Лечение случайной транссудации антрациклинов

Изобретение относится к лечению онкологических заболеваний. Предложено: применение бисдиоксопиперазина (ранее известного как кардиопротектор) для лечения или предупреждения поражения ткани, вызванного случайной транссудацией цитотоксического яда для топоизомеразы II (представляет собой антрациклины, этопозид, тенипозид, митоксантрон даунорубицин, доксорубицин и т.д.), лекарственные средства и фармацевтический набор того же назначения, способ лечения или предупреждения поражения ткани, вызванного случайной транссудацией яда топоизомеразы II. Бисдиоксопиперазин ICRF-187 оказывает действие за счет каталитического ингибирования топо II. Признаки возможной транссудации яда топоизомеразы II (локальной токсичности) обычно включают возникновение острой боли, эритемы, образование изъязвлений в области транссудации; под действием ICRF-187 число ран снижается или развитие побочных эффектов не отмечается. 4 с. и 55 з.п. ф-лы, 10 табл., 10 ил.

 

Настоящее изобретение относится к способу и к лекарственному средству для фармакологического лечения случайной транссудации ядов для топоизомеразы II, таких как антрациклины.

В частности, настоящее изобретение относится к системному и местному введению ингибитора топо II, такого как бисдиоксопиперазин ICRF-187 при лечении случайной транссудации яда для топоизомеразы II, такого как антрациклины даунорубицин, доксорубицин, эпирубицин или идарубицин.

Предпосылки создания изобретения

Топоизомераза II, яды для топоизомеразы II и каталитические ингибиторы топоизомеразы II

Топоизомераза II (топо II) принадлежит к системе ядерных ферментов, участвующих в процессинге ДНК в ходе клеточных циклов. В общих чертах они способны осуществлять временное расщепление обеих цепей двойной спирали ДНК, тем самым позволяя проходить другой интактной двухцепочечной ДНК через сайт расщепления. Время сохранения расщепления очень короткое. Лекарственные средства, действующие на топо II, подразделяются на две крупные категории, яды для топо II и каталитические ингибиторы топо II.

Яды для топо II сдвигают равновесие каталитического цикла в сторону расщепления, тем самым повышая концентрацию временных, связанных с белком разрывов в геноме [1] (см. фиг.1). Таким образом, они захватывают расщепляемые комплексы, превращая необходимый фермент топо II в летальный [2].

Каталитические ингибиторы топо II представляют собой совершенно другую группу лекарственных средств. Они действуют за счет создания препятствий в осуществлении каталитической функции, что может происходить по меньшей мере двумя путями. Один из них представляет собой ингибирование начального связывания топо II с ДНК, как в случае хлорохина [3] и акларубицина [4, 5]. Другой путь работает через блокирование топо II в стадии закрытого зажима после повторного лигирования, что имеет место, по всей видимости, в случае ICRF-187 и его аналогов [6-9].

Антрациклины

Антрациклины представляют собой группу широко используемых цито токсических соединений с активностью, проявляемой в случае различных злокачественных заболеваний.

Даунорубицин, первый антрациклиновый антибиотик, открытый в начале 1960-х гг., был выделен из культур стрептомицинов. Вскоре после этого был экстрагирован доксорубицин и исследован клинически. Оба препарата характеризуются широким диапазоном активности против злокачественных заболеваний: даунорубицин действует преимущественно в случае гематологических злокачественных заболеваний, а доксорубицин в случае солидных опухолей. Эпирубицин представляет собой стереоизомер доксорубицина, имеющий те же самые показания, однако несколько менее мощный и с меньшей кардиотоксичностыо, чем исходное лекарственное средство. Идарубицин (4-деметоксидаунорубицин) схож с даунорубицином, однако не имеет метоксильной группы в положении С-4. Это более липофильное средство, чем другие антрациклиновые соединения, который более легко проникает через гематоэнцефалический барьер.

Механизм действия указанных лекарственных средств не совсем полностью ясен. Противоопухолевый эффект объясняется способностью ингибировать ядерный фермент ДНК топо II. Таким образом, антрациклины классифицируются как яды для топо II. Однако указанные лекарственные средства также взаимодействуют с другими ферментами, например топо I, ДНК- и РНК-полимеразами и геликазами. Кроме того, они способны интеркалировать ДНК, осуществляя процесс, который может инициировать свободно-радикальное повреждение. В ходе внутриклеточного метаболизма антрациклина его антрахиноновое ядро превращается в свободно-радикальный промежуточный семихинон, который может вызвать локальную деструкцию ДНК. Более того, антрациклины способны хелатировать железо и образовывать трехкомпонентные комплексы с ДНК. Однако концентрация лекарственного средства, необходимого для индукции свободно-радикального повреждения ДНК, выше, чем достигаемая при используемых клинических концентрациях. Таким образом, указанный механизм, по всей видимости, менее важен в отношении противоопухолевого эффекта.

Наиболее выраженным побочным действием, наблюдаемым при лечении антрациклином, является кардиотоксичность [10-11], гематологическая токсичность, желудочно-кишечная токсичность и очень тяжелая местная токсичность, возникающая после случайной транссудации (см. ниже).

ICRF-187

Бисдиоксопиперазин ICRF-187 (дексразоксан) представляет собой водорастворимый (+) энантиомер разоксана (ICRF-159). Он является высокоспецифичным каталитическим ингибитором топо II. Есть гипотеза, согласно которой ICRF-187, как аналог катионсвязывающего соединения ЭДТА, защищает от свободно-радикального повреждения связыванием и таким образом скрывает железо от кислорода [12]. Однако авторами было недавно показано, что клетки с приобретенной реэистентностью к ICRF-187 несут мутации в топо IIα (подтип топо II), которые находятся в иных сайгах, чем мутации, индуцированные ядами для топо II, такими как даунорубицин и этопозид. При использовании гуманизированного топо Ив из дрожжей авторы подтвердили, что указанные мутации являются функциональными [13, 14]. В этой связи предположения авторов о том, что ICRF-187 является специфичным агентом для топо II, были верными. Была показана возможность устранить гибель клетки, вызванной этопозидом, даунорубицином и идарубицином на 2 разных стадиях (см. также фиг.2) в цикле ферментативного катализа. Таким образом, интеркалирующие лекарственные средства, такие как хлорохин, ингибируют фермент за счет того, что не позволяют ему достичь нужной мишени [3, 15, 16] и бисдиоксопиперазин ICRF-187 блокирует фермент на стадии закрытого зажима [4, 17, 18].

ICRF-187 представляет собой зарегистрированное кардиопротективное средство (Zinecard®, Cardioxane®), применяемое в случае развития кардиотоксичности, вызванной антрациклином.

Транссудация антрациклинов

Случайная транссудация происходит, как установлено, у 0,6-6% пациентов, проходящих химиотерапию. Химиотерапевтические средства, такие как антрациклины, которые связываются с ДНК, особенно способны вызвать тяжелое повреждение тканей транссудацией. Тканевое повреждение может не проявляться в течение нескольких дней или даже недель и может продолжать ухудшаться в течение месяцев, возможно, в связи с тем, что лекарственное средство циркулирует в прилегающей ткани. Локальная токсичность характеризуется появлением острой боли, эритемы и набухания в месте транссудации и часто прогрессирует с образованием изъязвлений. В действительности, было показано, что антрациклины, например доксорубицин, могут сохраняться в тканях по меньшей мере в течение месяца [20]. В то время как небольшие изъязвления могут излечиваться, крупные изъязвления требуют хирургического иссечения для облегчения состояния боли и исцеления соответствующей ткани. При этом приемлемым лечением является раннее хирургическое вмешательство с обширной санацией захваченной области с последующей пересадкой кожи [21].

