LS 60001, L. Константа связывания K_i рассчитывается стандартными методами и обычно представляет собой среднее значение для нескольких определений. Величины К_i могут быть преобразованы в отрицательные логарифмы и представлены как -log молярной К_i (то есть рК_i).

На начальном этапе исследования величина IC₅₀ измеренная для стандартного соединения L-659877, как установлено, имеет значение 30 нМ относительно ³H-NKA, связанного с MEL M. Селективность Соединения для связывания рецептора NK2 может быть показана на примере связывания других рецепторов с использованием стандартных оценок, например, путем титрования производного SP в тканях препарата, селективного к рецепторам NK1, или при титровании производного NKB в тканях препарата, селективного к рецепторам NK3.

Проверка на морских свинках (Тест B)
В описанном ниже опыте в качестве агониста используют или NKA или [β -Ala⁸] -NKA (4-10), который при описании опыта обозначается АГ. Способность Соединения подавлять активность АГ в легочных тканях может быть показана с помощью функциональной оценки на трахее морской свинки, которую осуществляют следующим образом.

Самцов морских свинок умерщвляют ударом острого предмета по тыльной части головы. Извлекают трахею, отрезают лишние ткани и делят на два сегмента. Каждый сегмент подвешивают в виде кольца между хомутами из нержавеющей стали в банях для тканей с водяной рубашкой (37.5^oC), содержащих физиологический раствор следующего состава (мМ): NaCl, 119; KCl, 4,6; CaC1₂, 1.8; MgCl₂, 0.5; NaH₂PO₄, 1; NaHCO₃ 25; 11; тиорфан 0.001; и йодометацин, 0.005. Физиологический раствор непрерывно насыщается смесью 95% O₂ - 5% CO₂. Начальное натяжение, устанавливаемое на каждом образце ткани, составляет 1 г, и до добавления другого лекарства это натяжение сохраняют в течение 0.5-1.5 часов для установления равновесия. Сократительные реакции измеряют на полиграфе Grass через датчик Grass FT-03.

Реакцию тканей провоцируют раз за разом с помощью единичной концентрации АГ (10 мМ) через 30 мин с промыванием для возвращения напряжения до базового значения. Значения концентраций АГ достигают постоянного уровня после двух провокаций и каждое соединение испытывают на ингибирование реакции на АГ путем добавления его в баню для тканей за 15 мин до третьего или последующего воздействия агониста. Сократительная реакция на АГ в присутствии Соединения сравнивается с сократительной реакцией, полученной при второй провокации АГ (в отсутствие Соединения). Процент ингибирования определяют тогда, когда Соединение продуцирует статически значимое (p < 0.05) уменьшение сокращения, и рассчитывают, исходя из того, что вторая сократительная реакция соответствует 100%.

Активность выбранных Соединений оценивают путем расчета кажущейся константы диссоциации (K_B) для каждой изученной концентрации с помощью стандартного уравнения:
K_B = [антагонист][(отношение доз-1),
где (отношение доз = антилогарифм [(АГ - log молярной EC₅₀ без Соединения) - (АГ - log молярной EC₅₀ с Соединением]. Величины K_B могут быть преобразованы в отрицательные логарифмы и выражены как - log молярной K_B (то есть pK_B). Для этого уравнения полная кривая концентрация-ответ для АГ получена в отсутствие и в присутствии Соединения (30-минутный инкубационный период) с использованием парных колец трахеи. Активность АГ определяется при 50% их собственного максимального уровня на каждой кривой. Величины EC₅₀ переводят в отрицательные логарифмы: - log молярной EC₅₀. Максимальные сократительные ответы на АГ определяют путем представления максимального ответа на АГ в виде процента сокращения, вызванного с помощью карбахола (30 мкМ), добавляемого после первичного периода установления равновесия. Когда с помощью Соединения продуцируется статически значимое уменьшение максимального ответа к АГ, рассчитывают процент ингибирования относительно процента сокращения, обусловленного карбахолом в необработанной ткани, который принимают за 100%.

Клинические испытания, показывающие эффективность соединения, могут быть осуществлены с помощью стандартных способов. Например, способность Соединения предупреждать или лечить симптомы астмы или астматических состояний может быть продемонстрирована путем введения холодного воздуха или аллергена и оценки с помощью стандартных легочных измерений, таких как, например, FEV₁ (объем фиксированного вдоха за 1 секунду) и FVC (фиксированная жизненная емкость легких), анализируемых с помощью стандартных методик статического анализа.

Можно заметить, что вовлечение соединений в тест A или тест B не ограничивается астмой. Эти тесты демонстрируют общий антагонизм NKA. В общем случае испытанные Соединения показывают статически значимую активность в Тесте A со значением K_i 1 мкМ и ниже. Например, соединение, описанное в Примере 2, как установлено, имеет значение K_i 4.1 нМ. В Тесте B значение pK_B составляет 5 и более. Например, для соединения, описанного в Примере 2, pK_B = 8.7. Следует отметить, что не всегда имеет место прямая зависимость между активностью Соединений, выражаемой значением K_i, полученном в Тесте A, и величинами, полученными в других тестах, таких как, например, pK_B Теста В.

Как описывалось выше, соединения настоящего изобретения обладают свойствами антагонистов NKA. Таким образом, они противодействуют по меньшей мере одной из функций NKA, которые, как известно, включают бронхостеноз, повышенную проницаемость микрососудов, вазодилатацию и активацию тучных клеток. Таким образом, одним из объектов настоящего изобретения является использование соединения формулы I; или N-оксида названного соединения формулы I по пиперидиновому атому азота, который обозначается Δ; или фармацевтически приемлемой соли названного соединения формулы I или названного N-оксида; или четвертичной аммонийной соли вышеуказанного соединения формулы I, в которой пиперидиновый атом азота обозначаемый Δ, представляет собой четырехвалентный аммонийный атом азота, где четвертым радикалом при нем является (1-4C)алкил или бензил, а ассоциированный противоион представляет собой фармацевтически приемлемый анион, которые определены выше; при лечении заболевания человека или других млекопитающих, нуждающихся в таком лечении, в которое вовлекается NKA и необходимо подавление его действия, например, при лечении астмы и близких заболеваний. Кроме того, еще одним объектом настоящего изобретения является использование соединения формулы I; или N-оксида названного соединения формулы I по пиперидиновому атому азота, который обозначается Δ; или фармацевтически приемлемой соли названного соединения формулы I или названного N-оксида; или четвертичной аммонийной соли вышеуказанного соединения формулы I, в которой пиперидиновый атом азота, обозначаемый Δ, представляет собой четырехвалентный аммонийный атом азота, где четвертым радикалом на нем является (1-4C)алкил или бензил, а ассоциированный противоион представляет собой фармацевтически приемлемый анион, которые определены выше; в качестве фармакологического стандарта для разработки и стандартизации новых моделей заболевания или тестов для использования при разработке новых терапевтических средств для лечения заболеваний, в которые вовлекается NKA, или тестов для их диагностики.

При использовании для лечения таких заболеваний Соединение обычно применяется в виде соответствующей фармацевтической композиции, которая содержит соединение формулы I; или N-оксид названного соединения формулы I по пиперидиновому атому азота, который обозначается Δ; или фармацевтически приемлемую соль названного соединения формулы I или названного N-оксида; или четвертичную аммонийную соль вышеуказанного соединения формулы I, в которой пиперидиновый атом азота, обозначаемый Δ, представляет собой четырехвалентный аммонийный атом азота, где четвертым радикалом на нем является (1-4C)алкил или бензил, а ассоциированный противоион представляет собой фармацевтически приемлемый анион, которые определены выше; и фармацевтически приемлемый разбавитель или носитель, причем композиция адаптируется для конкретного способа введения. Такая композиция составляет еще один объект настоящего изобретения. Она может быть получена с помощью обычных методик и с использованием обычных наполнителей и связывающих веществ, и может быть выполнена в виде одной из дозирующих форм. К таким формам относятся, например, таблетки, капсулы, растворы или суспензии для орального применения; свечи для ректального применения, стерильные растворы и суспензии для вливаний и инъекций; аэрозоли и растворы или суспензии для ингаляции; или порошки вместе с фармацевтически приемлемыми твердыми разбавителями, такими как лактоза, которые предназначены для применения путем вдувания.

Орально обычно используются таблетки и капсулы, которые содержат до 250 мг (и обычно от 5 до 100 мг) соединения формулы I. При использовании путем ингаляций соединения формулы I обычно назначаются человеку с дневной дозой, например, от 5 до 100 мг, или в одну дозу, или в виде двух - четырех доз в день. Аналогично, для внутривенных или внутримышечных инъекций или вливаний обычно используются стерильные растворы или суспензии, содержащие до 100% вес./вес. (обычно от 0.05 до 5% вес./вес.) соединения формулы I.

Доза соединения формулы I, которая должна назначаться пациенту, будет при необходимости изменяться в соответствии с принципами, которые хорошо известны в данной области, то есть с учетом способа введения и серьезности заболевания, веса и возраста пациента. Однако, в общем случае, соединение формулы I будет назначаться теплокровным животным (включая человека) таким образом, чтобы введенная доза составляла, например, от 0.01 до 25 мг/кг (обычно от 0.1 до 5 мг/кг). Следует понимать, что обычно могут использоваться эквивалентные количества N-оксида, или фармацевтически приемлемой соли, или четвертичной аммонийной соли соединения формулы I.

Настоящее изобретение иллюстрируется с помощью следующих примеров, не ограничивающих изобретение, в которых, если не оговорено особо, используются следующие величины;
(I) температуры приводятся в градусах Цельсия (^oC); комнатная температура или температура окружающей среды соответствует температуре 18-25^oC;
(II) органические растворители сушат безводным сульфатом натрия; растворитель упаривают на роторном испарителе при пониженном давлении (600-4000 Па; 4.5-30 мм.рт.ст.) при температуре бани до 60^oC.

(III) хроматография означает "быструю хроматографию" (метод Стилла), которую проводят на Кизельгуре (Merck Kieselhel, Art 9385 фирмы Мерк, Германия); "силикагель с обращенной фазой" означает основу, на которую нанесен октадецилсилан (ОДС), с диаметром частиц 32-74 мкм, которая известна как "PREP-40-ODS" (Ant 731740-100, фирмы Bodman Chemicals, Aston, США); тонкослойная хроматография (ТСХ) проводится на 0.25 мм пластинах силикагеля GHLF (Art 21521, фирмы Analtech, Newark, DE США);
(IV) в общем случае, за ходом реакции наблюдают с помощью ТСХ, а время реакции приводится только с целью иллюстрации;
(V) температуры плавления являются некорректными; (разл.) означает разложение; температуры плавления представлены для материалов, полученных в соответствии с описанной методикой; полиморфизм может быть результатом выделения материалов с различными температурами плавления при проведении какого-либо способа получения;
(VI) конечные продукты имеют соответствующие спектры ядерного магнитного резонанса и по данным ТСХ являются индивидуальными продуктами;
(VII) выходы продуктов приведены только для иллюстрации и не являются обязательными в случае тщательного осуществления способа получения; синтез можно повторить, если требуется большее количество продукта; (VII) спектры ЯМР приводятся в значениях величины химического сдвига дельта в миллионных долях для основных протонов (pp или м.д.) относительно тетраметилсилана (ТМС), используемого в качестве внутреннего стандарта; спектры получены при 300 МГц в CDCl₃; для обозначения формы сигнала используются обычные аббревиатуры; для AB-системы приводится основной химический сдвиг;
(IX) химические символы имеют свое обычное значение; используются единицы и обозначения системы СИ;
(X) пониженное давление относится к абсолютному давлению, выраженному в паскалях (Па); повышенное давление относится к давлению измерительного прибора, которое выражено в барах;
(XI) приводятся объемные соотношения растворителей: (об./об.);
(XII) масс-спектры получены при химической ионизации с энергией 70 электрон-вольт при прямом вводе пробы; обычно приводится один сигнал, который соответствует исходной массе соединения.

