Рекомбинантная днк для контроля экспрессии, способ контроля экспрессии целевого гена, способ получения целевого вещества

 

Изобретение относится к биотехнологии. Заявлена нуклеотидная последовательность для контроля экспрессии, которая осуществляет контроль экспрессии целевого гена, расположенного после последовательности для контроля экспрессии, зависящей от внутриклеточной концентрации аминокислоты. В бактерии, содержащей ДНК-конструкцию с нуклеотидной последовательностью для контроля экспрессии, промотором, расположенным перед нуклеотидной последовательностью для контроля экспрессии, и целевым геном, расположенным после нуклеотидной последовательности для контроля экспрессии, частота терминации на нуклеотидной последовательности для контроля экспрессии при транскрипции, начинающейся на указанном промоторе, понижается при увеличении внутриклеточной концентрации аминокислоты, посредством чего экспрессия целевого гена повышается. Изобретение позволяет создать систему искусственной регуляции, обеспечивающей усиление контролируемой экспрессии генов за счет увеличения внутриклеточной концентрации контролирующей аминокислоты. 3 с. и 9 з.п.ф-лы, 8 ил., 1 табл.

Текст описания в факсимильном виде (см. графическую часть)

Формула изобретения

1. Рекомбинантная ДНК для контроля экспрессии, зависящей от внутриклеточной концентрации аминокислоты, содержащая область, кодирующую лидерный пептид, включающий указанную аминокислоту, и нечетное количество сегментов, не меньшее чем 3, причем каждый из сегментов или его часть способны образовывать за счет спаривания оснований взаимоисключающие структуры с одним из двух соседних сегментов или их частей, а предпоследний и последний сегменты или их части являются элементами ρ-независимого терминатора.

2. Рекомбинантная ДНК по п.1, отличающаяся тем, что кодон указанной аминокислоты в лидерном пептиде расположен в первом сегменте.

3. Рекомбинантная ДНК по любому из пп.1 и 2, отличающаяся тем, что лидерный пептид содержит 5 сегментов.

4. Рекомбинантная ДНК по любому из пп.1-3, отличающаяся тем, что нуклеотидная последовательность каждого сегмента или его части и нуклеотидная последовательность соседнего сегмента или его части представляют собой инвертированные повторы.

5. Рекомбинантная ДНК по любому из пп.1-4, отличающаяся тем, что ρ-независимый терминатор способен к функционированию в бактерии, принадлежащей к роду Escherichia.

6. Рекомбинантная ДНК по п.3, отличающаяся тем, что первый и второй сегменты по порядку с 5’-конца, а также кодирующая область лидерного пептида получены на основе последовательности аттенуатора триптофанового оперона Escherichia соli, четвертый и пятый сегменты получены на основе последовательности аттенуатора гистидинового оперона Escherichia coli, а третий сегмент получен путем комбинации последовательностей аттенуаторов триптофанового и гистидинового оперонов.

7. Рекомбинантная ДНК по п.6, отличающаяся тем, что лидерный пептид содержит не менее 2 остатков триптофана.

8. Способ контроля экспрессии целевого гена, предусматривающий выращивание в питательной среде бактерии, содержащей рекомбинантную ДНК для контроля экспрессии по любому из пп.1-7, расположенную после промотора и перед целевым геном, и изменение внутриклеточной концентрации аминокислоты, влияющей на экспрессию гена, при этом увеличение внутриклеточной концентрации аминокислоты снижает частоту терминации на рекомбинантной ДНК при транскрипции, начинающейся на указанном промоторе.

9. Способ по п.8, отличающийся тем, что используют бактерию, принадлежащую к роду Eschrichia, Salmonella или Serratia.

10. Способ по п.8, отличающийся тем, что к целевым генам относятся ген хлорамфениколацетилтрансферазы (cat), аминокислотные опероны, гены, белковые продукты которых вовлечены в биосинтез аминокислот, нуклеозидов и нуклеотидов, и гены, кодирующие чужеродные белковые продукты.

11. Способ получения целевого вещества, предусматривающий выращивание бактерии, содержащей рекомбинантную ДНК по любому из пп.1-7, расположенную после промотора и перед целевым геном, и обладающей способностью к продукции указанного вещества, и выделения целевого вещества из культуральной жидкости.

12. Способ по п.9, отличающийся тем, что к целевым веществам относятся хлорамфениколацетилтрансфераза, прокариотические ферменты, чужеродные белковые продукты, аминокислоты, нуклеотиды и нуклеозиды, витамины.

РИСУНКИ

Рисунок 1, Рисунок 2, Рисунок 3, Рисунок 4, Рисунок 5, Рисунок 6, Рисунок 7, Рисунок 8, Рисунок 9, Рисунок 10, Рисунок 11, Рисунок 12, Рисунок 13, Рисунок 14, Рисунок 15, Рисунок 16, Рисунок 17, Рисунок 18, Рисунок 19, Рисунок 20, Рисунок 21, Рисунок 22, Рисунок 23, Рисунок 24, Рисунок 25, Рисунок 26, Рисунок 27, Рисунок 28, Рисунок 29, Рисунок 30, Рисунок 31, Рисунок 32, Рисунок 33, Рисунок 34, Рисунок 35, Рисунок 36, Рисунок 37, Рисунок 38, Рисунок 39, Рисунок 40, Рисунок 41, Рисунок 42, Рисунок 43, Рисунок 44, Рисунок 45, Рисунок 46, Рисунок 47