В течение последних двух десятилетий было исследовано множество возможных вариантов лечения.

Местное охлаждение льдом в течение времени от 1 часа до 3 дней или дольше представляет собой широко используемый способ лечения (22), к которому следует приступать немедленно. Использование местной инъекции или местного введения кортикостероидов в качестве противовоспалительного лечения дает противоречивые результаты в исследованиях на животных и людях [23]. Скорее всего, воспаление не вносит вклад в патофизиологию, и кортикостероиды могут даже ухудшить положение. В экспериментах был исследован эффект местного введения бикарбоната натрия [24], что дало иные результаты, чем, например, в случае местного введения тиосульфата натрия, гиалуронидазы [25] и бета-адренергетиков (агонистов и антагонистов) [26]. Лечение в рамках эксперимента и клиническое использование местного введения диметилсульфоксида (ДМСО) в течение времени от 2 до 7 дней при наличии или в отсутствие α-токоферола (витамин Е) [27-29] показало благоприятный эффект как в исследованиях на животных, так и в случае неконтролируемых клинических испытаний, по меньшей мере, в случае ДМСО. Однако полученные результаты не являются однородными. В одном испытании внутрибрюшинное (в/б), равно как и местное, лечение α-токоферолом, экстрактом Гинкго билоба (Ginkgo biloba) или пентоксифиллином в случае внутрикожного (в/к) введения доксорубицина у крыс снизило уровень клеточного малондиальдегида, что предполагает включение процесса связывания свободных радикалов [29]. Би(3,5-диметил-5-гидроксиметил-2-оксоморфолин-3-ил) (ДГМ3) может взаимодействовать с доксорубицином in vitro с образованием неактивного метаболита агликона дезокси-доксорубицина, и при этом лечение транссудации путем введения внутрь поражения ДГМЗ после в/к введения доксорубицина у свиньи дало некоторый положительный эффект [30]. После 1988 г. не было опубликовано исследований, подтверждающих эти данные.

Почти во всех исследованиях на животных антрациклин вводят внутрикожно. Считалось, что инъекции под слой мышц кожи грызунов, в подкожную мышцу шеи (panniculus carnosus), может вызвать неравномерные язвенные поражения, тогда как внутрикожные инъекции приводят к однородному некрозу кожи и изъязвлению [32]. Указанная в/к инъекция антрациклинов также представляла собой способ, исследованный на моделях свиньи.

Флуоресценция замороженных разрезов участков транссудации доксорубицина и эпирубицина была заявлена как эффективный способ обнаружения остаточных лекарственных средств в ткани, что могло служить показанием для хирургического лечения инфильтрации [31, 33].

Гистологические изменения исследовали на модели кроликов, и было показано, что наиболее ранние изменения включают облитерацию сосудов и некробиоз коллагена. Нигде не было показано, что воспалительные клетки играют первостепенную роль [34]. Небольшие везикулы неизвестной этиологии были видны на некротизированной коже крыс [32]. Не проводилось также исследований с целью определения наличия апоптоза.

Краткое раскрытие изобретения

Отсутствуют публикации по исследованиям, которые указывали бы на ICRF-187, на другие бисдиоксопиперазины, а также на каталитические ингибиторы топо II как на вариант лечения. Более того, ни в одном из опубликованных материалов исследований или обзоров не обсуждается роль ферментов топо II в качестве потенциальных мишеней для антидотов в случае транссудации антрациклинов или других ядов для топо II. И, наконец, было проведено множество экспериментов с животными с местным лечением внутрикожно выделяемых антрациклинов. По мнению авторов, подкожное введение лучше всего отражает реальность, имеющую место в клинике. Более того, как показано в приведенных примерах, величина, выраженная произведением площади раны на время (площадь под кривой, AUC), представляет собой хорошо воспроизводимый параметр.

Возможность локального лечения в сравнении с системным лечением очень важна, поскольку возрастает возможность использования устройств доступа к центральным венам. В том случае, когда ожидаются в течение длительного периода времени множественные инфузии, следует рассматривать вероятность размещения подкожных резервуаров в длинную цепь. Такой подход также представляет собой вариант выбора при антрациклиновой терапии. Вариант размещения в течение короткого срока или в течение длительного периода времени постоянных центральных венозных катетеров стал в настоящее время обычной хирургической процедурой, проводимой у раковых пациентов.

Однако такие устройства не свободны от протечек, проблем, связанных с размещением или с образованием инфекционных тромбов. Отмечается частота транссудации у 6,4% [35]. Очевидно, что трудно лечить местную транссудацию от центрально установленных устройств. В такой ситуации системное лечение более приемлемо, но до настоящего времени было неприемлемо.

Описание чертежей

На фиг.1 показан захват ядами для топо II расщепляемых комплексов, что превращает необходимый фермент топо II в летальный.

На фиг.2 показана предполагаемая структура и каталитический цикл расщепления топо II одного сегмента ДНК (G) и прохождения другого сегмента (Т). Фермент является гомодимером, состоящим из трех сегментов. Яды для топо II действуют на стадиях 3-4, когда сегмент расщеплен. Каталитические ингибиторы действуют либо на стадии 1 (хлорохин и акларубицин), либо на стадии 5 (ICRF-187).

На фиг.3 показаны результаты примера 2.

На фиг.4 показаны результаты примера 4.

На фиг.5 показаны результаты примера 6.

На фиг.6 показаны результаты примера 9.

На фиг.7 показаны результаты примера 11. Среднее значение площади под кривой (AUC) из 7 независимых экспериментов с даунорубицином, вводимым п/к в дозе 3 мг/кг (п/к) +/- ICRF-187 в дозе 250 мг/кг (в/б) в момент времени t=0. = без ICRF-187; = плюс ICRF-187; ---- = среднее значение; разделители = стандартная ошибка средней.

На фиг.8а показаны результаты примера 11. Средние значения AUC для различных вариантов введения ICRF-187 после п/к инъекции даунорубицина в дозе 3 мг/кг.

На фиг.8В показаны результаты примера 11. Средние значения AUC для различных вариантов введения ICRF-187 после п/к инъекции идарубицина в дозе 0,75 мг/кг.

На фиг.8С показаны результаты примера 11. Средние значения AUC для различных вариантов введения ICRF-187 после п/к инъекции доксорубицина в дозе от 2 до 3 мг/кг.

На фиг.9 показаны результаты примера 11.

Левая графа: рассеянные кружочки обозначают распределение значений AUC для отдельных мышей после п/к введения даунорубицина в дозе 3 мг/кг и затем солевого раствора (О; n=56) или ICRF-187 при в/б введении в дозе 250 мг/кг в момент времени t=0 (; n=55). Горизонтальные линии показывают средние значения AUC.

Правая графа: Среднее значение площади поражения относительно времени с теми же данными, что и в левой графе:

DEX: дексразоксан = ICRF-187; AUC: площадь под кривой.

На фиг.10 показаны результаты примера 11.

Левая графа: рассеянные кружочки показывают распределение значений AUC для отдельных мышей после п/к введения доксорубицина в дозе 2 или 3 мг/кг с последующим в/б введением солевого раствора (О; n=56) или в/б введением ICRF-187 в дозе 250 мг/кг в момент времени t=0 (•; n=55). Горизонтальные линии указывают средние значения AUC.