ПРИМЕР 1: Хлоргидрат N-[2-(3,4-Дихлорфенил)-4-[4-(2-оксо-1,3-оксазолидин-3-ил)пиперидино] бутил]-N-метилбензамида
Раствор N-[2-(3,4- дихлорфенил)-4-оксобутил]-N-метилбензамида (0,823 г) в метаноле (4 мл) добавляют к раствору 4-(2-оксо-1,3-оксазолидин-3-ил)пиперидина (0.600 г) и уксусной кислоты (0.20 мл) в метаноле (8 мл). Через 5 минут добавляют в одну порцию цианборгидрид натрия (0,220 г) в метаноле (4 мл). Реакционную смесь перемешивают в течение 3 часов и затем разбавляют водным раствором бикарбоната натрия, перемешивают в течение 30 минут и экстрагируют дихлорметаном. Органические экстракты сушат, упаривают и хроматографируют (элюент дихлорметан:метанол, градиент 98:2, 90:10). Полученный продукт растворяют в дихлорметане, осаждают в виде хлоргидра эфирным раствором хлористого водорода, упаривают и выдерживают под высоким вакуумом в течение ночи. Получают заявленное соединение в виде белого твердого вещества (0.88 г).

Масс-спектр: m/z = 504 (М⁺¹). Элементный анализ: Вычислено, %: C 56.96, H 5.92, N 7.66. C₂₆H₃₁Cl₂N₃ · 1.20 HCl. Найдено,%: C 57.02, H 6.05, N 7.62.

Промежуточное соединение N-[2-(3,4-дихлорофенил)-4-оксобутил]-N-метилбензамид получают следующим способом.

а). 1-Бром-2-(тетрагидропиран-2-илокси)этан
К механически перемешиваемому раствору дигидропирана (1 л) и сильно-кислой ионообменной смолы (10.0 г) в гексане (2 л) по каплям в течение 1.5 часа при охлаждении баней с ледяной водой для поддержания температурного интервала 35-40^oC добавляют 2-бромэтанол (985 г). Реакционную смесь перемешивают в течение ночи при комнатной температуре, затем смесь хроматографируют гексаном (6 л). Элюат упаривают, получают жидкость янтарного цвета, которую перегоняют с колонкой Вигре длинной 5 см, собирают продукт с температурой кипения 75-95^oC (3300-4700 Па). Этот продукт перегоняют повторно, получают эфир в виде масла (1195.5 г);
Т. пл. 80 - 90^oC (2666 Па); Спектр ПМР: 4.68 (м. 1), 4.01 (м, 1), 3,89 (м, 1), 3.77 (м, 1), 3.52 (м, 3), 1.75-1.50 (м, 6).

б). α-[2-(Тетрагидропиран-2-илоил)этил]-3,4-дихлорофенил-ацетонитрил.

К раствору гидрида натрия (218.0 г 55% масляной суспензии) в тетрагидрофуране (4 л) при 10^oC (баня лед/вода) добавляют в течение 45 минут раствор 3,4-дихлорофенилацетонитрила (893.0 г) в тетрагидрофуране (2 л), полученный раствор перемешивают при комнатной температуре в течение 2 часов. Смесь охлаждают водно-ледяной баней и по каплям в течение 25 минут добавляют 1-бром-2-(тетрагидрофуран-2-илокси)этан (1076.0 г) в виде неразбавленного масла. Смесь перемешивают в течение ночи и разделяют на 4 части объемом по 2 литра. Каждую порцию разбавляют насыщенным раствором хлорида аммония (3 л) и экстрагируют эфиром (500 мл). Соединенные органические слои промывают водным хлоридом аммония, сушат и упаривают. Полученный продукт хроматографируют (элюент гексан: дихлорметан, градиент 100:0, 0:100), получают нитрил в виде масла (932 г).

Спектр ПМР: 7,47 (м, 4); 7.20 (м, 2), 4,74 (м, 2), 4.08 (м, 2), 3,85 (м, 4), 3,54 (м, 3), 3,37 (м, 1), 2,15 (м, 4), 1.77 (м, 4), 1.56 (м, 8).

в). 2-(3,4-Дихлорфенил)-4-(тетрагидрофуран-2-илокси)бутиламин.

К раствору описанного выше нитрила (128.3 г) в 95% этаноле (1.1 л) и концентрированном растворе аммиака (550 мл) добавляют никель Ренея (25.0 г). Смесь гидрируют в атмосфере водорода при давлении 3.6 бар в течение 1.5 дней. Смесь фильтруют через диатомовую землю для удаления катализатора, фильтрат упаривают. Полученный продукт хроматографируют (элюент метиленхлорид: метанол, градиент 100:0, 95:5), получают амин в виде масла (91 г).

Спектр ПМР: 7.40 (с, 1); 7.38 (с, 1), 7.32 (д, 1, J=2.1),
7.28 (д, 1, J=2.0), 7.07 (дд, 1, J=2.1, 4.9), 7.04 (дд, 1, J=2.1, 4.9), 4.50 (м, 1), 4.43 (м, 1), 3.70 (м, 4), 3.45 (м, 2), 3,27 (м, 1), 3,17 (м, 1), 2.97-2.75 (м, 6), 2.00 (м, 2), 1.82-1.66 (м, 6), 1.53 (м, 8), 1.18 (уш. с, 4). Масс-спектр: m/z = 318 (M+1).

г). N-[2-(3,4-Дихлорфенил)-4-(тетрагидропиран-2-илокси)бутил]бензамид.

К раствору амина (2.5 г) в метиленхлориде (35 мл) добавляют триэтиламин (1,1 мл) и ангидрид бензойной кислоты (1,85 г), полученный раствор перемешивают в течение 45 минут. Смесь промывают 0.2 н. соляной кислотой, 1 н. гидроксидом натрия и водой, затем сушат и упаривают, получают амид в виде масла (3.3 г).

Спектр ПМР: 7.63 (м, 4), 7,46 (м, 2), 7.37 (м, 8), 7.09 (м, 2), 6.22 (м, 2), 4.50 (м, 1), 4.43 (м, 1), 3,8 (м, 5), 3,63 (м, 1), 3.5 (м, 4), 3.36 (м, 1), 3,23 (м, 1), 3.11 (м, 2), 2.06 (м, 2), 1.90-1.77 (м, 4), 1.68 (м, 2), 1.51 (м, 8). Масс-спектр: m/z = 338 [(M+1)-тетpaгидpoпиpaнил].

д). N-[2-(3,4-Дихлорфенил)-4-(тетрагидропиран-2-илокси)бутил]-N- метилбензамид.

К раствору описанного выше амида (3.3 г) в диметилсульфоксиде (20 мл) добавляют порошок гидроксида калия (1.6 г) и через 15 минут добавляют йодометан (1.0 мл). Через 1 час смесь разбавляют водой и экстрагируют метиленхлоридом. Объединенные органические экстракты сушат и упаривают, получают амид в виде масла (3.1 г).

Масс-спектр: m/z = 353 [(М+1)-тетрагидропиранил].

е). N-[2-(3,4-Дихлорфенил)-4-гидроксибутил]-N-метилбензамид.

К раствору описанного выше амида (10.5 г) в тетрагидрофуране (100 мл) добавляют 6 н. соляную кислоту (50 мл) и полученный раствор перемешивают в течение ночи. Смесь нейтрализуют 10 н. гидроксидом натрия, разбавляют водой и экстрагируют метиленхлоридом. Органический слой сушат и упаривают. Полученное желтое твердое вещество суспендируют в эфире и фильтруют, получают спирт в виде желтого твердого вещества (8.4 г). Масс-спектр: m/z = 352 (М+1).

ж). N-[2-(3,4-Дихлорфенил)-4-оксобутил]-N-метилбензамид.

К раствору оксалилхлорида (2.6 мл) в метиленхлориде (60 мл) при температуре -78^oC добавляют диметилсульфоксид (4.2 мл) в метиленхлориде (30 мл), а затем добавляют спирт (8.3 г) в диметилсульфоксиде (6 мл) и метиленхлориде (30 мл). Полученный раствор перемешивают в течение 30 минут и затем добавляют триэтиламин (16.4 мл). Смеси дают нагреться до комнатной температуры, разбавляют метиленхлоридом, промывают 1 н. соляной кислотой, насыщенным водным раствором бикарбоната натрия и водой, сушат и упаривают. Полученное твердое вещество суспендируют в эфире и фильтруют, получают альдегид в виде белого твердого вещества (6.4 г).

Масс-спектр: m/z = 350 (М+1).

Промежуточный 4-(2-оксо-1,3-оксазолидин-3-ил)пиперидин получают следующим образом.

з). 1-Бензилоксикарбонил-4-(2-гидроксиэтиламино)пиперидин.

1-Бензилоксикарбонил-4-оксопиперидин (2.5 г) в метаноле (7.0 мл) добавляют к раствору этаноламина (1.3 мл) и уксусной кислоты (1.2 мл) в метаноле (20 мл). Через 5 минут добавляют в одну порцию цианборгидрида натрия (1.35 г) в метаноле (6 мл). После перемешивания в течение ночи реакционную смесь разбавляют водным раствором бикарбоната натрия, перемешивают в течение 30 минут и экстрагируют метиленхлоридом. Объединенные органические экстракты упаривают, растворяют в 1 н. соляной кислоте и промывают дихлорметаном. Водную фазу подшелачивают 1 н. раствором гидроксида натрия и экстрагируют метиленхлоридом. Экстракты сушат и упаривают, получают аминоспирт в виде масла (1.7 г).

Спектр ПМР (CD₃OD): 7.34 (м, 5), 5.10 (с, 2), 4.13 (м, 2), 3,64 (м, 2), 2,86 (м, 2), 2,73 (м, 2), 2,67 (м, 1), 1.90 (м, 2), 1.25 (м, 2); Масс-спектр: m/z = 279 (M+1).

и). 1-Бензилоксикарбонил-4-(2-оксо-1,3-оксазолидин-3-ил)пиперидин.

Раствор аминоспирта (1.7 г) и 1,1'-карбонилдиимидазола (2.4 г) в хлороформе (30 мл) нагревают с обратным холодильником в течение 6 часов. Реакционную смесь разбавляют метиленхлоридом и промывают 1 н. раствором гидроксида натрия и водой. Органическую фазу сушат и упаривают, получают оксазолидин-3-ил-пиперидин в виде вязкого масла (1.9 г).

Спектр ПМР: 7.35 (м, 5), 5.13 (с, 2), 4.34 (м, 4), 3.89 (м, 1), 3,49 (м, 2), 2.86 (м, 2), 1.78 (м, 2), 1.58 (м, 2). Масс-спектр: m/z = 305 (M+1).

к). 4-(2-Оксо-1,3-оксазолидин-3-ил)пиперидин.

Раствор описанного выше оксазолидин-3-ил пиперидина (1.85 г) и 20%-ный гидроксид палладия на угле (0.340 г) в этаноле перемешивают в течение ночи под давлением водорода 1 бар. Реакционную смесь фильтруют через диатомовую землю и фильтрат упаривают, получают заявляемое соединение (0.950 г) в виде белого твердого вещества.

Спектр ПМР (CD₃OD): 4.35 (м, 2), 3.75 (м, 1), 3.62 (м, 2), 3.20 (м, 2), 2,76 (м, 2), 1.75 (м, 4); Масс-спектр: m/z = 171 (M+1).

ПРИМЕР 2: Хлоргидрат (S)-/N-[2-(3,4-дихлорфенил)-4-(2-оксопергидро-1,3- оксазин-3-ил)пиперидинобутил]-N-метилбензамида.

По методике примера 1, заменяя 4-[4-(2-оксо-1,3-оксазолидин)пиперидин 4-(2-оксопергидро-1,3-оксазин-3-ил)пиперидином и N-[2-(3,4-дихлорфенил)-4-оксобутил] -N-метилбензамид соответствующим (S)-энантиомером, получают заявляемое соединение в виде белого твердого вещества.

Масс-спектр: m/z = 518 (М+1); Элементный анализ: Вычислено, %: C 56,61, H 6.24, N 7.12. C₂₇H₃₃Cl₂N₃O₃ · 1.55 HCl · 0.20 (C₂H₅)₂O.

Найдено, %: C 56.54, H 6.60, N 7.38.

(S)-N-[2-(3,4-Дихлорфенил)-4-оксобутил] -4-метилбензамид получают следующим способом.

