Способ экспресс-прогнозирования метаболической реабилитации с помощью вольфии бескорневой

 

Изобретение относится к медицине, биологии, фармакологии, физиологии и может быть использовано для оценки физиологического воздействия, подбора доз, метаболической реабилитации фармацевтиков и парафармацевтиков и в целях диагностики. Способ осуществляют путем помещения в СК исследуемого лица ряски вольфии бескорневой, которую выдерживают в сыворотке крови 40-50 минут, затем капли сыворотки крови наносят на предметное стекло в виде капель, сушат и микроскопируют. При наличии в препарате метаболических структур в виде субконцентрических, субпараллельных агрегатов или завершенных розеток, или радиальных секторов выдержанных размеров прогнозируют метаболическую реабилитацию. Технический результат: способ повышает достоверность контроля за ходом восстановления обменных нарушений и позволяет оценивать действия фармацевтиков, парафармацевтиков, уточнять дозу, продолжать или отменять назначенное лечение. Способ не требует использования количественного определения уровня составных компонентов сыворотки крови. 13 ил.

Изобретение относятся к медицине, биологии, фармакологии, физиологии и может быть использовано для наблюдения за метаболическим структурированием сыворотки крови человека - метаболическим мониторингом и оценки физиологического воздействия фармацевтиков, парафармацевтиков на организм человека, а также при испытании новых фармпрепаратов.

Эффективность лечения, в первую очередь, является результатом сбалансированного межмолекулярного взаимодействия препарата и внутренней среды организма, представителем которой является кровь, сыворотка крови (СК).

Высокая точность современных клинических, морфологических и биохимических способов исследования биологических систем поставила теоретические представления о единстве структуры и функции на реальную почву. В связи с чем проблема соотношения метаболических, структурных и функциональных отношений приобретает все большую практическую значимость для визуальной (структурной) оценки такой биологической системы, как СК при назначении человеку тех или иных фармпрепаратов (Саркисов Д.С. Очерки по структурным основам гомеостаза. - М., 1977; Савина Л.В. Кристаллоскопические структуры сыворотки крови здорового и больного человека. Краснодар, 1999).

Наиболее часто для определения результатов воздействия фармпрепаратов в качестве пробы берут СК и количественно в ней исследуют уровень содержания ее главных компонентов - белков, белковых фракций, липидов, мукополисахаридов, иммуноглобулинов и т.д. (Энциклопедия клинических лабораторных тестов /под ред. Тица. М., 1997). В количественное определение входят понятия - норма, отклонение от нормы, в связи с чем больному назначают или отменяют, или уменьшают дозу препаратов.

Аналог

Биохимический способ определения компонентов СК (Горячковский А.М. Справочное пособие по клинической биохимии. Одесса, 1994). Например, количественное определение белков, белковых фракций.

Принцип определения общего белка и белковых фракций (Горячковский А.М. Справочное пособие по клинической биохимии. Одесса, 1994. С.161-162).

Белки реагируют в щелочной среде с сернокислой медью с образованием соединений, окрашенных в фиолетовый цвет (биуретовая реакция).

Реактивы:

- хлористый натрий, биуретовый реактив, йодистый калий, стандартный раствор альбумина.

Приборы:

- ФЭК для определения длины волн.

Построение калибровочного графика.

Ход определения общего белка занимает 1 час.

Для определения белковых фракций необходимы:

- реактивы (буферный раствор, красящий раствор с водорастворимым бромфеноловым синим и сулемой, ледяная уксусная кислота, просветляющий щелочной раствор);

- аппарат для определения электрофореза на бумаге;

- хроматографическая бумага;

- обработка бумажных лент.

Ход определения и расчет результатов занимает 2-2,5 часа.

Недостатки способа:

- нарушение нативности СК;

- использование реактивов;

- применение дорогостоящего оборудования:

- длительность определения.

В качестве прототипа использован "Способ контроля за приемом парафармацевтиков и фармацевтиков". Авторы: Савина Л.В., Доронина Т.А., Ботченко А.Л. Патент на изобретение №2144188 от 10.01.2000 г.

В основе способа лежит изучение метаболической структуры СК человека. Препараты СК высушивают и микроскопируют. При наличии в препарате нитевидных дихотомически ветвящихся кристаллов констатируют восстановление нормальной структуры СК под влиянием назначенных фармпрепаратов.

Способ осуществляют следующим образом:

- венозную кровь (2-3 мл) центрифугируют, капли СК наносят на предметное стекло, каждую накрывают покровным и высушивают при Т=+37-38°С на протяжении 1,5-2 часов;

- препарат микроскопируют.

Недостатки способа:

- длительная сушка препарата при Т=+37-38°С на протяжении 1,5-2 часов;

- применение дорогостоящего поляризационного микроскопа для выделения оптически активных микролитов СК (метаболиков);

- использование предметного и покровного стекла.