Правая графа: Среднее значение площади раны относительно времени при тех же данных, что и в левой графе:

DEX: дексразоксан = ICRF-187; AUC: площадь под кривой.

Подробное раскрытие изобретения

Настоящее изобретение относится к системному и/или местному эффективному лечению случайной транссудации ядов для топоизомеразы, таких как антрациклины даунорубицина, доксорубицин, эпирубицин, идарубицин, с помощью каталитического ингибитора топо II, такого как бисдиоксопиперазин ICRF-187.

В одном варианте реализации настоящее изобретение относится к способу профилактики или лечения повреждения ткани, связанного с транссудацией ядов для топо II, включая антрациклины, у пациента, проходящего лечение, обычно системное лечение ядом для топоизомеразы II. Указанный способ включает введение каталитического ингибитора топо II пациенту, при наличии в этом необходимости. Признаки возможной транссудации ядов топоизомераэы II обычно включают возникновение острой боли в области транссудации, так что лечение повреждения тканей должно быть начато безотлагательно. Однако повреждение такни может проходить в течение длительного периода времени после возникновения транссудации, так что лечение каталитическим ингибитором топо II может повторяться так часто, как это необходимо для поддержания оптимального подавления повреждения ткани.

Ингибитор топо II согласно настоящему изобретению предпочтительно выбирают из группы, включающей бисдиоксопиперазины, хинолины, акларубицин и акридины. Предпочтительным бисдиоксопиперазином является ICRF-187 (дексразоксан). При этом бисдиоксопиперазиновые соединения, к которым относится настоящее изобретение, включают бис (3,5-диоксопиперазин-1-ил)алканы, имеющие структуру, представленную общей формулой I:

где R¹ и R² независимо выбирают из водорода и необязательно замещенного C_1-6-алкила, или R¹ и R² вместе с атомами, к которым они присоединяются, образуют С_3-8-карбоциклическое кольцо, где R³ и R⁴ выбирают из водорода и необязательно замещенного C_1-6-алкила.

В контексте настоящего описания термин “C_1-6-алкил” обозначает линейную или разветвленную насыщенную углеводородную группу, содержащую от одного до шести атомов углерода, такую как метил, этил, н-пропил, изопропил, циклопропил, н-бутил, изобутил, втор-бутил, трет-бутил, пентил, изопентил, неопентил, гексил, циклогексил.

В контексте настоящего описания термин “С_3-8-карбоциклическое кольцо” обозначает циклопропильную, циклобутильную, циклопентильную, цикогексильную, циклогептильную или циклооктильную группы. Следует понимать, что когда R¹ и R², вместе с атомами, которыми они присоединяются, обозначают “С_3-8-карбоциклическое кольцо”, то диоксопиперазиновые кольца могут быть присоединены к указанному карбоциклическому кольцу либо в транс (Е), либо в цис (Z) положении относительно кольца. Следует понимать также, что само карбоциклическое кольцо может быть замещено 1-3 группами, выбранными из C_1-6алкила, С_1-6-алкокси(=С_1-6-алкилокси) и др.

В контексте настоящего описания термин “необязательно замещенный” означает, что рассматриваемая алкильная группа может иметь от 1 до 3 замещений одной или большим числом групп, выбранных из C_1-6-алкоксила, оксо (который может быть представлен в таутомерной энольной форме), карбоксила, амино, гидроксила, моно- и ди(С_1-6алкил) амино, карбамоила, моно- и ди(С_1-6алкил) аминокарбонила, галогена (например, фтора, хлора, брома и иода), фенила или гетероциклила (например, пиперидина, пипераэина, морфолина, пирролина, пирролидина, пиразолина и имидазолина).

В предпочтительном варианте реализации настоящего изобретения значения заместителей R¹, R², R³ и R⁴ включают сочетания, в которых R¹ и R² выбирают из водорода, метила, этила, пропила, изопропила, метоксиметила и этоксиметила и где R³ и R⁴ определены выше, но предпочтительно выбирают из водорода и метила.

В другом предпочтительном варианте реализации изобретения значения заместителей R¹, R², R³ и R⁴ включают сочетания, в которых R¹ и R² вместе с атомами, к которым они присоединяются, обозначают цикопропильное, циклобутильное или циклопентильное кольцо и в которых R³ и R⁴ в основном определены выше, но предпочтительно их выбирают из водорода и метила.

В еще одном предпочтительном варианте реализации изобретения значения заместителей R¹, R², R³ и R⁴ включают сочетания, в которых R³ и R⁴ выбирают из водорода, метила и метила, замещенного гетероциклилом, например пиперидина, пиперазина, морфолина, пирролина, пирролидина, пиразолина и имидазолина и в которых R¹ и R² в основном указаны выше, но предпочтительно выбираются из водорода, метила, этила, пропила, изопропила, метоксиметила и этоксиметила, в особенности из метила.

В еще одном предпочтительном варианте реализации изобретения значения заместителей R¹, R², R³ и R⁴ включают сочетания, в которых R¹ и R² выбирают из водорода, метила, этила, пропила, изопропила, метоксиметила и этоксиметила и где R³ и R⁴ означают водород.

Следует иметь в виду, что заместители R¹ и R² могут привести к появлению оптических форм (то есть (S) и (R) форм) или рацемических смесей таких форм.

Особенно предпочтительными сочетаниями, в которых R³ и R⁴ обозначают водород, являются те сочетания, в которых R¹=R² = водород, метил (мезо), этил (мезо), в которых R¹ = водород и R² = метил (рацемическая смесь, (S)-(+) (дексразоксан) или (R-(-) (левразоксан), предпочтительно (S)-(+)) и этил, а также те, в которых R¹ = метил, R² = этил, пропил, изопропил и метоксиметил, при этом последний находится в эритро или трео форме, предпочтительно в эритро форме.

Введение каталитического ингибитора топо II может быть осуществлено местным введением в ткань, пораженную транссудацией яда для топоизомеразы II. Указанное введение включает инъекцию в такой пораженный участок, непосредственное нанесение ингибитора или с помощью любой формы имплантата, посредством повязки, распыления или любым другим способом. Местное введение может быть использовано как единственный способ лечения или как дополнительный способ лечения к системной терапии. Местное лечение особенно выгодно в том случае, когда транссудация расположена в полости тела, такой как плевра.

В предпочтительном варианте реализации изобретения введение каталитического ингибитора топо II осуществляется путем системного введения в ткань, пораженную транссудацией яда для топоизомеразы II. Очень важный аспект изобретения заключается в том, что повреждение ткани может быть предотвращено или излечено при системном введении, поскольку системное введение гарантирует, что ингибитор достигнет места поражения ткани.

Очевидно, что введение ингибитора будет осуществляться обычно в том случае, когда транссудация уже является реальностью или когда считается, что это случилось. Однако в некоторых случаях может быть предпочтительно начать профилактическое лечение. Такая потребность может возникнуть в ситуации, когда пациент страдает от транссудации при раннем лечении ядом для топо II или в том случае, когда имеется явный риск транссудации, например, когда пациент имеет очень чувствительные вены, что весьма часто имеет место при химиотерапии.