а). 2-(3,4-Дихлорфенил)-4-гидроксибутиламин
К раствору 2-(3,4-дихлорфенил)-4-(тетрагидрофуран-2-илокси)бутиламина (550 г) в метаноле (3300 мл) при перемешивании добавляют в одну порцию 6.0 н. соляную кислоту (352 мл), при этом наблюдается небольшое выделение теплоты. После перемешивания в течение 3 часов реакционную смесь упаривают и остаток разбавляют водой до суммарного объема 3 л. Полученный раствор экстрагируют эфиром (2 х 500 мл), подщелачивают гранулированным гидроксидом натрия (100 г) и экстрагируют этилацетатом (4 х 500 мл). Объединенные этилацетатные экстракты промывают (800 мл насыщенного раствора хлорида натрия), сушат и упаривают, получают спирт в виде масла янтарного цвета (367 г), которое затвердевает при высоком вакууме.

Спектр ПМР: 7.39 (д, 1, J= 8.2), 7.28 (д, 1, J= 2.0), 7.04 (дд, 1, J= 8.2, 2.0), 3.65 (м, 1), 3.50 (м, 1), 2.90 (м, 2), 2,71 (м, 1), 2.25 (м, 2), 1.86 (м, 2).

б). (S)-2-(3.4-Дихлорфенил)-4-гидроксибутиламин
К раствору D-винной кислоты (222 г) в метаноле (4 л) при перемешивании и кипячении с обратным холодильником добавляют в одну порцию описанный выше аминоспирт (342 г) в теплом метаноле (2 л), дополнительно смывают метанолом (1 л). Смесь кипятят. Образование кристаллов наблюдается уже при температуре ниже температуры кипения. Через 1.5 часа смесь постепенно охлаждают до комнатной температуры и перемешивают в течение 3 дней. Первую часть соли винной кислоты отфильтровывают и сушат в вакуумной печке при температуре 60^oC, получают продукт (232 г). Этот продукт растворяют в кипящем метаноле (13.5 л) и кипятят в течение 1 часа, отгоняя при этом 1 л метанола. Смесь оставляют медленно охлаждаться до комнатной температуры и перемешивают в течение 4 дней. Первую часть кристаллов отфильтровывают и сушат, получают твердое вещество (178.8 г). Метанольный фильтрат упаривают до объема приблизительно 3 л. Полученную суспензию нагревают до кипения, получают прозрачный раствор, который оставляют при перемешивании медленно охлаждаться до комнатной температуры. Собирают вторую часть кристаллов (43.8 г).

Объединенные части твердых тартратов аминоспирта (22.6 г) растворяют в 1.0 н. гидроксиде натрия (1.5 л) и экстрагируют метиленхлоридом (4 х 500 мл). Объединенные органические экстракты промывают рассолом, сушат и упаривают, получают оптически обогащенный аминоспирт в виде практически белого твердого вещества (135.4 г).

Т. пл. 80 - 82^oC. Спектр ПМР (CD₃OD): 7.47 (д, 1, J=8.3), 7.42 (д, 1, J = 2.1), 7.17 (дд, J= 8.2, 2.1), 3,47 (м, 1), 3.34 (м, 1), 2.83 (м, 3), 1.92 (м, 1), 1.74 (м, 1). Масс-спектр: m/z = 324 (M+1).

в). Этил-(s)-N-[2-(3,4-дихлорфенил)-4-гидроксибутил]карбамат.

Этилхлорформиат (25.5 г) добавляют при перемешивании по каплям в течение 20 минут к раствору вышеописанного аминоспирта (50.0 г) и триэтиламина (24.9 г) в метиленхлориде (60 мл), охлажденному до -30^oC. Во время добавления температуру смеси поддерживают в интервале от -20 до 25^oC. Затем смеси дают постепенно нагреться до комнатной температуры в течение 4 часов и промывают 1 н. соляной кислотой, насыщенным водным раствором бикарботана натрия, насыщенным водным раствором хлорида натрия. Метиленхлоридный слой сушат и упаривают, получают карбамат в виде желтого масла (65.3 г).

Спектр ПМР (CD₃OD): 7.44 (д, 1, J=8.3), 7.38 (д, 1, J= 2.1), 7.15 (дд, 1, J= 8.2, 2.1), 3.99 (к, 2, J= 7.1), 3.45 (м, 1), 3,29 (м, 3), 2.97 (м, 1), 1,92 (м, 1), 1.75 (м, 1), 1.16 (т, 3, J=7.1). Масс-спектр: m/z = 306 (M+1).

г). (S)-N-Метил-2-(3,4-дихлорфенил)-4-гидроксибутиламин
Раствор вышеописанного карбамата (65.3 г) в тетрагидрофуране (500 мл) добавляют при перемешивании по каплям в течение 30 минут к суспензии алюмогидрида лития (16.0 г) в тетрагидрофуране (200 мл). При добавлении температура реакционной смеси повышается до 45^oC. Реакционную смесь кипятят в течение 1 часа, затем охлаждают до комнатной температуры и перемешивают в течение ночи. Смесь охлаждают на ледяной бане и затем добавляют по каплям в течение 45 минут насыщенный водный раствор сульфата натрия (50 мл). После перемешивания в течение 30 минут смесь фильтруют через диатомовую землю, фильтрат упаривают, получают метиламин в виде желтого масла (52.9 г).

Спектр ПМР: 7.37 (д, 1, J= 8.2), 7.27 (д, 1, J=2.0), 7.01 (дд, 1, J= 8.2, 2.1), 3,69 (м, 1), 3,53 (м, 1), 3,40 (м, 2), 2,76 (м, 3), 2.45 (м, 3), 1.89 (м, 2). Масс-спектр: m/z = 248 (M+1).

д). (S)-N-[-2-(3,4-дихлорфенил)-4-гидроксибутил]-N-метилбензамид
Раствор бензоилхлорида (31.5 г) в метиленхлориде (200 мл) добавляют при перемешивании по каплям в течение 45 минут к раствору вышеописанного амина (52.9 г) и триэтиламина (54.0 г) в метиленхлориде (1 л), охлажденном на ледяной бане до температуры 5 - 8^oC. Реакционную смесь перемешивают в течение 3 часов при комнатной температуре и затем промывают (1 н. соляная кислота, рассол). Слой метиленхлорида упаривают, получают желтое масло, которое хроматографируют (элюент метиленхлорид:этанол, градиент 100:0, 95:5), получают бензамид в виде белого твердого вещества (65.6 г).

Т. пл. 123-125^oC. Масс-спектр: m/z = 352 (M+1); [a]_D = -18.3^oC (c = 2.46, CH₃OH).

e). (S)-N-[2-(3.4-диxлopфенил)-4-oкcoбутил]-N-метилбензамид
Раствор вышеописанного спирта (12.9 г) в метиленхлориде (150 мл) каннюлируют в раствор перйодинана Десса-Мартина (Dеss-Martin) (18.6 г) и трет-бутанола в метиленхлориде (150 мл). После перемешивания в течение 5 минут реакционную смесь разбавляют эфиром (600 мл) и раствором бикарбоната натрия (19.7 г) и пентагидрата тиосульфата натрия (64.5 г) в воде. Двухфазную систему энергично перемешивают до тех пор, пока оба слоя не станут прозрачными (приблизительно 30 минут). Органический слой промывают насыщенным водным раствором бикарбоната натрия, сушат и упаривают. Сырой продукт хроматографируют (элюент метиленхлорид: эфир, 1:1). Альдегид осаждают эфиром и отфильтровывают их в виде белого твердого вещества (9.7 г).

Масс-спектр: m/z: = 350 (М+1).

Промежуточный 4-(2-оксопергидро-1,3-оксазин-3-ил) пиперидин получают следующим образом.

ж). 1-Бензилоксикарбонил-4-(3-гидроксипропиламино)пиперидин
По методике Примера 1.з, заменяя этаноламин на 3-амино-1-пропанол, получают аминопиперидин в виде масла.

Спектр ПМР (CD₃OD): 7,35 (м, 5), 5.10 (с, 2), 4.12 (м, 2), 3,62 (т, 2, J= 6,2), 2.86 (м, 2), 2.71 (м, 2), 2,65 (м, 1), 1.90 (м, 2), 1,71 (м, 2). Масс-спектр: m/z = 293 (М+1).

з). 1-Бензилоксикарбонил-4-(2-оксопергидро-1,3-оксазин-3-ил)пиперидин.

По методике Примера 1. и, заменяя 1-бензилоксикарбонил-4- (2-гидроксипропиламино)пиперидин на 1-бензилоксикарбонил-4-(3-гидроксипропиламино)пиперидин, получают оксазин-3-ил пиперидин в виде масла.

Спектр ПМР (CD₃OD): 7.35 (м, 5), 5.11 (с, 2), 4.22 (м, 5), 3.24 (м, 2), 2.88 (м, 2), 1.99 (м, 2), 1.69 (м, 4). Масс-спектр: m/z = 319 (M+1).

и). 4-(2-Оксопергидро-1,3-оксазин-3-ил)пиперидин
По методике Примера 1к, заменяя 1-бензилоксикарбонил-4-(2-оксо-1,3-оксазолидин-3-ил)пиперидин на 1-бензилоксикарбонил-4-(2-оксопергидро-1,3-оксазин-3-ил)пиперидин, получают пиперидин со снятой защитной группой в виде белого аморфного твердого вещества.

Спектр ПМР (CD₃OD): 4.24 (м,2), 4.12 (м, 1), 3.32 (м, 2), 3.22 (м, 2), 2.78 (м, 2), 2,03 (м, 2), 1.79 (м, 4). Масс-спектр; m/z = 185 (M+1).

ПРИМЕР 3: Хлоргидрат (S)-N-[2-(3,4-диxлopфенил)-4-[4- (2-оксоимидазолидин-1-ил) пиперидино]бутил]-N-метилбензамида
Раствор (S)-N-[4-[4-(2-аминоэтиламино)пиперидино] -2-(3,4- дихлорфенил)бутил]-N-метилбензамида (0.356 г) и 1,1'-карбонилдиимидазола (0,157 г) в хлороформе (6 мл) кипятят с обратным холодильником при перемешивании в течение 2 часов. Реакционную смесь разбавляют метиленхлоридом, промывают водным раствором бикарбоната натрия, сушат, упаривают и хроматографируют (Элюент метиленхлорид: метанол, градиент 98:2, 90:10). Полученный продукт растворяют в метиленхлориде и осаждают в виде хлоргидрата с помощью эфирного раствора хлористого водорода, упаривают и выдерживают в высоком вакууме в течение ночи. Получают заявляемое соединение в виде белого твердого вещества (0.244 г).

Масс-спектр: m/z = 503 (М+1). Элементный анализ:
Вычислено, %: C 55.47, H 6.20, N 9.65. C₂₆H₃₂Cl₂N₄O₂ · 1.70 HCl. · 0.20 (C₂H₅)₂O. Найдено, %: C 55.47, H 6.35, N 9,44.

Промежуточный (S)-N-[4-[4-(2-аминоэтиламино)пиперидина] -2- (3,4-дихлорфенил)бутил]-N-метилбензамид получают следующим способом.

а). 1-Бензилоксикарбонил-4-(2-аминоэтиламино)пиперидин
Раствор 1-бензилоксикарбонил-4-оксо-пиперидина (12.0 г) в метаноле (72 мл) добавляют к перемешиваемому раствору этилендиамина (5.2 г) и уксусной кислоты (8.8 мл) в метаноле (72 мл). Через 15 минут в одну порцию добавляют раствор цианборгидрида натрия (9.7 г) в метаноле (72 мл). После перемешивания в течение ночи реакционную смесь упаривают. Остаток растворяют в 1 н. соляной кислоте (100 мл). По каплям добавляют концентрированную соляную кислоту и перемешивают до прекращения выделения газа. Кислую водную смесь промывают метиленхлоридом, подщелачивают до pH 10 с помощью 10 н. раствора гидроксида натрия и экстрагируют метиленхлоридом. Органические экстракты сушат и упаривают, получают диамин в виде вязкого масла (7.5 г).

Спектр ПМР (CD₃OD): 7.35 (м, 5), 5.10 (с, 2), 4,12 (м, 2), 2,89 (м, 2), 2.70 (м, 5), 1.90 (м, 2). 1.24 (м, 2); Масс-спектр: m/z = 278 (М+1).

