Способ экспресс-диагностики состояния эритроцитов крови у плодов и новорожденных детей с гемолитической болезнью
Владельцы патента RU 2249213:
Научно-исследовательский институт медицинских проблем Севера СО РАМН (RU)
Изобретение относится к области медицины, в частности к биофизическим методам исследования крови и гематологии. Способ позволяет ускорить исследование и уменьшить травматичность экспресс-диагностики гемолитической болезни у плодов и новорожденных детей. Проводят исследование эритроцитов крови, при этом измеряют интенсивность флуоресценции суспензии эритроцитов крови при длине волны 500 нм с поляризацией вдоль оси света, а затем перпендикулярно оси света при длине волны 493 нм для каждого из направлений поляризации с последующим расчетом величины анизотропии, отклонения которой от нормы свидетельствуют о развитии гемолитической болезни.
Изобретение относится к медицине, в частности к биофизическим методам исследования крови и может быть использовано в педиатрии для выявления патогенетических звеньев развития гемолитической болезни.
Известен способ оценки состояния эритроцитов у плодов с гемолитической болезнью (1), заключающийся в биохимическом исследовании крови, точнее в определении соотношения количества первичных и вторичных продуктов ПОЛ в мембранах эритроцитов, церулоплазмина и трансферина. Исследование занимает много времени. Между тем, состояние ребенка с гемолитической болезнью часто требует срочной оценки состояния эритроцитов крови для принятия неотложных мер. Кроме того, требуется значительное количество материала - крови.
Целью изобретения является ускорение исследования и уменьшение травматичности способа.
Цель достигается тем, что в способе, заключающемся в структурно-функциональном исследовании эритроцитов крови, о деструкции эритроцитов судят по отклонению от нормы величины оптической анизотропии молекулярных структур эритроцитов крови. Анизотропия проявляется при возбуждении флуоресценции структурных элементов эритроцитов при разнонаправленной поляризации света вдоль оси и перпендикулярно. Интенсивность флуоресценции в поляризованном свете свидетельствует об основных биофизических свойствах мембран эритроцитов: об упорядоченности расположения молекул и распределении зарядов.
Величину анизотропии рассчитывают известным способом по формуле
где А - величина анизотропии молекулярных структур эритроцитов;
Fa - флуоресценция при поляризации вдоль оси света;
Fб - флуоресценция при поляризации перпендикулярно оси света.
Способ осуществляют следующим образом. Из венозной крови ребенка готовят 10 мкл 2% суспензии эритроцитов в изотоническом растворе NaCl. При помощи спектрофлуориметра, например MPF - Hitachi, измеряют интенсивность флуоресценции суспензии эритроцитов при длине волны 500 нм с поляризацией вдоль оси света, затем - перпендикулярно оси света, предварительно создав режим возбуждения флуоресценции при длине волны 493 нм для каждого из направлений поляризации. Величину анизотропии рассчитывают по формуле. Сравнивают ее с нормальной, предварительно определенной по результатам обследования здоровых детей, равной 0,79-0,85 относительных единиц. Отклонение от нормы свидетельствует о том, что патогенным звеном развития гемолитической болезни, нуждающимся в дальнейших лечебных мероприятиях, является деструкция эритроцитов крови.
Пример
Новорожденный ребенок И. Диагноз: Гемолитическая анемия.
Исследование выполнено на спектрофлуориметре MPF-4 “Hitachi”.
Интенсивность флуоресценции при поляризации вдоль оси света Fa составила 16 единиц, при поляризации перпендикулярно оси света Fб - 52 единицы.
Расчетная величина анизотропии А=0,43 относительные единицы.
Отклонение от нормы в сторону уменьшения от нижнего предела - 0,36 относительных единиц.
Продолжительность диагностики 20 минут.
Вывод: больной нуждается в лечебных мероприятиях по улучшению структуры эритроцитов.
Источник информации
1. Каллаева Ф.Х., Кущ И.Б., Азизова О.А., Егоров Д.Е. Состояние эритроцитарных мембран у плодов с гемолитической болезнью. - Проблемы эндокринологии. - 1991, №2. - C.48-53.
Способ экспресс-диагностики гемолитической болезни у плодов и новорожденных детей путем исследования эритроцитов крови, отличающийся тем, что измеряют интенсивность флуоресценции суспензии эритроцитов крови при длине волны 500 нм с поляризацией вдоль оси света, а затем перпендикулярно оси света при длине волны 493 нм для каждого из направлений поляризации с последующим расчетом величины анизотропии, отклонения которой от нормы свидетельствует о развитии гемолитической болезни.