Техническим решением задачи является:

- повышение достоверности контроля за ходом обменных процессов за счет визуального наблюдения процесса восстановления структуры сыворотки крови;

- высокая чувствительность способа в связи с применением биотестера - вольфии бескорневой:

- сокращение сроков проведения способа:

- упрощение и дешевизна способа;

- воспроизводимость и сходимость способа, его стандартизация.

Поставленная задача достигается тем, что в способ экспресс-прогнозирования метаболической реабилитации с помощью вольфии бескорневой включается предварительное приготовление образца из СК и последующее его исследование, отличающееся тем, что после воздействия фармпрепарата в динамике СК наносят на предметное стекло с лункой, расселяют в нее ряску-вольфию бескорневую, выдерживают 40-50 минут, затем капли СК наносят на предметное стекло, сушат, микроскопируют в проходящем свете и при наличии в ней субконцентрических, субпараллельных агрегатов или завершенных розеток, или радиальных секторов выдержанных размеров прогнозируют метаболическую реабилитацию.

Новизна заявляемого предложения обусловлена тем, что для тестирования метаболической реабилитации предложен биоиндикатор - ряска-вольфия бескорневая из семейства рясковых. Она обладает специфической индивидуальной реакцией на загрязнение водной среды (Цаценко Л.В., Малюга Н.Г. Рясковые - биоиндикаторы агроценоза. Краснодар, 2000; Соколов В.Е. с соавт. Международная программа биоиндикации антропогенного загрязнения природной среды // Экология. - 1990. - №2. - С.90-94, Цаценко Л.В., Филипчук О.Д. Биологическая индикация и генетический скрининг загрязнения компонентов агроценоза // С.-х. Биология. - 1997. - №5. С.33-37). Сыворотка крови до 90% содержит воду и до 8-9% представлена органическими веществами (Гауровиц Р. Химия и функция белков. М., 1965).

Способ осуществляют следующим образом:

1. У исследуемого пациента, принимающего фармпрепарат, натощак из вены берут 2 мл крови, которую центрифугируют для получения сыворотки.

2. Сыворотку крови наносят на предметное стекло с выемкой.

3. В сыворотку крови расселяют шпателем ряску-вольфию бескорневую, которую выдерживают в ней 40-50 минут.

4. Капли сыворотки крови, каждая объемом 0,01-0,02 мл, после пребывания в ней вольфии бескорневой наносят на предметное стекло.

5. Образцы сушат в суховоздушном шкафу при Т=+35-36°С на протяжении 10-15 минут.

6. Полученный препарат микроскопируют в проходящем свете и при наличии в нем субконцентрических, субпараллельных агрегатов или завершенных розеток, или радиальных секторов выдержанных размеров прогнозируют метаболическую реабилитацию.

Предварительно мы приготовили стандартные структуры СК здорового человека.

Особенностью метаболической структуры СК явилось наличие субконцентрических, субпараллельных агрегатов, или завершенных розеток, или радиальных секторов выдержанных размеров (фиг.1, 2, 3).

Пример 1, фиг.4. Б-ой И., история болезни (ИБ) №1175. Диагноз: Хроническая обструктивная болезнь легких.

На фиг.4 в структуре СК больного И. присутствуют субконцентрические, субпараллельные агрегаты и завершенные розетки.

Технология: спустя 10 дней от начала лечения амоксиклавом из вены больного взято 2 мл крови, она отцентрифугирована. СК помещена на предметное стекло с выемкой, в нее расселена ряска-вольфия бескорневая (ВБ), которая выдерживалась в СК 45 минут. Затем капли СК, каждая объемом 0,02 мл, нанесены на предметное стекло, высушены в термостате на протяжении 10 минут при Т=+35°С и микроскопированы. Видны завершенные субконцентрические, субпараллельные агрегаты и завершенные розетки. Одномоментно в СК больного определяли белковые фракции, глицин, иммуноглобулины, которые оказались в пределах нормы и составили количественно: α₁-фракция - 3,6%, α₂ - 7,9%, β - 13,6%, γ - 17,9%; IgA - 2,4 г/л, IgG - 10,5 г/л; глицин - 18 мг/л.

Прогноз метаболической реабилитации подтвержден.

Пример 2, фиг.5. Больная Ф. ИБ №591. Диагноз: Ожирение III степени, подагра.

В структуре СК присутствуют завершенные субконцентрические, субпараллельные агрегаты.

Технология: из вены больной спустя 14 дней от начала лечения диетой и аллопуринолом взято 2 мл крови, которая отцентрифугирована. СК помещена на предметное стекло с выемкой, в нее расселена ряска ВБ, которая выдержана в СК на протяжении 50 минут. Затем капли СК, каждая объемом 0,02 мл, нанесены на предметное стекло, высушены в термостате на протяжении 15 минут при Т=+36°С и микроскопированы. Присутствуют завершенные субконцентрические, субпараллельные агрегаты.