б). 1-Бензилоксикарбонил-4-[(2,2,2-трифторацетил)[2-(2,2,2- трифторацетиламино)этил]амино]пиперидин
К раствору вышеописанного диамина (7.5 г) в хлороформе (90 мл) добавляют трифторуксусный ангидрид (10.5 мл). После перемешивания в течение ночи реакционную смесь охлаждают до 0^oC, добавляют по каплям триэтиламин (8.3 г). Через час смесь разбавляют метиленхлоридом, промывают 1 н. соляной кислотой и водным раствором бикарбонатом натрия, сушат, упаривают и хроматографируют (элюент метиленхлорид:метанол, 98:2). Получают трифторацетилированный пиперидин в виде белой пены (8.9 г).

Спектр ПМР (CD₃OD): 7.35 (м, 5), 5.12 (с, 2), 4.28 (м, 2), 3.95 (м, 1), 3.48 (м, 4), 2.90 (м, 2), 1.78 (м, 4). Масс-спектр: m/z= 470 (M+1).

в). 4-[(2,2,2-трифторацетил)[2-(2,2,2-трифторацетиламино)-этил]амино]пиперидин.

По методике Примера 1.к, заменяя 1-бензилоксикарбонил-4-(2-оксо-1,3-оксазолидин-3-ил)пиперидин на 1-бензилоксикарбонил-4-[(2,2,2-трифторацетил)-[2-(2,2,2-трифторацетиламино) этил]амино]-пиперидин, получают пиперидин со снятой из положения 1 защитной группой в виде желтого масла.

Спектр ПМР (CD₃OD): 3.84 (м, 1), 3.51 (м, 4), 3.12 (м, 4), 2.61 (м, 2), 1.74 (м, 4). Масс-спектр: m/z = 336 (M+1).

г). (S)-N-[2-(3,4-Диxлopфенил)-4-[4-[(2,2,2-трифторацетил)- [-2-(2,2,2-трифторацетиламино)этил]амино]пиперидино]бутил-N-метилбензамид
По методике Примера 1, заменяя 4-(2-оксо-1,3-оксазолидин-3-ил)пиперидин на 4-[(2,2,2-тpифтopaцетил)[2-(2,2,2-трифторацетиламино)этил]амино]пиперидин и N-[2-(3,4-дихлорфенил)-4-оксобутил]-N-метилбензамид соответствующим (S)-энантиомером, получают N-бензамид в виде вязкого масла.

Масс-спектр: m/z = 669 (M+1).

д). (S)-N-[4-[4-(2-Аминoэтилaминo)пипеpидинo] -2-(3,4-дихлорофенил) бутил]-N-метилбензамид
Раствор сырого продукта из примера 3.г (2.5 г) в 20%-ном гидроксиде натрия (8.5 мл) и метаноле (11 мл) перемешивают в течение 1 часа. Реакционную смесь подкисляют до pH 2 с помощью 1 н. соляной кислоты и промывают 3 раза метиленхлоридом. Затем водную фазу подщелачивают до pH 10 с помощью 10 н. раствора гидроксида натрия и экстрагируют метиленхлоридом. Экстракты сушат и упаривают, получают диамин в виде вязкого масла (1.8 г).

Масс-спектр: m/z = 477. (M+1).

ПРИМЕР 4: Хлоргидрат (S)-N-[2-[3,4-Дихлорфенил)-4-[4-(2-триоксоимидазолидин-1-ил)пиперидино] бутил]-N-метилбензамида
По методике Примера 3, заменяя 1,1'-карбонилдиимидазол на 1,1'-тиокарбонил-2(1Н)-пиридон и вместо кипячения перемешивая при комнатной температуре в течение 1.5 часов, получают заявляемое соединение в виде твердого вещества.

Масс-спектр: m/z = 519 (M+1). Элементный анализ:
Вычислено, %: C 53.84, H 5.93, N 9.51. C₂₆H₃₂Cl₂N₄OS · 1.70 HCl · 0.10 (C₂H₅)₂O. Найдено, %: C 53.89, H 5.89, N 9.48.

ПРИМЕР 5: Дихлоргидрат (S)-N-[2-(3,4-Дихлорфенил)-4-[4-(2- оксопергидропиримидин-1-ил)пиперидино]бутил]-N-метилбензамида
По методике Примера 3, заменяя (S)-N-[4-[4-(2-аминоэтиламино)пиперидино] -2-(3,4-дихлорфенил)бутил] -N- метилбензамид на (S)-N-[4-[4-(3-aминoпpoпилaминo)пипеpидинo] -2- (3,4-дихлорфенил)бутил] -N-метилбензамид, получают заявляемое соединение в виде белого твердого вещества.

Масс-спектр: m/z = 527 (М+1): Элементный анализ: Вычислено,%: C 53.14, H 6.14, N 9.00. C₂₇H₃₄Cl₂N₄O₂ · 2.60 HCl · 0.13(C₂H₅)₂O. Найдено,%: C 53.14, H 6.31, N 9.16.

Промежуточный (S)-N-[4-[4-(3-аминопропиламино)пиперидино] -2- (3,4-дихлорфенил)бутил]-N-метилбензамид получают следующим образом.

а). 1-Бензилоксикарбонил-4-(3-аминопропиламино)пиперидин
По методике Примера 3. а, заменяя этилендиамин на 1,3-диаминопропан, получают пиперидин в виде вязкого масла.

Масс-спектр: m/z = 292 (М+1). Спектр ПМР (CD₃OD): 7.34 (м, 5), 5.10 (с, 2), 4.13 (м, 2), 2.86 (м, 2), 2,65 (м, 5), 1.90 (м, 2), 1,65 (м, 2), 1,23 (м, 2).

б). 1-Бензилоксикарбонил-4-[2,2,2-трифторацетил-[3-(2,2,2-трифторацетиламино) пропил]амино]пиперидин
По методике Примера 3.б, заменяя 1-бензилоксикарбонил-4-(2-аминоэтиламино)пиперидин на 1-бензилоксикарбонил-4-(3-аминопропиламино)пиперидин и добавляя триэтиламин к раствору перед добавлением трифторуксусного ангидрида при 0^oC, получают трифторацетилированный пиперидин в виде вязкого масла.

Спектр ПМР (CD₃OD): 7.36 (м, 5), 5.14 (с, 2), 4.35 (м, 2), 3,93 (м, 1), 3,35 (м, 4), 2,83 (м, 2), 1.87-1.74 (м, 6). Масс-спектр: m/z = 484 (М+1).

в). 4-[(2,2,2-Трифторацетил)[3-(2,2,2-трифторацетиламино)-пропил]амино] пиперидин
По методике Примера 1.к, заменяя 1-бензилоксикарбонил-4-(2-оксо- 1,3-оксазолидин-3-ил)пиперидин на 1-бензилоксикарбонил-4-[2,2,2-трифторацетил- [3-(2,2,2-трифторацетиламино)пропил] амино]-пиперидин, получают пиперидин со снятой с положения 1 защитной группой в виде вязкого масла.

Спектр ПМР (CD₃OD): 4.39 (м, 1), 3.98 (м, 1), 3.30 (м, 3), 2.95 (м, 1), 2.82 (м, 1), 2,65 (м, 2), 2.01 (м, 2), 1,75 (м, 2), 1.32 (м, 2). Масс-спектр: m/z = 350 (M+1);
г). (S)-N-[2-(3,4-Дихлорфенил)-4-[4-[(2,2,2-трифторацетил)-[2-(2,2,2- трифторацетиламино)этил]амино]пиперидино]-N-метилбензамид.

По методике Примера 1, заменяя 4-(2-оксо-1,3-оксазолин-3-ил)пиперидин на 4-[(2,2,2-трифторацетил)[3-(3,2,2-трифторацетиламино)пропил] амино]пиперидин и N-[2-(3,4-дихлорфенил)-4-оксобутил]-N-метилбензамид соответствующим (S)-энантиомером, получают N-метилбензамид.

Масс-спектр: m/z = 683 (M+1).

д). (S)-N-[4-[4-(3-Аминoпpoпилaминo)пипеpидинo] -2-(3,4-дихлорфенил) бутил]-N-метилбензамид
По методике Примера 3е. , заменяя (S)-N-[2-(3,4-дихлорфенил)-4-[4-[(2,2,2- трифторацетил)] 2-(2,2,2-трифторацетиламино)этил]амино]пиперидино] бутил- N-метилбензамид на N-[2-(3,4-дихлорофенил)-4-[4-[(2,2,2-трифторацетил)] 2- (2,2,2-трифторацетиламино)пропил] амино] пиперидино]бутил-N-метилбензамид, получают диамин в виде вязкого масла.

Масс-спектр: m/z = 491 (M+1).

ПРИМЕР 6: Дихлоргидрат (S)-N-[2-(3,4-Диxлopфенил)-4-[4- (2-тиоксопергидропиримидин-1-ил)пиперидино]бутил]-N-метилбензамида
По методике Примера 3, заменяя 1,1'-карбонилдиимидазол на 1,1'-тиокарбонилдиимидазол и заменяя (S)-N-[4-[4-(2-аминоэтиламино) пиперидино]-2-(3,4-дихлорфенил)бутил] -N-метилбензамид на (S)-N-[4-[4-(3-aминoпpoпилaминo)пипеpидинo] -2-(3,4-дихлорфенил) бутил]-N-метилбензамид и перемешивая при комнатной температуре вместо кипячения, получают заявляемое соединение в виде белого твердого вещества.

Масс-спектр: m/z = 533 (M+1). Элементный анализ: Вычислено, %: C 52,67, H 6.01, N 8,96. C₂₇H₃₄Cl₂N₄OS · 2.30 HCl. · 0.10 (CH₂H₅)₂O. Найдено, %: C 52,57, H 6.11, N 8.84.

ПРИМЕР 7: Хлоргидрат (S)-N-[2-(3,4-Диxлopфенил)-4-[4-(3-метил-2- тиоксопергидропиримидин-1-ил)пиперидино] бутил]-N-метилбензамида.

По методике Примера 1, заменяя 4-(2-оксо-1,3-оксазолидин-3-ил)пиперидин на 4-(3-метил-2-тиоксопергидропиримидин-1-ил)пиперидином и N-[2-(3,4- дихлорфенил)-4-оксобутил] -N-метилбензамид на соответствующем (S)-энантиомер, получают заявляемое соединение в виде белого твердого вещества.

Масс-спектр: m/z = 547 (М+1). Элементный анализ: Вычислено, %: C 55.28, H 6.23, N 9.08. C₂₈H₃₆Cl₂N₄OS · 1.70 HCl · 0.10 (C₂H₅)₂O. Найдено, %: C 55.21, H 6.37, N 8.88.

Промежуточный 4-(3-метил-2-тиоксопергидропиримидин-1-ил)пиперидин получают следующим образом.

a). 1-Бензилоксикарбонил-4-(3-метиламинопропиламино)пиперидин
По методике Примера 3.а, заменяя этилендиамин на N-метил-1,3-пропандиамином, получают заявляемое соединение в виде вязкого масла.

Масс-спектр: m/z = 306 (М+1). Спектр ПМР (CD₃OD): 7.34 (м, 5), 5.10 (с, 2), 4.13 (м, 2), 2.86 (м, 2), 2.70 (м, 5), 2.47 (с, 3), 1.91 (м, 2), 1.73 (м, 2), 1.24 (м, 2).

б). 1-Бензилоксикарбонил-4-(3-метил-2-тиоксопергидропиримидин-1- ил)пиперидин
Раствор диамина (3.0 г) и 1,1'-тиокарбонилдиимидазола (1.9 г) в хлороформе (70 мл) кипятят в течение 1.5 часов и перемешивают в течение ночи при температуре окружающей среды. Реакционную смесь разбавляют метиленхлоридом и промывают последовательно водой, 1 н. соляной кислотой и водным раствором бикарбоната натрия. Органическую фазу сушат, упаривают и хроматографируют (элюент метиленхлорид: эфир, 80: 20). Получают тиомочевину в виде желтого твердого вещества (1.4 г).

Масс-спектр: m/z = 348 (М+1). Спектр ПМР: (CD₃OD) 7,35 (м, 5), 5.66 (м, 1), 5.11 (с, 2), 4.24 (м, 2), 3,35 (м, 5), 3.22 (м, 2), 2,88 (м, 2), 1.92 (м, 2), 1.72-1.55 (м, 4).