Предпочтительный вариант изобретения включает ту ситуацию, когда каталитический ингибитор топо II вводится после лечения ядом для топоизомеразы II. В более предпочтительном варианте реализации изобретения указанный ингибитор вводят после лечения ядом для топоизомеразы II в течение того периода, пока ткань все еще содержит яд для топоизомеразы II или его активные метаболиты. В таких случаях может быть проведено лечение ингибитором с включением интервала, зависящего от расположения и степени повреждения ткани. Любой специалист со средним уровнем знаний в данной области в состоянии на основе имеющейся в настоящее время информации предложить конкретную процедуру лечения в конкретной ситуации, так как основная проблема заключается в том, чтобы ингибитор гарантированно присутствовал в соответствующей области все то время, пока яд проявляет активность в указанной области ткани.

Яды для топоизомеразы II, которые могут вызвать повреждение тканей и которые можно лечить в соответствии со способом настоящего изобретения, включают этопозид, фосфат этопозида, тенипозид, даунорубицин, доксорубицин, идарубицин, эпирубицин, митоксантрон, м-AMSA и антрациклин. Более того, любой яд для топоизомеразы II, который ингибирует стадию повторного лигирования ядерной топоизомеразы II, стадию, на которой фермент создает расщепляемый комплекс в ДНК, входит в область настоящего изобретения.

В основном нет причин вводить ингибитор задолго до введения яда и поэтому наиболее предпочтительно вводить ингибитор по существу одновременно с введением яда для топоизомеразы II в ситуации, когда желательно профилактическое лечение.

В том случае, когда каталитический ингибитор топо II вводят после введения яда для топоизомеразы II, этот период должен в основном охватывать 3 недели после введения яда для топоизомеразы II, такой, как в пределах 2 недель, предпочтительно в течение 1 недели, более предпочтительно в пределах 5 дней после, еще более предпочтительно в течение 3 дней после и еще более предпочтительно в течение 1 дня после введения яда для топоизомеразы II. 3-недельный период может иллюстрировать ситуацию, в которой яды или его метаболиты все еще проявляют активность в организме пациента.

В основном каталитический ингибитор топо II следует вводить в течение периода, равного 18 часам после введения яда для топоизомеразы II, такого как в течение 12 часов, предпочтительно в течение 6 часов после, более предпочтительно в течение 4 часов после, еще более предпочтительно в течение 2 часов после и наиболее предпочтительно в течение 1 часа после и наиболее предпочтительно сразу же после введения яда топоизомеразы II с целью предупреждения развития повреждения тканей в результате транссудации. Однако по другим причинам может будет более приемлемо понаблюдать, будет ли иметь место какая-либо транссудация, и затем уже лечить пациента ингибитором как можно скорее. В соответствии с этим в другом своем аспекте способ настоящего изобретения относится к ситуации, в которой каталитический ингибитор топо II вводят при обнаружении или подозрении на наличие транссудации яда для топоизомеразы II.

В предпочтительном варианте реализации изобретения каталитический ингибитор топо II вводят не менее чем в двух повторных дозировках, таких как по меньшей мере в виде 3 повторных дозировок. Указанные повторные дозировки могут быть идентичными или представлять собой постепенное снижение дозы. Предпочтительно, чтобы повторные дозировки вводились с интервалом от 3 дней от первой дозировки, предпочтительно с интервалом 2 дня, более предпочтительно с интервалом 1 день. Однако малые интервалы, менее 24 часов, такие как интервалы максимум 18 часов, более предпочтительно максимум 6 часов, такие как интервалы примерно 3 часа, после введения первой дозы каталитического ингибитора топо II показали удивительные результаты. Интервалы не должны быть идентичны в том смысле, что лечение с повышающимися интервалами может быть очень успешным. Любой специалист со средним уровнем знаний в данной области в состоянии оценить вид “насыщения” относительно высокими дозами или дозами с малыми интервалами с последующим повышением интервалов после введения каталитического ингибитора топо II.

Каталитический ингибитор топо II следует вводить в течение 12 часов, предпочтительно в течение 6 часов после обнаружения или возникновения подозрения на наличие транссудации яда для топоизомеразы II. Следует отметить, что введение может проводиться общепринятым способом, для того чтобы предотвратить поражение ткани от возможной транссудации.

В предпочтительном варианте реализации изобретения каталитический ингибитор топо II представляет собой бисдиоксопиперазин и яд для топоизомеразы II представляет собой антрациклин. В настоящее время известно, что антрациклин ответственен за наиболее серьезные случаи повреждения тканей. В соответствии с этим способ, в котором антрациклин выбирают из даунорубицина, доксорубицина, идарубицина и эпирубицина, представляет собой очень важный аспект изобретения.

Ингибитор топо II согласно настоящему изобретению может быть бисдиоксопиперазином с указанной выше формулой и предпочтительный бисдиоксопиперазин представляет собой ICRF-187 (дексразоксан).

Ввиду специфических особенностей настоящего изобретения очень трудно указать точную дозировку ингибитора. Однако в том, что касается ICRF-187, концентрации и дозировки используемого средства известны из других медицинских показаний и такие же дозировки могут использоваться в способах согласно настоящему изобретению. В других случаях специалист со средним уровнем знаний в данной области в состоянии сам предложить нужную дозировку, в том числе за счет введения повышающихся доз в соответствии с установленным объемом транссудации яда. В целом риск поражения тканей повышает риск развития побочных эффектов, вызываемых ингибитором. Цель способа согласно настоящему изобретению заключается во введении ингибитора топо II в количестве, достаточном для того, чтобы он присутствовал в ткани и мог предупредить развитие или излечить поражения ткани. Как следует из примеров проводимого успешного лечения, оно может осуществляться повторными дозировками в диапазоне от 1000 до 500 мг/кг, вводимыми пациенткам-женщинам. При этом в соответствии с настоящим изобретением могут использоваться повторные дозировки от 100 до 5000 мг/кг. Точная доза зависит от того, проводится введение одной дозой или 3 или большим количеством повторных доз, которые предпочтительны в конкретной ситуации. Как было показано в экспериментах с мышами и свиньями, вводимые повторно дозировки, меньшие, чем 25 мг/кг, дают очень хороший эффект. Соответственно, указанные дозировки входят в область настоящего изобретения.

Еще одним объектом настоящего изобретения является использование каталитического ингибитора топо II для получения лекарственного средства, предназначенного для лечения или профилактики повреждения ткани, вызываемого транссудацией яда для топоизомеразы II у пациента, проходящего лечение, такое как системное лечение ядом для топоизомеразы II. Соответственно, настоящее изобретение относится к использованию каталитического ингибитора топо II при получении лекарственного средства, предназначенного для использования в рамках любого из указанных способов.

В контексте настоящего описания термин “лечение ядом для топоизомеразы” означает непосредственно проводящееся лечение (например, у пациента проходящего конкретный курс лечения) или ситуацию, при которой пациент уже проходил лечение.

Настоящее изобретение также относится к фармацевтическому набору, применяемому для профилактики или лечения повреждения тканей, вызванного транссудацией ядов для топоизомеразы II, включающих антрациклины, у пациентов, проходящих системное лечение препаратом, при этом указанный набор включает:

a) стандартную дозу яда для топоизомеразы II и необязательно фармацевтически приемлемый носитель и

b) стандартную дозу каталитического ингибитора топо II и необязательно фармацевтически приемлемый носитель, применяемый либо для местного, либо для внутривенного введения, и необязательно

c) описание процедуры введения каталитического ингибитора топо II пациенту в случае транссудации.

