Способ получения r-тетраола, обладающего противоопухолевой активностью
Изобретение относится к химии, в частности к фармакологической химии, и может быть использовано для производства противоопухолевого препарата. Выделяют активный ингредиент из натурального продукта. В качестве натурального продукта применяют живицу хвойных пород видов Pinus sibirica, и/или Pinus cembra, и/или рода Abies, и/или рода Larix, из которой выделяют фракцию лабданоидодитерпеновых кислот, добавляют в выделенную фракцию камфору и воздействуют на полученную смесь -излучением до формирования структуры R-тетраола. Изобретение позволяет получать продукт, обладающий меньшей стоимостью. 1 табл., 5 ил.
Изобретение относится к химии, в частности к фармакологической химии, и может быть использовано для производства противоопухолевого препарата.
Уровень техникиВ ряде источников информации описано соединение ТАКСОЛ, обладающее высокой противоопухолевой активностью, и способы получения указанного соединения. В природе количество сырья для производства ТАКСОЛА крайне ограничено, поэтому предпринимаются многочисленные попытки по химическому синтезу данного соединения и его аналогов.Известны способы полного синтеза таксола и его аналогов, в которых в качестве исходного сырья используют диальдегид (US A1, N 5488116, C 07 D 305/14, N 5527924 С 07 D 399/08).На фиг. 1 изображена схема последних 13 стадий процесса синтеза, опуская стадии предварительной подготовки.Селективный катализ менее закрытого альдегида (1) дает соединение (2). Добавление дитианата лития VII (SCH2CH2CH2S; M=Li) с последующим окислением по Сверну ведет к получению кеталя (3). Получение альдегида (4) из кеталя происходит путем добавления виниллития Х (R1=MOM; M=Li) и результируется получением соединения предшественника (5) по реакции Дильса-Альдера. Перед нагреванием (5) превращают в кетон имеющий трициклическую структуру (6). Стереоселективное восстановление менее закрытого кетона (6) ведет к соединению (7) после бензолизации вновь полученного (a) вторичного спирта. Алильное окисление в А-кольце соединения (7) с последующим окислением по Сверну, если потребуется, дает энон (8). Карбонильное А-кольцо восстанавливается до -конфигурации при использовании объемного борогидрида. Дальнейшая защита бензила и восстановление на никеле по типу Ренея тиокеталя производит кетон (9). Гидроксилирование энолята калия кетона (9) по типу Франклина-Дэвиса дает соответствующий гидроксикетон, в котором оксазиридин присоединяется с задней стороны цепочки. После индуцированной фтором декремнизации с использованием фторида тетрабутиламмония происходит переацетилирование соединения (10). Гидрирование бензилового эфира и дальнейшее присоединение части боковых цепочек приводит к получению соединения (11). Избирательно удаленный ацетат с положения С-7 ведет к получению соединения (12), которое после снятия двойной защиты путем одновременного удаления MOM и ЕЕ групп превращается в ТАКСОЛ.Недостатком известных способов является большая длительность процесса, множество стадий переработки, как при подготовке исходных для синтеза веществ (68 стадий), так и при синтезе самого вещества, и соответственно высокая стоимость производства и цены конечного продукта.Наиболее близким к настоящему способу является способ получения R-тетраола, обладающего противоопухолевой активностью, включающий выделение активного ингредиента из натурального продукта (RU 2051900 C1, 10.01.96).В соответствии с известным способом синтез R-тетраола ведется из натурального продукта цефаломаннина. При этом процесс ведут в несколько стадий. Первая - это дегидроксилирование для получения цефаломаннина диола, затем очистка диола, бензолизация на позиции 2 и дальнейшая реакция с 1,2-диамином. Схема процесса изображена на фиг. 2.Известный способ позволяет получить R-тетраол, обладающий противоопухолевой активностью. Схема процесса изображена на фиг. 2.Используемые на чертежах сокращенные наименования соединений приведены в таблице.Недостатками данного способа являются количественная ограниченность, высокая стоимость, длительность выделения и очистки исходного сырья и соответственно высокая стоимость производства конечного продукта.Сущность изобретенияЗадачей, на решение которой направлено настоящее изобретение, является создание способа получения R-тетраола, обладающего противоопухолевой активностью из натурального доступного сырья с относительно невысокой себестоимостью.Техническим результатом изобретения является создание способа получения R-тетраола, обладающего биологической (противоопухолевой) активностью, но существенно (более чем 1,5-2 раза) меньшей стоимостью.Указанная выше задача с достижением технического результата решается тем, что в способе получения R-тетраола, обладающего противоопухолевой активностью, включающем выделение активного ингредиента из натурального продукта, в качестве натурального продукта применяют живицу хвойных пород родов Pinus sibirica, и/или Pinus cembra, и/или рода Abies, и/или рода Larix, из которой выделяют фракцию лабданоидодитерпеновых кислот, добавляют в выделенную фракцию камфору и воздействуют на полученную смесь -излучением до формирования структуры R-тетраола.