в). 4-(3-Метил-2-тиоксопергидропиримидин-1-ил)пиперидин
К раствору вышеописанного пиперидина (1.4 г) и анизола (1.4 мл) в метиленхлориде (20 мл) при температуре 0^oC добавляют трифторметансульфокислоту. После перемешивания в течение 2 часов реакционную смесь упаривают, растворяют в метаноле, пропускают через колонку со слабо основной ионообменной смолой, упаривают и хроматографируют (элюент метиленхлорид: метанол, градиент 98:2, 90:10). Полученный продукт растворяют в разбавленной соляной кислоте, экстрагируют метиленхлоридом (отбрасывают) подщелачивают гидроксидом натрия. Водную фазу экстрагируют метиленхлоридом и упаривают, получают пиперидин в виде белого твердого вещества (0.75 г).

Масс-спектр: m/z = 214 (М+1). Спектр ПМР (CD₃OD): 5.53 (м, 1), 3.36 (м, 5), 3.29 (м, 2), 3.08 (м, 2), 2,64 (м, 2), 1.94 (м, 2), 1.72-1.53 (м, 4).

ПРИМЕР 8: Дихлоргидрат (S)-N-[2-(3,4-дихлорфенил)-4-[4-(2-оксо-1,3-пергидродиазепин-1-ил) пиперидино]бутил]-N-метилбензамида
По методике Примера 1, заменяя 4-(2-оксо-1,3-оксазолидин-3-ил)пиперидин на 4-(2-оксо-1,3-пергидродиазепин-1- ил)пиперидин и N-[2-(3,4-диxлopфенил)-4-oкcoбутил] -N-метилбензамид на соответствующий (S)-N-[2-(3,4-дихлорфенил)-4-оксобути] -N-метилбензамид, получают заявляемое соединение в виде белого твердого вещества.

Масс-спектр: m/z = 531 (M+1); Элементный анализ:
Вычислено, %: C 55.53, H 6,48, N 8.99. C₂₈H₃₆Cl₂N₄O₂ · 2.10 HCl · 0.20 (C₂H₅)₂O. Найдено,%: C 55.70, H 6.53, N 8.91.

Промежуточный 4-(2-оксо-1,3-пергидродиазепин-1-ил) пиперидин получают следующим образом.

а). 1-Бензилоксикарбонил-4-(4-аминобутиламино)пиперидин
По методике Примера 3.а, заменяя этилендиамин на 1,4-диаминобутан, получают заявляемое соединение в виде вязкого масла.

Масс-спектр: m/z = 306 (M+1). Спектр ПМР (CD₃OD): 7.34 (м, 5), 5.10 (с, 2), 4.13 (м, 2), 2.86 (м, 2), 2.63 (м, 5), 1.90 (м, 2), 1.51 (м, 4), 1.23 (м, 2).

б). 1-Бензилоксикарбонил-4-(2-оксо-1,3-пергидродиазепин-1-ил)пиперидин
Раствор диамина (1,6 г) и 1,1'-тиокарбонилдиимидазола (0.94 г) в хлороформе (40 мл) кипятят в течение 1 часа. Реакционную смесь разбавляют метиленхлоридом и промывают водой. Органическую фазу сушат, упаривают и хроматографируют (элюент метиленхлорид:метанол, градиент 98:2, 90:10). Получают мочевину в виде белого твердого вещества (0.36 г).

Масс-спектр: m/z = 332 (M+1). Спектр ПМР (CD₃OD): 7.34 (м, 5), 5.09 (с, 2), 4,21 (м, 3), 3.25 (м, 2), 3.13 (м, 2), 2.85 (м, 2), 1.58 (м, 6), 1.44 (м, 2).

ПРИМЕР 9: (S)-N-[2-(3,4-дихлорфенил)-4-[4-(2-оксо-5,5- диметилпергидропиримидин-1-ил)пиперидино]бутил]-N-метилбензамид
Раствор (S)-N-[N-[2-(3,4-дихлорфенил)-4-оксопропил] -N-метилбензамида (0,622 г) в метаноле (8.0 мл) добавляют к раствору 4-(2-оксо-5,5-диметилпергидропиримидин- 1-ил пиперидина (0,400 г) и уксусной кислоты (0.11 мл) в метаноле (8.0 мл). Через 5 минут в одну порцию добавляют раствор цианоборгидрида натрия (0.119 г) в метаноле (8.0 мл). После перемешивания в течение ночи реакционную смесь разбавляют водным раствором бикарбоната натрия, перемешивают в течение 30 минут и экстрагируют метиленхлоридом. Органический слой сушат, упаривают и хроматографируют (элюент метиленхлорид: метанол, 95: 5). Полученное масло, которое начинает кристаллизоваться при стоянии, суспендируют в эфире и фильтруют, получают заявленное соединение в виде белого твердого вещества (0.720 г).

Масс-спектр: m/z = 545 (М+1). Элементный анализ: Вычислено, %: C 63.84, H 7.02, N 10.27. C₂₉H₃₈Cl₂M₄O₂.

Найдено,%: C 63.95, H 6.95, N 10.15.

Промежуточный 4-(2-оксо-5.5'-диметилпергидропиримидин-1-ил)-пиперидин получают следующим способом.

а). 1-Бензилоксикарбонил-4-(3-амино-2,2-диметилпропиламино)-пиперидин.

По методике Примера 3.а, заменяя этилендиамин на 2,2-диметил-1,3-пропандиамин, получают заявляемое соединение в виде вязкого масла.

Спектр ПМР (CD₃OD): 7.34 (м, 5), 5.10 (с, 2), 4.08 (м, 2), 2.93 (м, 2), 2.57 (м, 1), 2.46 (с, 2), 2.44 (с, 2), 1.89 (м, 2), 1.27 (м, 2), 0.89 (с, 6).

б). 1-Бензилоксикарбонил-4-(2-оксо-5,5-диметилпергидропиримидин-1-ил) пиперидин
Раствор диамина (3,02 г) и 1,1'-тиокарбонилдиимидазола (2.19 г) в хлороформе (40 мл) кипятят в течение 3 часов. Реакционную смесь разбавляют метиленхлоридом и промывают последовательно 1 н. соляной кислотой и водным раствором бикарбоната натрия. Органическую фазу сушат, упаривают, растирают в эфире и фильтруют. Получают мочевину в виде белого твердого вещества (1.72 г).

Масс-спектр: m/z = 346 (М+1). Спектр ПМР (CD₃OD): 7.34 (м, 5), 5.10 (с, 2), 4.35 (м, 1), 4,23 (м, 2), 2,87 (м, 6), 1.58 (м, 4), 1.00 (с, 6).

в). 4-(2-Оксо-5,5-диметилпергидропиримидин-1-ил)пиперидин
По методике Примера 1.к, заменяя 1-бензилоксикарбонил-4-(2-оксо-1,3-оксазолидин-3-ил)пиперидин на 1-бензилоксикарбонил-4-(2-оксо- 5,5-диметилпергидропиримидин-1-ил)пиперидином, получают указанный пиперидин в виде белого твердого вещества.

Масс-спектр: m/z = 212 (М+1). Спектр ПМР (CD₃OD): 4.28 (м, 1), 3.10 (м, 2), 2.92 (м, 2), 2.89 (м, 2), 2.66 (м, 2), 1.59 (м, 4), 1.03 (с, 6).

ПРИМЕР 10: Цитрат (S)-N-[2-(3,4-дихлорфенил)-4-[4-(3- метил-2-оксопергидропиримидин-1-ил)пиперидино]бутил-N-метилбензамида
(S)-N-[2-(3,4-дихлорфенил)-4-оксобутил] -N-метилбензамид (0.883 г) в метаноле (10.0 мл) добавляют к раствору (4-(3-метил-2-оксопергидропиримидин-1- ил)пиперидина (0.498 г) и уксусной кислоты (0.145 мл) в метаноле (10.0 мл). Через 5 мин в одну порцию добавляют цианборгидрид натрия (0.159 г) в метаноле (10.0 мл). После перемешивания в течение 3.5 часов реакционную массу разбавляют водным раствором бикарбоната натрия, перемешивают в течение 30 минут и экстрагируют метиленхлоридом. Органический слой отделяют, упаривают и хроматографируют, используя в качестве элюента метиленхлорид:метанол, 95: 5. Полученное масло (0.970 г) и лимонную кислоту (0.352 г) растворяют в метаноле и упаривают. Получают названное соединение в виде стеклообразного продукта, который растирают с образованием белого твердого вещества (1.27 г);
Масс-спектр: m/z = 531 (М+1); Элементный анализ:
Вычислено, %: C 55.53, H 6.11, N 7.48. C₂₈H₃₆Cl₂N₄O₂ · 1.10 C₆H₈O₇ · 0.30H₂O; Найдено, %: C 55.55, H, 6,04, N 7.46.

Промежуточный 4-(3-метил-2-оксопергидропиримидин-N-ил) пиперидин получают следующим способом.

а). 1-Бензилоксикарбонил-4-(2-оксопергидропиримидин-1-ил)пиперидин.

Раствор 1-бензилоксикарбонил-4-(3-аминопропиламино)пиперидина (10.1 г) и 1,1'-карбонилдиимидазола (6,2 г) в хлороформе (250 мл) при перемешивании кипятят в течение 2 часов. Смесь промывают водой, органический слой отделяют и сушат, затем упаривают растворитель и хроматографируют, элюент метиленхлорид: метанол, 90:10. Получают мочевину в виде белого твердого продукта (7.4 г).

Масс-спектр: m/z = 318 (M⁺¹); Спектр ПМР (CDCl₃): 7.35 (м, 5), 5.12 (с, 2), 4,75 (м, 1), 4,50 (м, 1), 4,26 (м, 2), 3,27 (м, 2), 3.13 (м, 2), 1.89 (м, 2), 1,63 (м, 4).

б). 1-Бензилоксикарбонил-4-(3-метил-2-оксопергидропиримидин-1-ил)пиперидин
К раствору 1-бензилоксикарбонил-4-(2-оксопергидропиримидин-1-ил) пиперидина (3,06 г) в тетрагидрофуране (88 мл) добавляют трет.-бутоксид калия (19.3 мл, 1 М раствор в тетрагидрофуране). Затем добавляют йодметан (2.4 мл) и реакционную смесь перемешивают в течение 30 минут. Далее реакционную смесь разбавляют метиленхлоридом, промывают водой и хроматографируют, элюент метиленхлорид: метанол, градиент 98:2, 90:10). Полученный продукт растирают с эфиром, отфильтровывают и получают N-метильное производное в виде белого твердого вещества (2.78 г).

Масс-спектр: m/z = 332 (М⁺¹). Спектр ПМР (CDCl₃): 7.34 (м, 5), 5.12 (с, 2), 4,53 (м, 1), 4,26 (м, 2), 3.21 (м, 2), 3.11 (м, 2), 2.93 (с, 3), 2.86 (м, 2), 1.91 (м, 2), 1.60 (м, 4).

в). 4-(3-Метил-2-оксопергидропиримидин-1-ил) пиперидин
По методике Примера 1. к и используя вместо 1-бензилоксикарбонил-4-(2-оксо-1,3-оксазолидин-3-ил)пиперидина 1-бензилоксикарбонил-4-(3-метил-2-оксопергидропиримидин-1-ил)пиперидин, получают пиперидин в виде вязкого масла.

Масс-спектр: m/z = 198 (М+1); Спектр ПМР (CD₃OD): 4.19 (м, 1), 3.14 (м, 4), 2.98 (м, 2), 2.80 (с, 3), 2.53 (м, 2), 1.82 (м, 2), 1.48 (м, 4).

ПРИМЕР 11: Цитрат (S)-N-[2-(3,4-диxлopфенил)-4-[4-(3-этил-2-оксопергидропиримидин-1-ил) пиперидино]бутил]-N-метилбензамида
По методике Примера 10 и используя 4-(3-метил-2-оксопергидропиримидин-1-ил)пиперидин вместо 4-(3-метил-2-оксопергидропиримидин-1-ил)пиперидина, получают названное соединение в виде белого твердого продукта.

Масс-спектр: m/z = 545 (М+1); Элементный анализ:
Вычислено, %: C 56,98, H 6.28, N 7.59. C₂₉H₃₈Cl₂N₄O₂ · 1.00 C₆H₈O₇. Найдено, %: C 56,66, H 6,31, N 7.57.

Промежуточный 4-(3-этил-2-оксопергидропиримидин-1-ил)пиперидин получают следующим способом.