В предпочтительном варианте реализации настоящее изобретение относится к фармацевтическому набору, предназначенному для профилактики или лечения повреждения ткани, вызванного транссудацией антрациклинов, у пациента, проходящего системное лечение антрациклинами, при этом указанный набор включает:

a) стандартную дозу антрациклина и необязательно фармацевтически приемлемый носитель для внутривенного введения и

b) стандартную дозу бисдиоксопиперазина и необязательно фармацевтически приемлемый носитель, пригодный либо для местного, либо для внутривенного введения, а также необязательно

c) описание процедуры проведения каталитического ингибирования топо II бисдиоксопиперазином у пациента в случае введения при транссудации бисдиоксопиперазина.

Указанный набор может включать любые подходящие растворители для активных ингредиентов и описание процедуры местного и/или системного использования ингибитора.

В предпочтительном варианте реализации изобретения указанный набор включает только любой из указанных в описании каталитических ингибиторов топо II, без яда для топо II.

Набор предпочтительно выполняют в виде набора для неотложной помощи, который должен быть доступен сразу же при возможном появлении транссудации.

Настоящее изобретение далее иллюстрируется следующими примерами.

Примеры

Материалы и методы

Общие замечания

Эксперименты проводили в лаборатории экспериментальной медицинской онкологии (Laboratory of Experimental Medical Oncology) в Финсене (Finsen) и в лабораторных центрах национального университетского госпиталя (Laboratory Centres at the National University Hospital) (Ringshospitalet), Copenhagen, Denmark). Изобретатели №1 и №2 лицензированы (Министерство Юстиции) для проведения экспериментов на живых животных, и, таким образом, они подчиняются конвенциям 86/609/ЕЕС (60) И СЕ (61).

Мыши

Самки гибридных мышей B6D2F1 получены от М&В A/S, Дания, и выдержаны в контролируемых условиях при свободном доступе воды и пищи. Все мыши прошли через период предэкспериментной акклиматизации по меньше мере в течение одной недели. Вес животных варьировал от 19 до 21 г в начале эксперимента.

Лекарственные средства

Ниже приведены коммерчески доступные лекарственные средства.

Гидрохлорид ICRF-187 (Cardioxane®, Chiron)

Гидрохлорид доксорубицина (Doxorubicin "Paranova"®, Pharmacia)

Гидрохлорид даунорубицина (Cerubidin®, Rhône-Poulenc Rorer)

Гидрохлорид идарубицина (Zavedos®, Pharmacia & UpJohn)

Гидрохлорид эпирубицина (Farmorubicin®, Pharmacia & UpJohn)

Фентанил-флуанизон (Hypnorm®, Janssen)

Мидазолам (Dormicum®, Roche)

Анестезия

Во всех экспериментах авторы использовали стандартные растворы, содержащие 1 часть фентанил-флуанизона, 1 часть мидазолама и 2 части изотонического солевого раствора в дозе 0,1 мл/10 г для внутрибрюшинного введения (62).

Техника инъекции

Шерсть удаляли электрической бритвой.

Подкожное отложение антрациклина проводили с использованием шприца Гамильтона (Hamilton®) с фиксированным объемом дозирования 0,05 мл и с размером иглы 27G × 3/4". Место инъекции выбирали примерно на 1 см выше от основания хвоста при оттягивании назад кожи на спине.

ICRF-187 вводили внутрибрюшинно в объеме примерно 0,2 мл с помощью иглы 27G × 3/4".

При введении внутрь поражения ICRF-187 инъецировали с помощью отдельного прокола кожи сразу же после введения антрациклина в объеме 0,05 мл с использованием шприца для нанесения фиксированной дозы (Hamilton®).

Идентификация

Каждая мышь имела на ухе знак для индивидуальной идентификации.

Наблюдения

Дневные измерения проводили по двум самым длинным перпендикулярным диаметрам поражения с помощью линейки. Рану определяли как поражение ткани размером примерно по меньшей мере 2 мм². Излечивание определяли как полный возврат роста волос на пораженной площади. После излечения всех ран мышей подвергали эвтаназии.

Данные по обращению и статистическая обработка

Размер раны вычисляли на основании двух самых длинных перпендикулярных диаметров в мм. Размер раны с течением времени, то есть площадь под кривой (AUC), вычисляли для каждой отдельной мыши. Представленные в следующем разделе данные содержат усредненное значение AUC. Значения AUC, время появления ран и длительность проявления ран сравнивали с использованием теста Манна-Уитни (Mann-Whitney). Для сравнения уровней изъязвления использовали t-тест Фишера.

Сокращения

Использованы следующие сокращения:

AUC = площадь под кривой

TTW_w = время появления раны, мыши без ран исключаются

DW_w = длительность проявления ран, мыши без ран исключаются

N_w/N_G = уровень изъязвления

SEM = стандартная ошибка среднего значения

в/б = внутрибрюшинное введение

п/к = подкожное введение

в/п = введение внутрь поражения

в/в = внутривенное введение

Пример 1

Эксперименты с доксорубицином

В примере 1 исследуют влияние различных концентраций ICRF-187, вводимых в/б в момент времени t=0, то есть одновременно с доксорубицином. Концентрация доксорубицина составляет 2 мг/кг, и объем указан ранее. Контрольной группе в/б вводят солевой раствор. При этом используют двадцать семь мышей.

Результаты показаны в таблице примера 1. Обработка с использованием ICRF-187 в дозе 125 мг/кг, в/б, приводит к 91% снижению величины AUC от 543 до 48 мм² × дни (р<0,05). Ступенчатое повышение концентрации ICRF-187 до 250 и 375 мг/кг приводит к полному предупреждению образования ран. Уровень изъязвления снижается с 86 до 14%, 0 и 0% соответственно. В связи с малым числом ран в группе животных, обработанных ICRF-187, статистические сравнения изменений по TTW и DW являются незначимыми. При этом отсутствовали смертельные исходы, связанные с лечением.

Пример 2

Время введения ICRF-187

На 36 мышах исследуют время введения ICRF-187. Как в примере 1, концентрация доксорубицина составляет 2 мг/кг и солевой раствор служит в качестве контроля. ICRF-187 вводят в/б в концентрации 250 мг/кг в одновременном режиме, через 3 часа после или через 6 часов после введения доксорубицина соответственно. Полученные результаты показаны в таблице №2.

Обработка с использованием ICRF-187 приводит к 82-92% снижению величины AUC с 458 до 45, 52 и 81 мм² × дни соответственно. Отмечалась статистически незначимая тенденция к меньшему снижению AUC в том случае, когда введение проводили через 6 часов после доксорубицина, по сравнению со случаем одновременного введения. Время появления раны и длительность проявления раны не отличались. При этом не отмечалось смертельных исходов, связанных с лечением. Средние значения AUC показаны графически на фиг.3.

В целом, лечение с использованием ICRF-187 в период времени t=0 в примерах 1 и 2 снижало уровни изъязвления от 14/16 до 6/29, то есть от 88 до 21% (р<0,05).

Пример 3

Эксперименты с даунорубицином

Влияние различных доз ICRF-187 исследуется в примере 3. Солевой раствор служит в качестве контроля, который дает значения AUC 764 мм² × дни. Совместное введение с ICRF-187 в дозе 250 и 375 мг/кг приводит к снижению величины AUC на 48 и 93% соответственно (р=<0,05). Уровень изъязвления снижается с 87 до 83 и 25%. Отмечался противоречивый результат с точки зрения длительности проявления раны в группе 2.