В качестве сырья в настоящем изобретении используют натуральный продукт в виде живицы кедра родов Pinus sibirica и Pinus cembra, и/или рода Abies, и/или рода Larix, из которой бралась фракция, содержащая лабданоиды-дитерпены (см. кн. "Терпеноиды",под ред. А.А. Семенова, 1987 г. и журнал "Tetrahedron", 1966 г. vol 22, p.p. 679) c добавлением камфоры и последующим декарбоксилированием смеси, в результате перегруппировки групп атомов, в том числе и камфеновых, осуществлялся радиационно-химический синтез препарата R-тетраола - аналога таксола. Для идентификации и очистки продукта использовали методы ВЭЖХ и масс-спектрометрии. Одновременно проводился контроль качества на отсутствие канцерогенных нитрозоаминов с помощью разработанной методики.R-тетраол является известным соединением и описан в (FR A1, N 2714053, C 07 D 305/14). Из уровня техники не известны данные, свидетельствующие о биологической активности R-тетраола.На фиг.1 схематически изображен процесс синтеза R-тетраола (последние 13 стадий) в соответствии со способом-аналогом по US A1, 5488116 и US A1, 5527924.На фиг.2 схематически изображен процесс синтеза аналога таксола в соответствии со способом - ближайшим аналогом по RU 2051900.На фиг.3 схематически изображен процесс радиационно-химического синтеза в соответствии с настоящим изобретением при получении R-тетраола.На фиг.4 изображена динамика роста у 256 крыс после 1-кратного внутрибрюшинного введения в дозе 10 мг/кг на 5-е сутки после перевивки: - R-тетраол; - таксол; - контрольная группаНа фиг.5 изображена динамика роста у 256 крыс после 1-кратного внутрибрюшинного введения в дозе 7 мг/кг на 3-и сутки после перевивки: - R-тетраол; - паклитаксел; - контрольная группаПример реализации изобретенияВ ампулу из молибденового стекла помещалось 10 г фракции живицы Pinus sibirica и 1 г камфоры. Таким образом, выделение осуществляли экстракцией этанолом в соотношении 1:10. Этаноловый экстракт упаривали в вакууме и экстрагировали последовательно трехкратными объемами петролейного эфира, гексана и хлороформа. Концентрированный хлороформный остаток подвергали колоночной жидкостной хроматографии на силикагеле Л 100/160/ (Чешская Республика), размер колонки 80х4,6 см. Элюирование проводили растворами этанола в хлороформе со ступенчатым градиентом при соотношении растворителей от 5:95 до 50:50. Фракции, содержащие R-тетраол, объединяли, концентрировали упариванием и проводили их дальнейшую очистку на колонке размером 60х2,5 см с силикагелем Л 40/100, используя в качестве подвижной фазы те же растворители. Дальнейшую очистку R-тетраол содержащих фракций проводили на колонке с кизельгелем 60 (ФРГ), размер колонки 25х1 см. Идентификацию R-тетраола проводили методами тонкослойной хроматографии, сравнивая R1 стандарта и пробы. Разделение препаратов проводили на силикагелевых пластинах для тонкослойной хроматографии фирмы "Меrск", проявляли образцы в парах йода. Для идентификации и очистки использовали также методы ВЭЖХ и масс-спектрометрии, при этом на полученную смесь воздействуют -излучением для формирования структуры R-тетраола. Проводился также контроль качества на отсутствие концерогенных нитрозоаминов с помощью комплекса КАНАС. В результате удалось выделить 20 мг R-тетраола из 10 г живицы и 1 г камфоры.Доказательства биологической активностиДля анализа биологической (противоопухолевой) активности полученного вещества были проведены сравнительные эксперименты по применению полученного препарата аналога ТАКСОЛА на животных опухоленосителях (карциносаркома Уокер 256) по изучению его противоопухолевых свойств с лучшими зарубежными аналогами (ТАКСОЛ - производитель "Bristol Mayers Squibb" (США) и ПАКЛИТАКСЕЛ - производитель "Ebewe" (Австрия). Полученные сравнительные данные, отображенные на фиг. 4 и 5, позволяют утверждать, что синтезированное соединение обладает значительной противоопухолевой активностью в отношении карциносаркомы Уокер 256 по всем исследованным параметрам. Более того, установлено, что по противоопухолевой активности данный препарат не уступает ТАКСОЛУ (США) и значительно превосходит его аналог ПАКЛИТАКСЕЛ (Австрия). При этом стоимость полученного препарата более чем в 3 раза меньше, чем стоимость ТАКСОЛА и ПАКЛИТАКСЕЛА. Таким образом, обеспечивается решение задачи изобретения с достижением технического результата.Настоящее изобретение осуществимо с использованием известных средств и может быть применено при производстве противоопухолевых препаратов.Формула изобретения
Способ получения R-тетраола, обладающего противоопухолевой активностью, включающий выделение активного ингредиента из натурального продукта, отличающийся тем, что в качестве натурального продукта применяют живицу хвойных пород видов Pinus sibirica, и/или Pinus cembra, и/или рода Abies, и/или рода Larix, из которой выделяют фракцию лабданоидодитерпеновых кислот, добавляют в выделенную фракцию камфору и воздействуют на полученную смесь -излучением до формирования структуры R-тетраола.РИСУНКИ
Рисунок 1, Рисунок 2, Рисунок 3, Рисунок 4, Рисунок 5, Рисунок 6Другие изменения, связанные с зарегистрированными изобретениями
Изменения:Публикацию о досрочном прекращении действия патента считать недействительной.
Номер и год публикации бюллетеня: 9-2007
Извещение опубликовано: 10.09.2007 БИ: 25/2007