а). 1-Бензилоксикарбонил-4-(3-этил-оксопергидропиримидин-1-ил)пиперидин.

Используя методику Примера 10.б и заменяя йодметан йодэтаном, при растирании полученного продукта в эфире получают бензилоксикарбонильное производное в виде белого твердого вещества.

Масс-спектр: m/z = 346 (М+1). Спектр ПМР (CDCl₃): 7.34 (м, 5), 5.12 (с, 2), 4.54 (м, 1), 4.26 (м, 2), 3.38 (кв, 2, J= 7.1), 3.22 (м, 2), 3.11 (м, 2), 2.86 (с, 2), 1.90 (м, 2), 1.60 (м, 4), 1.10 (т, 3, J= 7.1).

в). 4-(3-Этил-2-оксопергидропиримидин-1-ил)пиперидин
По методике Примера 1.к и используя вместо 1-бензилоксикарбонил-4- (2-оксо-1,3-оксазолидин-3-ил)пиперидина 1-бензилоксикарбонил-4-(3-этил-2- оксопергидропиримидин-1-ил) пиперидин, получают пиперидин в виде вязкого масла.

Масс-спектр: m/z = 212 (М+1); Спектр ПМР (CDCl₃): 4.45 (м, 1), 3.38 (кв, 2, J = 7.1), 3.17 (м, 6), 2.72 (м, 2), 2,15 (м, 1), 1.91 (м, 2), 1.62 (м, 4), 1.10 (т, 2. J= 7.1).

ПРИМЕР 12: Цитрат (S)-N-[2-(3,4-дихлорфенил)-4-[4-(3-(N,N- диметилкарбамоилметил)-2-оксопергидропиримидин-1-ил/пиперидино] бути]-N-метилбензамида
По методике Примера 10 и используя 4-[3-(N,N-диметилкарбамоилметил) -2-оксопергидропиримидин-1-ил)пиперидин вместо 4-(3-метил-2-оксопергидропиримидин-1-ил)пиперидина, получают названное соединение в виде белого твердого продукта.

Масс-спектр: m/z = 602 (М+1). Элементный анализ:
Выявлено, %: C 55,48, H 6.16, N 8.60. C₁₃H₄₁Cl₂N₅O₃ · 1.0 C₆H₈O₇. Найдено, %: C 55.22, H 6,26, N 8.65.

Промежуточный 4-[3-(N,N-диметилацетамидо)-2-оксопергидропиримидин-1-ил] -пиперидин получают следующим способом.

а). 1-Бензилоксикарбонил-4-(3-карбоксиметил-2-оксопергидропиримидин-1-ил) пиперидин
К 1-бензилоксикарбонил-4-(2-оксопергидропиримидин-1-ил)пиперидину (15.0 г) добавляют трет. -бутоксид калия (52 мл, 1 М раствор в трет.-бутаноле) и полученный раствор перемешивают в течение 35 минут. Затем добавляют трет.-бутилбромацетат (7.65 мл) и полученную смесь перемешивают в течение ночи. Реакционную смесь разбавляют тетрагидрофураном (20 мл) и метиленхлоридом (10 мл) и метиленхлоридом (10 мл), затем добавляют йодид тетрабутиламмония (1.74 г), трет.-бутоксид калия (52 мл, 1 М раствор в трет.-бутаноле) и трет.-бутилбромацетат (7.65 мл). После перемешивания в течение ночи реакционную массу разбавляют метиленхлоридом и промывают водой. Органический слой отделяют и сушат, упаривают растворитель в вакууме, образующееся масло растворяют в 1 н. соляной кислоте (700 мл), тетрагидрофуране (200 мл) и метаноле (200 мл). После перемешивания в течение ночи реакционную массу упаривают в вакууме для удаления органических растворителей. Полученный водный раствор экстрагируют метиленхлоридом 2 н. соляной кислотой до pH 2 и экстрагируют метиленхлоридом. Первый органический экстракт упаривают и получают 1-бензилоксикарбонил-4-(2-оксопергидропиримидин-1-ил)-пиперидин (7.0 г). Второй органический экстракт промывают водой, сушат и упаривают. Сырой продукт растирают с эфиром и отфильтровывают. Получают названное соединение в виде белого твердого вещества (8.3 г).

Масс-спектр: m/z = 376 (М+1). Спектр ПМР (CDCl₃): 7.35 (м, 5), 5.12 (с, 2), 4.48 (м, 1), 4.28 (м, 2), 4.02 (с, 2), 3.35 (м, 2), 3.18 (м, 2), 2.87 (м, 2), 1.97 (м, 2), 1.65 (м, 4).

б). 1-Бензилоксикарбонил-4-[3-(N, N-диметилкарбамоилметил)-2- оксопергидропиримидин-1-ил]пиперидин
Раствор 1-бензилоксикарбонил-4-(3-карбоксиметил-2-оксопергидропиримидин- 1-ил)пиперидина (2,00 г), хлоргидрата диметиламина (0.522 г), триэтиламина (0.89 мл), 4-диметиламинопиридина (0.781 г) и хлоргидрата 1-(3-диметиламинопропил)-3-этилкарбодиимида (1.23 г) в метиленхлориде (55 мл) перемешивают в течение ночи. Реакционную смесь промывают (1 н. соляной кислотой, водным раствором бикарбоната натрия), сушат и упаривают. Сырой продукт хроматографируют (элюент метиленхлорид: метанол, градиент 98:2, 80:20), полученный продукт растирают с эфиром, отфильтровывают и получают амид в виде белого твердого вещества (2.00 г).

Масс-спектр: m/z = 403 (М+1). Спектр ПМР (CDCl₃): 7.35 (м, 5), 5.12 (с, 2), 4.50 (м, 1), 4,27 (м, 2), 4.12 (с, 2), 3,35 (м, 2), 3.18 (м, 2), 3.01 (с, 3), 2.95 (м, 2), 2.84 (м, 2), 1.98 (м, 2), 1,64 (м, 4).

в). 4-/3-(N,N-диметилацетамидо)-2-оксопергидропиримидин-1-ил/пиперидин
По методике Примера 1.к с использованием 1-бензилоксикарбонил-4-[3-(N, N-диметилкарбамоилметил)-2- оксопергидропиримидин-1-ил] пиперидина вместо 1-бензилоксикарбонил-4-(2-оксо-1,3-оксазолидин-3-ил)пиперидина после растирания получаемого продукта в эфире получают названный пиперидин в виде белого твердого вещества.

Масс-спектр: m/z = 269 (М+1). Спектр ПМР (CDCl₃): 4.40 (м, 1), 4.12 (с, 2), 3.35 (м,2), 3.24 (м, 2), 3.11 (м, 2), 3.02 (с, 3), 2.95 (с, 3), 2,69 (м, 2), 2.14 (м, 1), 1.98 (м, 2), 1.64 (м, 4).

ПРИМЕР 13: Цитрат (S)-N-[2-(3,4-дихлорфенил)-4-/4-(3-N-метилкарбамоилметил-2- оксопергидропиримидин-1-ил)пиперидино]бутил]-N-метилбензамида
По методике Примера 10 и используя 4-[3-(N-метилкарбамоилметил)-2- оксопергидропиримидин-1-ил)пиперидин вместо 4-(3-метил-2- оксопергидропиримидин-1-ил)пиперидина, получают названное соединение в виде белого твердого продукта.

Масс-спектр: m/z = 588 (М+1). Элементный анализ:
Вычислено, %: C 54.46, H 6.06, N 8.67. C₃₀H₃₉Cl₂N₅O₃ · 1.10 C₆H₈O₇ · 0.40 H₂O. Найдено,%: C 54.49, H 6.10, N 8,64.

Промежуточный 4-[3-(N-метилкарбамоилметил)-2-оксопергидропиримидин-1-ил] пиперидин получают следующим способом.

а). 1-Бензилоксикарбонил-4-[3-(N-метилацетамидо)-2- оксопергидропиримидин-1-ил]пиперидин
По методике Примера 12.б с использованием хлоргидрата метиламина вместо хлоргидрата диметиламина получают названный амид в виде смолы. Масс-спектр: m/z = 389 (М+1). Спектр ПМР (CDCl₃): 7.35 (м, 5), 6.59 (м. 1), 5.12 (с, 2), 4.47 (м, 1), 4.28 (м, 2), 3.92 (с, 2), 3.34 (м, 2), 3.16 (м, 2), 2.86 (м, 2), 2.80 (с, 1.5), 2.79 (с, 1.5), 1.96 (м, 2), 1.63 (м, 4).

б). 4-[3-N-Метилкарбамоилметил-2-оксопергидропиримидин-1-ил]-пиперидин.

По методике Примера 1.к и используя вместо 1-бензилоксикарбонил-4-(2-оксо-1,3-оксазолидин-3-ил)пиперидина 1-бензилoкcикapбoнил-4-[3-(N-метилкарбамоилметил)-2-оксопергидропиримидин-1-ил) -пиперидин, получают пиперидин в виде смолы.

Масс-спектр: m/z = 255 (М+1). Спектр ПМР (CDCl₃): 6.70 (м. 1), 4.38 (м, 1), 3.92 (с, 2), 3.35 (м, 2), 3.23 (м, 2), 3.14 (м, 2), 2.81 (с, 1.5), 2.79 (с, 1.5), 2.72 (м, 2), 2.10 (м, 1), 1.97 (м, 2), 1.64 (м, 4).

ПРИМЕР 14: Цитрат (S)-N-[2-(3,4-дихлорфенил)-4-[4-(3-N- бензилкарбамоилметил-2-оксопергидропиримидин-1-ил)пиперидино] бутил]-N-метилбензамида
По методике Примера 10 и используя 4-[3-(N-бензилкарбамоилметил)-2-оксопергидропиримидин-1-ил)пиперидин вместо 4-(3-метил-2-оксопергидропиримидин-1-ил)пиперидина, получают названное соединение в виде белого твердого продукта.

Масс-спектр: m/z = 664 (М+1). Элементный анализ:
Вычислено, %: C 57,69, H 7.89. C₃₆H₄₃Cl₂N₅O₃ · 1.10 C₆H₈O₇ · 0.60 H₂O. Найдено, %: C 57.65, H 6.00, N 7.90.

Промежуточный 4-[3-(N-бензилкарбамоилметил)-2-оксопергидропиримидин-1- ил/пиперидин получают следующим способом.

а). 1-Бензилоксикарбонил-4-[3-(N-бензилкарбамоилметил)-2- оксопергидропиримидин-1-ил]пиперидин.

По методике Примера 12.б с использованием бензиламина вместо хлоргидрата диметиламина и исключением из реакции триэтиламина получают названный амид в виде смолы.

Масс-спектр: m/z = 465 (М+1); Спектр ПМР (CD₃OD): 7.34 (м, 5), 7.28 (м, 5), 5.10 (с, 2), 4.38 (с, 2), 4.33 (м, 1), 4.22 (м, 2), 3.99 (с, 2), 3.30 (м, 2), 3.20 (м, 2), 2,85 (м, 2), 1.95 (м, 2), 1.60 (м, 4).

б). 4-[3-(N-Бензилкарбамоилметил)-2-оксопергидропиримидин-1-ил]пипеpидин
По методике Примера 1.к и используя вместо 1-бензилоксикарбонил-4-(2- оксо-1,3-оксазолидин-3-ил)пиперидина 1-бензилоксикарбонил-4-[3- (N-бензилкарбамоилметил)-2-оксопергидропиримидин-1-ил)пиперидин, получают названный пиперидин в виде вязкого масла.

Масс-спектр, m/z = 331 (М+1). Спектр ПМР (CDCl₃): 7.29 (м, 5), 4.39 (с, 2), 4.30 (м, 1), 4.00 (м, 2), 3.30 (м, 4), 3.16 (м, 2), 7.23 (м, 2), 1.98 (м, 2), 1.68 (м, 4).

ПРИМЕР 15: Цитрат (S)-N-[2-(3.4-диxлopфенил)-4-[4-[3-(этоксикарбонилметил-2- оксопергидропиримидин-1-ил)пиперидинов бутил] -N-метилбензамида
По методике Примера 10 и используя 4-[3-(этоксикарбонилметил)-2- оксопергидропиримидин-1-ил)пиперидин вместо 4-(3-метил-2-оксопергидропиримидин-1-ил)пиперидина, получают названное соединение в виде белого твердого продукта.