В любом случае статистическая оценка характеристик нескольких ран является незначимой.

Не отмечалось смертельных исходов, связанных с лечением.

Пример 4

Сравнение двух концентраций п/к вводимого даунорубицина.

Сравнение двух концентраций подкожно вводимого даунорубицина проводят при одновременном лечении ICRF-187 в дозе 250 мг/кг и без него. В таблице для примера 4 приведены полученные результаты.

Средние значения AUC показаны на фиг.4.

Введение ICRF-187 приводит к снижению значений AUC на 100 и 75% в группе с низкой и высокой дозой соответственно (р<0/05). Аналогично зависимые от дозы различия между AUC в двух контрольных группах (1 и 3) являются статистически значимыми, как и влияние ICRF-187 на среднее значение продолжительности проявления ран в группах 1 в сравнении с 2 и 3 в сравнении с 4 соответственно. Снижение уровня изъязвления в группах, получающих даунорубицин в дозе 1 мг/кг, аналогично является статистически значимым, при этом та же сама тенденция наблюдалась в группе с приемом в дозе 3 мг/кг. Хотя последнее не было статистически значимым.

Пример 5

Повторение эксперимента с большими группами

В примере 5 эксперименты повторяют с группой большего размера, используя 36 мышей. Как показано в таблице примера 5, отмечается снижение уровня изъязвления между мышами, не получающими, и мышами, получающими для лечения ICRF-187. Кроме того, ICRF-187 снижал (р<0,05) значение AUC на 73 и 83% в группах, получающих дозу 1 и 3 мг/кг соответственно. Кроме того, различия по AUC, TTW и по DW между двумя контролями было статистически значимым. Отмечается тенденция к сокращению значения DW и увеличению значения TTW между двумя группами с низкой дозой, что, однако, не было статистически значимым. В группах, принимающих дозу 3 мг/кг, различия были значимыми.

Сравнение группы с группой в рамках примеров 4 и 5 показывает отсутствие статистически значимых различий между аналогичными видами лечения, то есть можно получить одни и те же результаты в двух примерах. Таким образом, обобщенные данные двух экспериментов усилили статистическую значимость различий по AUC, TTW и DW между группами, принимающими для лечения ICRF-187, и группами, не принимающими ICRF-187, а также между группами с приемом низкой и высокой доз.

Пример 6

Влияние различного времени введения ICRF-187

ICRF-187 вводят в то же самое время, что и даунорубицин, через 3 и 6 часов после введения соответственно. Солевой раствор служит в качестве контроля. Доза даунорубицина составляет 3 мг/кг, п/к и ICRF-187 вводят в/б в растворе в дозе 250 мг/кг. Используют двадцать восемь мышей. Результаты показаны в данных таблицы №6, и среднее значение AUC приведено графически на фиг.5.

Изменения значения AUC отражают влияние лечения с использованием ICRF-187 в случае введения его в то же самое время, что и даунорубицина, а также через 3 часа. Таким образом, AUC снижается на 70% в момент времени t=0 (р<0,05) и 70% в момент времени t=+3 часа (р<0,05). Однако 6-часовая задержка во введении ICRF-187 приводит к статистически незначимому 34% снижению. Независимо от времени введения применение ICRF-187 приводит к уменьшению продолжительности проявления ран (р<0,05).

Пример 7

Влияние введения ICRF-187 внутрь поражения

ICRF-187 в дозе 100 мг/кг инъецируют в подкожную папулу, образованную за счет инъецируемого даунорубицина. Указанную обработку сравнивают с контролем, в рамках которого инъецируют внутрь поражения солевой раствор, с в/б введением солевого раствора в качестве контроля и с в/б лечением с использованием ICRF-187. В каждой группе было 9 мышей и не отмечалось смертельных исходов, связанных с лечением.

Внутрибрюшинное введение IСRF-187 приводит к снижению значения AUC на 51% (р<0,05). Местное (внутрь поражения) введение для лечения солевого раствора не приводит к снижению значения AUC, и этот эффект не связан с каким-либо эффектом разведения. Кроме того, введение ICRF-187 внутрь поражения дает аналогичное или несколько более выраженное снижение значение AUC в сравнении со значением, полученным при в/б лечении. Время проявления ран было дольше, чем в группе животных с в/б введением ICRF-187 (р<0,05), и снижение длительности проявления ран при в/б или в/п введении ICRF-187 было статистически значимым.

Пример 8

Эксперименты с эпирубицином

В примере 8 используют 28 мышей, которым вводят эпирубицин подкожно в дозе 4 мг/кг. Внутрибрюшинное введение солевого раствора служит в качестве контроля, в то время как курс лечения включает в/б введение ICRF-187 в дозах 125, 250 или 375 мг/кг соответственно. Полученные результаты представлены в таблице для примера 8.

Не отмечалось статистически значимых различий в значениях AUC между 4 группами. Однако если принимать во внимание и значения AUC и уровень изъязвления, то намечается тенденция к зависимому от дозы благоприятному эффекту лечения ICRF-187. Статистический анализ различий в длительности проявления ран или времени возникновения ран не является значимым.

Скорее всего доза эпирубицина в примере 8 была слишком низкой. В этой связи влияние более высокой дозы эпирубицина является предметом дальнейших исследований. Аналогично, влияние времени введения ICRF-187 на транссудацию эпирубицина также не было исследовано.

Пример 9

Эксперименты с идарубицином

В примере 9 мышам (54 мыши) вводили подкожно идарубицин в возрастающих концентрациях от 0,05 до 0,75 мг/кг. Половина групп, служившая контролем, принимала солевой раствор, тогда как другой половине группы вводили в/б ICRF-187 в дозе 250 мг/кг в момент времени t=0. Результаты приведены в данных таблицы для примера 9. При этом не отмечалось смертельных исходов, связанных с лечением.

Введение ICRF-187 в дозе 0,75 мг/кг приводит к 90% снижению значения AUC в сравнении с вариантом солевого раствора, служащего контролем (р<0,05), см. фиг.6. Кроме того, уровень изъязвления снижается со 100 до 22% (р<0,05). Изменения в значениях AUC между группами, в которых проводится лечение с использованием ICRF-187, и контрольными с введением сниженных доз идарубицина, не были статистически значимыми, число ран было слишком малым для дальнейшего статистического анализа. Отмечалось зависимое от дозы повышение среднего значения AUC в контрольных группах (р<0,05).

Пример 10

Расширенные эксперименты с даунорубицином

Было проведено двадцать восемь экспериментов. Семь экспериментов (n=6, 7, 7, 9, 9, 9 и 9) были проведены с даунорубицином, вводимым подкожно в дозе 3 мг/кг, плюс солевой раствор, вводимый в/б в момент времени t=0, и семь экспериментов (n=6, 7, 1, 9, 9, 8 и 9) с даунорубицином, вводимым подкожно в дозе 3 мг/кг, плюс ICRF-187 в дозе 250 мг/кг, в/б в момент времени t=0, и два эксперимента (n=9 и 4), в которых ICRF-187 вводами в дозах 62,5 и 375 мг/кг соответственно, в двух (n=7 и 9) доза составляла 125 мг/кг. ICRF-187 в дозе 250 мг/кг вводили в/в в одном эксперименте (n=9). ICRF-187 вводили в виде трехкратного курса в трех экспериментах: в одном (n=8) доза составляла 250 мг/кг, в/б/ в день 0, 1 и 2. В двух других ICRF-187 инъецировали в момент времени t=0,3 и 6 часов после п/к введения даунорубицина в дозе 125 (n=9) и 62,5 мг/кг (n=9) соответственно.