Одновременно в СК больной определены триглицериды (ТТ) и мочевая кислота, которые оказались нормальными и составили: ТГ - 1,08 ммоль/л, мочевая кислота - 0,18 ммоль/л. Прогноз метаболической реабилитации подтвердился.

Пример 3, фиг.6. Больной К. ИБ №738. Диагноз: Сахарный диабет, 2 тип. В структуре СК присутствуют незавершенные субпараллельные, субконцентрические агрегаты.

Технология: из вены б-го К. спустя 10 дней от начала лечения манинилом взято 2 мл крови, которая отпентрифугирована. СК помещена на предметное стекло с выемкой, в нее расселена ряска ВБ, которая выдержана в ней 40 минут. Затем капли СК, каждая объемом 0,01 мл, нанесены на предметное стекло, высушены в термостате при Т=+35°С на протяжении 10 минут и микроскопированы. Видны незавершенные субконцентрические, субпараллельные агрегаты.

Одномоментно в СК определили уровень глюкозы, который оказался повышен (7,4 ммоль/л), и холестерина, который тоже был повышен - 7,1 моль/л. Метаболическая реабилитация не подтвердилась.

Пример 4, фиг.7. Больной А., ИБ №911. Диагноз: Диффузный токсический зоб III степени, впервые выявленный. В структуре сыворотки крови присутствуют завершенные розетки.

Технология: из вены больной спустя 16 дней от начала лечения тирозолом и бета-блокаторами взято 2 мл крови, которая отцентрифугирована. СК нанесена на предметное стекло с выемкой, в нее расселена ряска ВБ, которая выдержана в СК 50 минут. Затем капли СК, каждая объемом 0,01 мл, нанесены на предметное стекло, высушены в термостате на протяжении 15 минут при Т=+36°С и микроскопированы. Видны завершенные розетки.

Одномоментно в СК определили уровень гормонов - ТТГ и Т₄, которые оказались нормальными и составили 0,2 мкМе/л и 130 нмоль/л. Прогноз метаболической реабилитации подтвердился.

Пример 5, фиг.8. Больная Д., ИБ №236. Диагноз: Болезнь Иценко-Кушинга. В структуре СК присутствует завершенный субконцентрический агрегат и завершенная розетка.

Технология: из вены больной спустя 14 дней от начала лечения парлоделом взято 2 мл крови, она отцентрифугирована. СК помещена на предметное стекло с выемкой, в нее расселена ряска ВБ, которая выдержана в СК на протяжении 45 минут. Капли СК, каждая объемом 0,01 мл, нанесены на предметное стекло, высушены в термостате при Т=+36°С на протяжении 10 минут и микроскопированы. Видны завершенные субконцентрические агрегаты и завершенные розетки.

Одномоментно в СК определили уровни гормона кортизола, который оказался нормальным (0,41 мкмоль/л в 9 часов утра). Прогноз метаболической реабилитации подтвердился.

Пример 6, фиг.9. Больной В., ИБ №898. Диагноз: Хронический аутоиммунный гастрит, тип А. В структуре СК присутствуют радиальные сектора выдержанных размеров и завершенные розетки.

Технология: из вены больного спустя 10 дней от начала лечения взята кровь 2 мл, отцентрифугирована. СК нанесена на предметное стекло с выемкой, в нее шпателем расселена ряска ВБ, выдержана на протяжении 40 минут. Капли СК, каждая объемом 0,01 мл, нанесены на предметное стекло, высушены на протяжении 15 минут в термостате при Т=+38°С и микроскопированы. Присутствуют радиальные сектора выдержанных размеров и завершенные розетки. Одномоментно в СК определили белковые фракции, содержание которых при поступлении было повышено и больному на протяжении 10 дней назначали солкосерил. Содержание белковых фракций спустя 10 дней от начала лечения составило - α₁-фракция - 3,5%, α₂ - 7,8%, β - 13,5%, γ - 17,4%. Нормализация показателей белкового обмена подтвердилась присутствием в структуре СК радиальных секторов выдержанных размеров и завершенных розеток. Метаболическая реабилитация от назначенного лечения подтвердилась.

Пример 7, фиг.10. Больной Н., ИБ №219. Диагноз: Аутоиммунный тиреоидит. В структуре СК присутствуют радиальные сектора выдержанных размеров, завершенные розетки.