Масс-спектр: m/z = 603 (М+1). Элементный анализ:
Вычислено, %: C 55.41, H 6.04, N 6.88. C₃₁H₄₀Cl₂N₄O₄ · 1.10 C₆H₈O₇. Найдено,%: C 55.28, H 6.11, N 6.86.

Промежуточный 4-[3-(этоксикарбонилметил)-2-оксопергидропиримидин-1-ил] пиперидин получают следующим способом.

а). 1-Бензилоксикарбонил-4-[3-(этоксикарбонилметил)-2- оксопергидропиримидин-1-ил]пиперидин
Раствор 1-бензилоксикарбонил-4-(3-карбоксиметил-2-оксопергидропиримидин-1- ил]пиперидина (1.51), 2-этокси-1- этоксикарбонил-1,2-дигидрохинолина (1.64 г) и бикарбоната аммония (1.43 г) в хлороформе (30 мл) перемешивают в течение 4 часов. Реакционную массу разбавляют метиленхлоридом, промывают 1 н. соляной кислотой (5 раз), сушат и упаривают. Сырой продукт хроматографируют, элюент метиленхлорид: метанол, градиент 98:2, 90:10. Полученный продукт растирают с эфиром, получают сложный эфир в виде белого твердого вещества (1.25 г).

Масс-спектр: m/z = 404 (М+1). Спектр ПМР (CDCl₃): 7.34 (м, 5), 5.11 (с, 2), 4.49 (м, 1), 4.26 (м, 2), 4.18 (кв. 2, J= 7.1), 4.06 (с, 2), 3.31 (м, 2), 3.17 (с, 2), 2.84 (м, 2), 1.97 (м, 2), 1.64 (м, 4), 1.26 (т. 3, J= 7.1).

б). 4-[3-(Этоксикарбонилметил)-2-оксопергидропиримидин-1-ил]-пиперидин.

По методике Примера 1.к и используя вместо 1-бензилоксикарбонил-4- (2-оксо-1,3-оксазолидин-3-ил)пиперидина 1-бензилоксикарбонил-4-[3- (этоксикарбонилметил)-2-оксопергидропиримидин-1-ил)-пиперидин, названный получают пиперидин в виде вязкого масла.

Масс-спектр: m/z = 270 (М+1). Спектр ПМР (CDCl₃: 4.41 (м, 1), 4.19 (кв, 2, J= 7.1), 4.07 (с, 2), 3.32 (м, 2), 3.24 (м, 2), 3,12 (м, 2), 2.70 (м, 2), 2.09 (м, 1), 1.98 (м, 2), 1.63 (м, 4), 1.27 (т, 3, J= 7.1).

ПРИМЕР 16: Цитрат (S)-N-[2-(3,4-дихлорфенил)-4-[4- (2-оксопергидропиримидин-1-ил)пиперидино]бутил]-N-этилбензамида
По методике Примера 10 и используя 4-(2-оксопергидропиримидин-1-ил)пиперидин вместо 4-(3-метил-2-оксопергидропиримидин-1-ил)пиперидина и (S)-N-[2-(3,4- дихлорфенил)-4-оксобутил] -N-этилбензамид вместо N-[2-(3,4- дихлорфенил)-4-оксобутил] -N-метилбензамида получают названное соединение в виде белого твердого продукта.

Масс-спектр: m/z = 531 (М+1). Элементный анализ:
Вычислено,%: C 55.53, H 6.11, N 7.48. C₂₀H₃₆Cl₂N₄O₂ · 1.10 C₆H₈O₇ · 0.30 H₂O. Найдено, %: C 55.51, H 6.19, N 7.47.

Промежуточный (S)-N-[2-(3,4-дихлорфенил)-4-оксобутил] - N-этилбензамид получают следующим образом.

а). (S)-N-[2-(3,4-Дихлорфенил)-4-гидроксибутил]бензамид.

К раствору (S)-2-(3,4-дихлорфенил)-4-гидроксибутиламин (15.0 г) и триэтиламина (9.0 мл) d метиленхлориде (200 мл) при 0^oC добавляют раствор бензойного ангидрида (14,6 г) в метиленхлориде (50 мл). После перемешивания при 0^oC в течение 1 ч и затем при комнатной температуре в течение 1 ч реакционную смесь промывают (1 н. соляной кислотой, насыщенным водным раствором бикарбоната натрия) и отделяют органический
слой, который сушат и упаривают. Сырой продукт хроматографируют, элюент метиленхлорид: метанол, градиент, 98: 2, 90:10. Получают названный амид в виде светло-желтой смолы (17.5 г).

Масс-спектр: m/z = 338 (М+1). Спектр ПМР (CDCl₃): 7.65 (м, 2), 7.48 (м, 1), 7.38 (м, 3), 7.33 (д, 1, J = 2.1), 7.07 (дд, 1, J= 2.1, 8.2), 6.44 (м, 1, NH), 3,83 (м, 1), 3.70 (м, 1), 3.58-3.41 (м, 2), 3.13 (м, 1), 2.47 (м, 1, OH), 1.99 (м, 1), 1.84 (м, 1).

б) (S)-N-[4-Ацетокси-2-(3,4-дихлорфенил)бутил]бензамид
К раствору (S)-N-[2-(3,4-дихлорфенил)-4-гидроксибутил]бензамида (17.5 г) и пиридина (8.4 мл) в метиленхлориде (400 мл) при 0^oC добавляют ацетилхлорид (4.6 мл). Реакционную массу перемешивают при комнатной температуре в течение ночи и затем промывают водой и насыщенным водным раствором сульфата меди (II). Органический слой отделяют, сушат и упаривают. Получают ацетильное производное в виде светло-желтого масла.

Масс-спектр: m/z = 380 (М+1). Спектр ПМР (CDCl₃): 7.63 (м, 2), 7.48 (м, 1), 7.39 (м, 3), 7.32 (д, 1, J= 2.1), 7.06 (дд, 1, J= 2.1, 8.2), 6.21 (м, 1), 4.03 (м, 1), 3,87 (м, 2), 3.41 (м, 1), 3.07 (м, 1), 2.09 (м, 1), 1.98 (с, 3), 1.92 (м, 1).

в). (S)-N-[4-Ацетокси-2-(3,4-дихлорфенил)бутил]-N-этилбензамид
(S)-N-[4-Ацетокси-2-(3,4-дихлорфенил)бутил] бензамид (4.2 г) в тетрагидрофуране (15 мл) добавляют в суспензию гидрида натрия (0.58 г, 60%-ная дисперсия в минеральном масле) и йодметана (1.0 мл) в тетрагидрофуране (5 мл). Реакционную массу перемешивают в течение ночи и затем упаривают в вакууме, остаток растворяют в метиленхлориде и промывают водой. Органический слой отделяют, сушат, упаривают и хроматографируют, элюент метиленхлорид: метанол, 10: 1. Получают названное N-этильное производное в виде масла (3.7 г). Масс-спектр: m/z = 408 (М+1).

г). (S)-N-[2-(3,4-Диxлopфенил)-4-гидpoкcибутил]-N-этилбензамид
Раствор (S)-N-[4-ацетокси-2-(3,4-дихлорфенил)бутил]-N-этилбензамида (3,7 г) в 1 н. растворе гидроксида натрия (27 мл), тетрагидрофурана (70 мл), воды (20 мл) и метанола (15 мл) перемешивают в течение 3 часов. Реакционную массу упаривают в вакууме, остаток растворяют в метиленхлориде и промывают водой. Органический слой отделяют, сушат и упаривают. Получают спирт в виде масла (3.2 г). Масс-спектр: m/z = 366 (М+1),
д). (S)-N-[2-(3,4-дихлорфенил)-4-оксобутил]-N-этиленбензамид
К раствору оксалилхлорида (1.3 мл) в метиленхлориде (30 мл) при - 78^oC добавляют диметилсульфоксид (2.1 мл) в метиленхлориде (10 мл), а затем за 5 мин добавляют (S)-N-[2-(3,4-дихлорфенил)-4-гидроксибутил] -N-этилбензамид (3.2 г) в метиленхлориде (15 мл). Через 15 минут добавляют триэтиламин (8.2 мл) и дают реакционной массе нагреться до комнатной температуры. Затем смесь разбавляют метиленхлоридом и промывают разбавленной соляной кислотой, водой и водным раствором бикарбоната натрия. Органический слой отделяют, сушат, упаривают. Полученный остаток хроматографируют, элюент метиленхлорид:эфир: гексан, 2: 1: 1. Получают названный альдегид в виде масла (2.5 г). Масс-спектр: m/z = 364 (М+1).

ПРИМЕР 17: Цитрат (S)-N-[2-(3,4-дихлорфенил)-4-[4-(2-оксопергидропиримидин-1-ил) пиперидино]бутил]-4-фтор-N-метилбензамида
К раствору (S)-N-[2-(3,4-дихлорфенил)-4-[4-(2-оксопергидропиримидин-1-ил) пиперидино] бутил] -N-метиламина (0.400 г) и пиридина (0.16 мл) в метиленхлориде (10 мл) при -30^oC добавляют 4-фторбензоилхлорид (0.115 мл). Реакционной массе позволяют нагреться до комнатной температуры и перемешивают в течение 1 ч. Затем полученную реакционную массу разбавляют метиленхлоридом, промывают водным раствором бикарбоната натрия и насыщенным водным раствором сульфата меди (II), сушат и упаривают. Сырой продукт хроматографируют, элюент метиленхлорид: метанол, градиент 98:2, 80:10. Чистый продукт (0.350 г) и лимонную кислоту (0.126 г) растворяют в метаноле и упаривают. Получают названное соединение в виде стеклообразной массы, которую растирают до белого твердого продукта (0.450 г).

Масс-спектр: m/z = 535 (М+1). Элементный анализ:
Вычислено, %: C 53.25, H 5.80, N 7.30. C₂₇H₃₃Cl₂FN₄O₂ · 1.10 C₆H₈O₇ · 0.10 (C₂H₅)₂O · 0.70 H₂O. Найдено, %: C 53.22, H 5.70, N 7.30.

Промежуточный (S)-N-[2-(3,4-дихлорфенил)-4-[4-(2-оксопергидропиримидин- 1-ил)пиперидино]бутил]-N-метиламин получают следующим образом.

а). Трет. -бутил-(S)-N-[2-(3,4-дихлорфенил)-4-гидроксибутил] -N-метилкарбамат.

К раствору (S)-N-метил-[2-(3,4-дихлорфенил)-4-гидроксибутиламина (25.0 г) в метиленхлориде (125 мл) за 30 мин по каплям добавляют ди-трет.-бутилдикарбонат (21.6 г) в метиленхлориде (125 мл). Реакционную массу перемешивают в течение 3 ч, промывают 0.1 н. соляной кислотой и водным раствором бикарбоната натрия, сушат и упаривают. Сырой продукт хроматографируют, элюент метиленхлорид: эфир, 2:1. Получают трет.-бутиловый эфир в виде масла (33.0 г), которое со временем кристаллизуется.

б). Трет.-бутил-(S)-N-[2-(3,4-дихлорфенил)-4-оксобутил]-N-метилкарбамат.

По методике Примера 16. д с использованием трет.-бутил-(S)-N-[2-(3,4- дихлорфенил)-4-гидроксибутил] -N-метилкарбамата вместо (S)-N-[2-(3,4- дихлорфенил)-4-гидроксибутил] -N-этилбензамида получают альдегид в виде масла, которое используется в следующей реакции.

в). Трет. -бутил-(S)-N-[2-(3,4-дихлорфенил)-4-[4-(2- оксопергидропиримидин-1-ил)пиперидино]бутил]-N-метилкарбамат
По методике Примера 10 и используя 4-(2-оксопергидропиримидин-1-ил) пиперидин вместо 4-(3-метил-2-оксопергидропиримидин-1- ил)пиперидина и трет. -бутил-(S)-N-[2-(3,4-дихлорфенил)-4- оксобутил]-N-метилбензамида вместо N-[2-(3,4-дихлорфенил)-4-оксобутил]-N-метилбензамида, получают названное соединение в виде смолы.

г). (S)-N-[2-(3,4-дихлорфенил)-4-[4-(2-оксопергидропиримидин-1-ил) пиперидино]бутил]-N-метиламин.