Пример 11

Расширенные эксперименты с доксорубицином

Было проведено двадцать восемь экспериментов. Шесть экспериментов (n=9, 9, 18, 9, 9 и 7) были проведены с доксорубицином, вводимым подкожно в дозе 2 или 3 мг/кг, плюс солевой раствор, вводимый в/б в момент времени t = 0, и шесть экспериментов (n=9, 8, 16, 6, 9 и 9) были проведены с доксорубицином, при п/к введении в дозе 2 или 3 мг/кг и с ICRF-187, вводимым в/б в дозе 250 мг/кг в момент времени t=0. В двух экспериментах (n=9 и 7) ICRF-187 вводили в дозе 125 мг/кг, в одном эксперименте (n=7) доза составляла 375 мг/кг, в/б, и в одном (n=9) доза составляла 62,5 мг/кг, в/б. В одном эксперименте (n=9) после п/к введения доксорубицина в дозе 3 мг/кг сразу же вводят в/в ICRF-187 в дозе 250 мг/кг. ICRF-187 вводят в трехкратном режиме в трех экспериментах: в одном (n=9) доза доксорубицина составляла 250 мг/к, в/б в день 0, 1 и 2. В двух других - ICRF-187 вводили в момент времени t=0, 3 ч и 6 часов после п/к введения доксорубицина в дозе 125 мг/кг (n=9) и 62,5 мг/кг (n=9) соответственно. В одних экспериментах (n=9) доксорубицин вводят п/к в дозе 1 мг/кг с солевым раствором, в/б, и в одном эксперименте (n=9) с 250 мг/кг ICRF-187, в/б. ICRF-187 в дозе 250 мг/кг вводят в/б через три (n=9 и 9) или шесть часов (n=9 и 9) после п/к введения доксорубицина в дозе 2 или 3 мг/кг в четырех других экспериментах. И, наконец, в рамках двух экспериментов используют предварительно смешанный доксорубицин в дозе 3 мг/кг с ICRF-187 в дозе 250 мг/кг (n=9) либо 30 мг/кг (n=9) для п/к введения.

Результаты

Доксорубицин индуцировал поражения, аналогичные по размеру и длительности как при п/к введении 2 или 3 мг/кг. Так, две указанные дозы были объединены (Таблица А). Межэкспериментальные вариации в средних значениях AUC в семи экспериментах с даунорубицином при п/к введении в дозе 3 мг/кг плюс солевой раствор, в/б, были очень малы (р>0,05). Не было отмечено никаких различий в значениях AUC в семи экспериментах, когда введение даунорубицина в дозе 3 мг/кг сопровождалось в/б введением ICRF-187 в дозе 250 мг/кг в момент времени t=0 (фиг.7). Такая же явная воспроизводимость была представлена в экспериментах с доксорубицином, вводимым п/к в дозе 2 или 3 мг/кг, плюс солевой раствор, в/б или плюс ICRF-187, в/б в дозе 250 мг/кг. Кроме того, поскольку лечение с использованием ICRF-187 приводит к статистически значимому снижению значений AUC во всех указанных выше экспериментах (индивидуальные тесты Манна-Уитни, все р<0,01), конкретные данные были объединены в два “основных” варианта с числом мышей n=61 и 58 (доксорубицин) и n=56 и 55 (даунорубицин) соответственно, как показано в Таблице А.

Однократная в/б инъекция ICRF-187 в дозе 250 мг/кг, проводимая сразу после п/к введения даунорубицина в количестве 3 мг/кг, снизила среднее значение AUC на 70% (р<0,0001) (фиг.8 и 9). Количество мышей с ранами снизилось с 96 до 78% (р=0,0041). У мышей с обнаруженными ранами среднее время возникновения ран замедлилось на 76%, с 5,5 до 9,7 дня (р<0,0001). Кроме того, ICRF-187 снизил среднюю продолжительность проявления ран на 35%, с 26,6 до 17,4 дня (р<0,0001).

В случае введения доксорубицина (фиг.8 и 10) среднее значение AUC после п/к введения в дозе 2 или 3 мг/кг снизилось на 96% (р<0,0001) при в/б введении ICRF-187 в дозе 250 мг/кг в момент времени t=0. Количество мышей с ранами снизилось с 77 до 14% (р<0,0001), длительность проявления ран сократилась до 28% (р=0,0035). Не отмечалось задержки во времени возникновения ран.

В обоих случаях при поражениях, индуцированных даунорубицином и доксорубицином, не отмечалось статистически значимых различий в уровнях защиты, обеспечиваемой в/б инъекцией ICRF-187, в сравнении с в/в введением.

Снижение дозы даунорубицина с 3 до 1 мг/кг приводило к значительно меньшим значениям AUC (р<0,0001), при том, что не отмечалось различий в частоте появления ран, времени или длительности проявления ран. В/б введение ICRF-187 также приводит к статистически значимому снижению значений AUC (р<0,0001) при низкой дозе даунорубицина. Доксорубицин, инъецируемый п/к в дозах ниже 2 мг/кг, не вызывал никаких ран.

При поражениях, индуцированных даунорубицином, значения AUC снижались с уровня 70 до 45% (р=0,0175) при снижении дозы ICRF-187 с 250 мг/кг до 125 мг/кг. В отличие от этого защита против повреждений доксорубицином была одинаково эффективной при всех дозах ICRF-187.

Задержка во введении ICRF-187 на три или даже шесть часов не ухудшала степень защиты от поражения доксорубицином в сравнении с эффектом, получаемым при обработке в момент времени t=0. Аналогично в том случае, когда ICRF-187 вводили через 3 часа после инъекции даунорубицина, защитный эффект не отличался от того уровня защиты, который достигался при немедленном введении ICRF-187. Однако зашита не достигалась, если задержка составляла 6 часов.

Лечение при в/б введении ICRF-187 в дозе 250 мг/кг в течение трех дней подряд полностью предупреждало развитие поражения доксорубицином и даунорубицином. Более того, трехкратное в/б введение ICRF-187 в дозе 62,5 или 125 мг/кг через 0, 3 и 6 часов после инъекции даунорубицина или доксорубицина приводило к по меньшей мере тому же самому уровню защиты, что и однократная в/б инъекция ICRF-187 в дозе 250 мг/кг.

Доза ICRF-187 находится в обратной зависимости от защиты против возникновения раневых повреждений, как было показано в двух экспериментах, в которых ICRF-187 и доксорубицин были смешаны перед п/к инъекцией. Так, п/к инъекция смеси ICRF-187 в дозе 30 мг/кг и доксорубицина в дозе 3 мг/кг приводила к совершенно полной защите против возникновения ран. Однако повышение дозы ICRF-187 до 250 мг/кг в то же самое время приводило к появлению ран у семи из девяти обработанных мышей.

Из фиг.7 видно, что индукция образования ран п/к вводимым даунорубицином и защита от таких поражений за счет в/б введения ICRF-187 высоко воспроизводима.

Среднее значение площади под кривой (AUC) из 7 независимых экспериментов с даунорубицином, п/к в дозе 3 мг/кг +/- ICRF-187, в/б, в дозе 250 мг/кг в момент времени t=0. Вариации между экспериментами были статистически незначимыми в случае экспериментальных животных (плюс ICRF-187; р=>0,05; тест Стьюдента-Ньюманна-Кентса) или контролей (без ICRF-187; р=>0,05). Введение ICRF-187 приводит к статистически меньшим средним значениям AUC (р<0,001) во всех экспериментах.