Технология: из вены больной спустя 14 дней от начала лечения L-тироксином взято 2 мл крови, которая отцентрифугирована. СК помещена на предметное стекло с выемкой, в нее расселена ряска ВБ, выдержана на протяжении 45 минут. Капли СК, каждая объемом 0,02 мл, нанесены на предметное стекло, высушены в термостате на протяжении 10 минут при Т=+36°С и микроскопированы. Видны радиальные сектора выдержанных размеров и завершенные розетки. Одномоментно больному в СК определили уровень иммуноглобулина А, М и G, которые при поступлении были повышены. После курса лечения L-тироксином в заданной дозе показатели иммунного статуса оказались нормальными и составили: IgA - 2,3 г/л, IgМ - 1,25 г/л, IgG - 10,45 г/л. Метаболическая реабилитация подтвердилась наличием радиальных секторов выдержанных размеров и завершенных розеток.

Пример 8, фиг.11. Больная Я., ИБ №9191. В структуре СК присутствуют радиальные сектора невыдержанных размеров и незавершенные розетки.

Технология: из вены больной спустя 14 дней от начала лечения нестероидными противовоспалительными препаратами взято 2 мл крови, которая отцентрифугирована. СК помещена на предметное стекло с выемкой, в нее расселена ряска ВБ, которая выдержана в СК на протяжении 40 минут. Капли СК, каждая объемом 0,01 мл, нанесены на предметное стекло, высушены в термостате на протяжении 15 минут при Т=+35°С и микроскопированы. Видны радиальные сектора невыдержанных размеров и незавершенные розетки. Одномоментно в СК больной определены уровни белковых фракций, которые оказались повышены и составили - α₁-фракция - 3,9%, α₂ - 9,8%, β - 13,9%, γ - 24,4% (норма - α₁-фракция - 3,5%, α₂ - 7,9%, β - 13,6%, γ - 17,4%). Таким образом, метаболическая реабилитация от назначенного лечения не наступила в указанные сроки, что и подтвердилось присутствием радиальных секторов невыдержанных размеров и незавершенных розеток.

Пример 9, фиг.12. Больная Ц., ИБ №2947. Диагноз: Сахарный диабет 2 типа. Ожирение II степени В структуре СК присутствуют радиальные сектора выдержанных размеров и завершенные розетки.

Технология: из вены больной спустя 12 дней от начала лечения сиофором взято 2 мл крови, которая отцентрифугирована. СК помещена на предметное стекло с выемкой, в нее шпателем расселена ряска ВБ, которая выдержана в СК на протяжении 50 минут. Затем СК в виде капель, каждая объемом 0,02 мл, нанесена на предметное стекло, которое высушили при Т=+35°С на протяжении 10 минут. При микроскопировании найдены радиальные сектора выдержанных размеров и завершенные розетки. Одномоментно в СК определили уровень ХС и ТГ, который оказался нормальным и составил соответственно - 4,4 ммоль/л и 1,09 ммоль/л. Глюкоза крови была в норме (5,5 ммоль/л). Имеется компенсация липидного и углеводного обменов, что подтвердилось присутствием в структуре СК радиальных секторов выдержанных размеров и завершенных розеток.

Пример 10, фиг.13. Больная О., ИБ №2111. Диагноз: Сахарный диабет 1 типа. В структуре СК присутствуют разнообразные сектора невыдержанных размеров, нет завершенных розеток, видны их реликты.

Технология: из вены больной спустя 12 дней от начала лечения инсулином-хумулином взято 2 мл крови, которая отцентрифугирована и в нее шпателем расселена ряска ВБ, время экспозиции 50 минут. Капли СК, каждая объемом 0,01 мл, нанесены на предметное стекло, затем высушены в термостате на протяжении 10 минут при Т=+36°С и микроскопированы. Визуализируются разноориентированные сектора невыдержанных размеров, реликтовые розетки.

Одномоментно в СК определили содержание холестерина, ТГ и глюкозы, которые оказались повышены, соответственно 6,3 ммоль/л, 2,3 ммоль/л и 8,4 ммоль/л. Отсутствует метаболическая реабилитация, что подтверждается невосстановленной структурой СК.

Формула изобретения

Способ экспресс-прогнозирования метаболической реабилитации с помощью вольфии бескорневой, характеризующийся предварительным приготовлением образца из сыворотки крови и последующим его исследованием, причем после воздействия фармпрепарата в динамике сыворотку крови наносят на предметное стекло с лункой, расселяют в нее ряску - вольфию бескорневую, выдерживают 40-50 мин, затем капли сыворотки крови наносят на предметное стекло, сушат, микроскопируют в проходящем свете и при наличии в ней субконцентрических, субпараллельных агрегатов, или завершенных розеток, или радиальных секторов выдержанных размеров прогнозируют метаболическую реабилитацию.

РИСУНКИ

Рисунок 1, Рисунок 2, Рисунок 3, Рисунок 4, Рисунок 5, Рисунок 6, Рисунок 7, Рисунок 8, Рисунок 9, Рисунок 10, Рисунок 11, Рисунок 12, Рисунок 13