К раствору трет.-бутил-(S)-N-[2-(3,4-дихлорфенил) -4-[4-(2-оксопергидропиримидин-1-ил)пиперидино]бутил]-N-метилкарбамата (5.1 г) в метиленхлориде (200 мл) добавляют трифторуксусную кислоту (7:7 мл). Через 30 минут добавляют еще одну порцию трифторуксусной кислоты (7.5 мл) и полученную смесь перемешивают в течение 4 ч. Затем смесь промывают 1 н. раствором гидроксида натрия (150 мл), сушат и упаривают. Получают названное соединение в виде смолы (3.8 г). Масс-спектр: m/z = 413 (М+1).

ПРИМЕР 18: Цитрат (S)-N-[2-(3,4-дихлорфенил)-4- (2-оксопергидропиримидин-1-ил)пиперидино]бутил]-4-метил-N-метилбензамида
По методике Примера 17, заменяя 4-фторбензоилхлорид на п-толуоилхлорид, получают названное соединение в виде твердого вещества.

Масс-спектр: m/z = 531 (М+1). Элементный анализ: Вычислено, %: C 55.63, H 6.18, N 7.41. C₂₈H₃₆Cl₂N₄O₂ · 0.10 (C₂H₅)₂O. 0.30 H₂O. Найдено, %: C 55.58, H 6.17, N 7.52.

ПРИМЕР 19: Цитрат (S)-N-[2-(3,4-диxлopфенил)-4-[4-(2- оксопергидропиримидин-1-ил)пиперидино]бутил]-4-метокси-N-метилбензамида
По методике Примера 17, заменяя 4-фторбензоилхлорид на 4-метоксибензоилхлорид, получают названное соединение в виде твердого вещества.

Масс-спектр: m/z = 547 (М+1). Элементный анализ:
Вычислено, %: C 53.92, H 6.10, N 7.19. C₂₈H₃₆Cl₂N₄O₂ · 0.10 (C₂H₅)₂O · 0.70 H₂О. Найдено, %: C 53.93, H 5.99, N 7.19.

ПРИМЕР 20: Цитрат (S)-N-[2-(3,4-дихлорфенил)-4-[4-(2-оксопергидропиримидин-1-ил)пиперидин]бутил]- 4-гидрокси-N-метилбензамида.

Раствор (S)-N-[2-(3,4-дихлорфенил)-4-[4-(2-оксопергидропиримидин-1-ил) пиперидино] бутил]-N-метиламина (1.22 г), 4-ацетоксибензойной кислоты (0.640 г) и хлоргидрата 1-(3-диметиламинопропил)-3-этилкарбодиимида (0.682 г) в метиленхлориде (30 мл) перемешивают в течение ночи. Реакционную смесь разбавляют метиленхлоридом, промывают водой и водным раствором бикарбоната натрия, сушат и упаривают. Сырой продукт дважды хроматографируют, элюент метиленхлорид:метанол, градиент 95:5, 80:20. Очищенный продукт (0.190 г) и лимонную кислоту (0.069 г) растворяют в метаноле и упаривают, получают названное соединение в виде стеклообразного продукта, который растирают в белый твердый продукт (0.220 г).

Масс-спектр: m/z = 533 (М+1). Элементный анализ: Вычислено, %: C 53.40, H 5.86, N 7.41. C₂₇H₃₄Cl₂N₄O₃ · 1.10 C₆H₈O₇ · 0.60 H₂О. Найдено, %: C 53.45, H 6,13, N 7.26.

ПРИМЕР 21: 1-[(S)-N-Бензоил-3-(3,4-дихлорфенил)-N-метил-4- аминобутил] -4-(2-оксопергидропиримидин-1-ил)пиперидин-1-оксид
К раствору (S)-N-[2-(3,4-дихлорфенил)-4-[4-(2- оксопергидропиримидин-1-ил)пиперидино] бутил] -N-метилбензамида (1.31 г) в метиленхлориде (12 мл) при 0^oC добавляют по каплям 3-хлорнадбензойную кислоту (0.700 г) в метиленхлориде. Реакционную смесь перемешивают в течение 1 ч и разбавляют метиленхлоридом, промывают водным раствором бикарбоната натрия, сушат и упаривают. Сырой продукт хроматографируют, элюент метиленхлорид:метанол, градиент 98:2, 70:30. Очищенный продукт (0.592 г) и моногидрат п-толуолсульфокислоты (0.323 г) растворяют в смеси метиленхлорид: метанол и упаривают. Получают названное соединение в виде белого твердого продукта (0.824 г).

Масс-спектр: m/z = 533 (М+1). Элементный анализ: Вычислено, %: C 56.11, H 6.10, N 7.54. C₂₇H₃₄Cl₂N₄O₃ · 1.10 C₇H₈O₃ · 1.10 H₂O. Найдено, %: C 55,85, H 5.96, N 7.33.

ПРИМЕР 22: Хлоргидрат N-[2-(3,4-дихлорфенил)-4-[4-(3-метил-2- оксоимидазолидин-1-ил)пиперидино]бутил]-N-метилбензамида
К суспензии гидрида натрия (30 мг, 60%-ная дисперсия в масле) в тетрагидрофуране (1 мл) добавляют N-[2-(3,4-дихлорфенил)-4-[4- (2-оксоимидазолидин-1-ил)пиперидино] бутил] -N-метилбензамид (152 мг) в тетрагидрофуране (2 мл). Через 30 минут добавляют йодметан (0.021 мл) и реакционную смесь перемешивают в течение 2.5 часа. Затем реакционную смесь разбавляют метиленхлоридом и промывают водой. Органический слой отделяют, сушат и упаривают до получения масла, которое растворяют в минимальном количестве метиленхлорида и осаждают помощью эфирного раствора хлористого водорода. Растворитель упаривают, получают белый твердый продукт (104 мг).

Масс-спектр: m/z = 517 (M+1). Элементный анализ:
Вычислено, %: C 57.83, H 6.42, N 10.05. C₂₇H₃₄Cl₂N₄O₂ · 1.2 HCl · 0.1 (C₂H₅)₂O. Найдено,%: C 57,85, H 6.41, N 9.85.

Промежуточный N-[2-(3,4-дихлорфенил)-4-[4-(2-оксаимидазолидин-1-ил) пиперидино] бутил]-N-метилбензамид получают по методике, описанной в Примере 3, используя вместо N-[2-(3,4-дихлорфенил)-4-оксобутил] -N-метилбензамида на (S)-N-[2-(3,4-дихлорфенил)-4-оксобутил]-N-метилбензамид на стадии З.г.

СПИСОК ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ
(2) Сведения о SEQ 1D NO:1
(1) Характеристика последовательности:
(А) Длина: 15 основных пар
(Б) Тип: нуклеиновая кислота
(В) Количество цепочек: одна
(Г) Топология: линейная
(XI) Описание последовательности SEQ 1D NO:1
GCGCAAGCTT ATGGG
(2) Сведения о SEQ 1D NO:2
(1) Характеристика последовательности
(А) Длина: 18 основных пар
(Б) Тип: нуклеиновая кислота
(В) Количество цепочек: одна
(Г) Топология: линейная
(XI) Описание последовательности SEQ 1D NO: 2
GTCCCCATAA GCTTGCGC










5

Формула изобретения

1. 4-Замещенные производные пиперидина формулы I

где m равно 2;
D представляет остаток формулы Ia

где заместитель Q представляет фенил, замещенный 1 или 2 атомами галогена;
Q^a представляет атом водорода;
R¹ представляет атом водорода или метил;
R² представляет -C(= O)R³, где R³ представляет фенил, незамещенный или замещенный одним или более атомами галогена, гидрокси, (1-4С)алкокси или (1-4С)алкилом;
G обозначает простую связь;
J означает оксо- или тиоксогруппу;
M означает -O-, -S- или -NR¹²;
L означает L¹;
R¹² представляет атом водорода, C_1-3-алкил, R^aOC(=O)CH₂- или R^bR^cNC(= O)CH₂-;
R^a представляет (1-3С)алкил;
R^b и R^c независимо друг от друга представляют атом водорода, (1-3С)алкил или бензил;
L¹ представляет метилен, триметилен или тетраметилен;
или N-оксид соединений формулы I при атоме азота пиперидинового фрагмента, обозначенного как Δ;
или фармацевтически приемлемые соли указанных соединений формулы I.

2. Соединение по п.1, которое имеет формулу Ic

где заместитель Q^b представляет фенил, замещенный 1 или 2 атомами галогена;
T и U независимо друг от друга представляют атом галогена, гидроксигруппу, (1-3С)алкил или (1-3С)алкоксигруппу;
W представляет CH₃;
G, J, L и M принимают любые значения, определенные в п.1;
или N-оксид указанного соединения формулы Ic при атоме азота пиперидина, обозначаемом Δ;
или фармацевтически приемлемая соль указанного соединения формулы Ic.

3. Соединение по п.2, где M представляет -O-, -S- или NH; L представляет триметилен, а Q^b представляет фенил, замещенный одним или двумя атомами галогена, или N-оксид указанного соединения формулы Ic при атоме азота пиперидина, обозначаемом Δ; или фармацевтически приемлемая соль указанного соединения формулы Ic.

4. Соединение по п.2 или 3, где M представляет -О- или NH; L представляет триметилен, а заместитель Q^b представляет 3,4-дихлорфенил, или N-оксид указанного соединения при атоме азота пиперидина, обозначаемом Δ; или фармацевтически приемлемая соль указанного соединения.

5. Соединение по п. 1, которое представляет собой: (S)-N-[2-(3,4-дихлорфенил)-4-[4-(2-оксопергидропиримидин-1-ил)пиперидино] бутил] -N-метилбензамид; (S)-N-[2-(3,4-дихлорфенил)-4-[4-(3-метил-2-оксопергидропиримидин-1-ил)пиперидино] -N-метилбензамид; (S)-N-[2-(3,4-дихлорфенил)-4-[4-(3-этил-2-оксопергидропиримидин-1-ил)пиперидино] бутил]-N-метилбензамид или (S)-N-[2-(3,4-дихлорфенил)-4-[4-(2-оксопергидропиримидин-1-ил)пиперидино] бутил] -N-этилбензамид и их фармацевтически приемлемые соли.

6. Соединение по п.1, которое представляет собой (S)-N-[2-(3,4-дихлорфенил)-4-[4-(2-оксопергидропиримидин-1-ил)пиперидино] бутил]-N-метилбензамид или его фармацевтически приемлемую соль.

7. Соединение по п.1, которое представляет собой (S)-N-[2-(3,4-дихлорфенил)-4-[4-(3-этил-2-оксопергидропиримидин-1-ил)пиперидино] бутил] -N-метилбензамид или его фармацевтически приемлемую соль.

8. Соединения формулы I по п.1, представляющие собой фармацевтически приемлемую соль.

9. Способ получения 4-замещенных производных пиперидина формулы

где G означает простую связь;
J - оксо- или тиоксогруппу;
M означает NR¹²;
L означает L¹ и представляет метилен, триметилен, тетраметилен;
R¹² - водород или C₁ - C₄-алкил;
m и D имеют значения, указанные в п.1 формулы,
и N-оксида этих соединений при атоме азота пиперидинового фрагмента, обозначенного как Δ, или фармацевтически приемлемой соли, отличающийся тем, что соединение формулы III

где L, M, D, m имеют указанные значения,
подвергают конденсации с диактивированным карбонильным или тиокарбонильным соединением, с последующим при необходимости окислением полученного пиперидинового соединения для получения N-оксида и, при необходимости, алкилированием полученного соединения, где R¹² означает водород.

РИСУНКИ

Рисунок 1, Рисунок 2, Рисунок 3, Рисунок 4

RH4A - Выдача дубликата патента Российской Федерации на изобретение

Дата выдачи дубликата: 24.05.2005

Наименование лица, которому выдан дубликат:
ЗЕНЕКА ЛИМИТЕД (GB)

Извещение опубликовано: 10.08.2005        БИ: 22/2005

MM4A - Досрочное прекращение действия патента СССР или патента Российской Федерации на изобретение из-за неуплаты в установленный срок пошлины за поддержание патента в силе

Дата прекращения действия патента: 16.08.2009

Извещение опубликовано: 20.07.2010        БИ: 20/2010

---