= без ICRF-187; = плюс ICRF-187; ---- = среднее значение; разделители: = SEM.

Из фиг.8 видно, что защита против поражений, индуцированных даунорубицином, является в большей степени зависимой от дозы и от времени, чем против поражений, вызванных п/к введением доксорубицина. Выраженная защита, достигаемая при трехкратном введении ICRF-187, является достаточно неожиданной. На гистограммах сравниваются средние значения AUC в различных вариантах введения ICRF-187 после п/к инъекции 3 мг/кг даунорубицина (фиг.8а), 0,75 мг/кг идарубицина (фиг.8В) и 2 или 3 мг/кг доксорубицина (фиг.8С) соответственно.

Средние значения AUC: Средняя величина площади под кривой (мм² × дни); n - количество мышей; разделители - SEM.

Описание: За исключением разделителей, обозначающих солевой раствор, описание относится к дозе, способу введения и времени введения ICRF-187.

Из фиг.9 видно, что однократная системная инъекция ICRF-187 значительно снижает число ран, индуцированных п/к введением даунорубицина.

Левый график: Рассеянные точки, показывающие распределение значений AUC для отдельных мышей после п/к введения 3 мг/кг даунорубицина с последующим в/б введением солевого раствора (; n=56) или ICRF-187, в/б в дозе 250 мг/кг в момент времени t=0 ; n=55). Горизонтальные линии показывают средние значения AUC.

Правый график: Средние значения площади раны против времени в те же самые дни, что и на левом графике. Различия в значениях AUC высоко значимы. Кроме того, кривые выявляют задержку появления и сокращение длительности раневых поражений.

DEX: дексразоксан = ICRF-187; AUC: Площадь под кривой.

Из фиг.10 видно, что однократная системная инъекция ICRF-187 значительно снижает число ран, индуцированных п/к введением доксорубицина.

Левый график: Рассеянные точки, показывающие распределение значений AUC для отдельных мышей после п/к введения 2 или 3 мг/кг доксорубицина с последующим в/б введением солевого раствора (; n=56) или ICRF-187, в/б в дозе 250 мг/кг в момент времени t=0 (; n=55). Горизонтальные линии показывают средние значения AUC.

Правый график: Средние значения площади раны относительно времени в те же дни, что и на левом графике. Различия в значениях AUC высоко значимы.

DEX: дексразоксан = ICRF-187; AUC: Площадь под кривой.

Таблица А

Результаты лечения ран у мышей, вызванных п/к введением даунорубицина, идарубицина и доксорубицина. Если особо не оговорено иное, лечение (ICRF-187 или солевой раствор) проводят в момент времени t=0.

DEX: дексразоксан = ICRF-187; AUC: Среднее значение площади под кривой (мм² × дни); FW: Часть мышей с ранами (%); TTW: Среднее значение времени появления ран (дни); DW: Средняя длительность проявления ран (дни); Скобки: Стандартная ошибка среднего значения, SEM; *: Объединенные данные (см. Подробные результаты); n: Число мышей.

Пример 12

Пилотные исследования на свиньях

Использовали датских свиней весом примерно 30 кг. Животных полностью анестезируют и проводят искусственную вентиляцию в ходе п/к инъекции 1 мл антрациклина. В одном эксперименте (n=2) раны появляются после п/к введения 3 мг доксорубицина у свиней, не получавших ICRF-187, тогда как свиньи, получавшие в/в инъекцию 25 мг/кг ICRF-187 в момент времени t=0, не проявляли признаков развития язвы. Во втором эксперименте (n=3) после п/к введения 1 мл даунорубицина у свиней, которым вводили в/в 25 мг/кг ICRF-187 ежедневно в течение трех дней, не появлялись раны; небольшие раны появились у свиней, которым вводили в/в 50 мг/кг в момент времени t=0, и крупные раны появлялись у животных, не проходивших лечения.

Вкратце можно резюмировать, что эксперименты, проведенные на свиньях, подтвердили результаты, полученные в предыдущих экспериментах с мышами, а именно в том, что ICRF-187 защищает от возникновения поражений, индуцированных п/к введением антрациклинов, зависимым от режима введения образом.

Пример 13

Клинические результаты у пациента

Пациентку-женщину, которой инфузировали 149 мг доксорубицина подкожно вместо введения через катетер, подвергли лечению согласно настоящему изобретению.

Лечение с помощью ICRF-187 начали через 2 часа 30 минут после транссудации, применяя ICRF-187 в дозах 1000 мг/м² в первый день, 1000 мг/м² на второй день и 500 мг/м² на третий день. В последующие недели у нее не было отмечено развития побочных эффектов от лечения. Еженедельное обследование клиницистом-онкологом и хирургом, специалистом по пластической хирургии, а также диагностика с помощью ультразвука выявили подкожную массу размером примерно 3×4 см, которая не изменилась по размеру в течение 30-дневного периода наблюдения после инцидента. Не развилось ни язвы, ни признаков некроза кожи несмотря на введение массивной дозы доксорубицина. Пациентка продолжала химиотерапию с задержкой только на одну неделю и без проведения хирургического вмешательства.

Список литературы

1. Froelich-Ammon SJ, Osheroff N. Topoisomerase poisons:

Harnessing the dark side of enzyme mechanism. J Biol Chem 1995; 270:21429-32.

2. Chen AY, Liu LF. DNA topoisomerases: Essential enzymes and lethal targets. Annu Rev Pharma Toxicol 1994; 34:191-218.

3. Jensen PB, Sorensen BS, Sehested M, Grue P, Demant EJF, Hansen HH. Targeting the cytotoxicity of topoisomerase II directed epipodophyllotoxins to tumor cells in acidic environments. Cancer Res. 1994; 54:2959-63.

4. Sehested M. Jensen PB. Mapping of DNA topoisomerase II poisons (etoposide, clerocidin) and catalytic inhibitors (aclarubicin, ICRF-187) to four distinct steps in the topoisomerase II catalytic cycle. Biochem. Pharmacol. 1996; 51:879-86.

5. Sorensen BS, Sinding J, Andersen AH, Alsner J, Jensen PB, Westergaard 0. Mode of action of topoisomerase II targeting agents at a specific DNA sequence: Uncoupling the DNA binding, cleavage and religation events. J Mol Biol 1992; 228:778-86.

6. Tanabe К, Ikegami Y. Ishida R, Andoh T. Inhibition of topoisomerase II by antitumor agents bis(2,6-dioxopiperazine) derivatives. Cancer Res 1991; 51:4903-8.

7. Berger JM, Gamblin SJ, Harrison SC. Wang JC. Structure and mechanism of DNA topoisomerase II. Nature 1996; 379:225-32.

8. Roca J, Ishida R, Berger JM, Andoh T, Wang JC. Antitumor bisdioxopiperazines inhibit yeast DNA topoisomerase II by trapping the enzyme in the form of a closed protein clamp. Proc Natl Acad Sci USA 1994; 91:1781-5.

9. Roca J, Berger JM, Harrison SC, Wang JC. DNA transport by a type II topoisomerase: Direct evidence for a two-gate mechanism. Proc Natl Acad Sci USA 1996; 93:4057-62.

10. Von Hoff DD, Layard MV, Basa P, et al. Risk factors for doxorubicin-induced congestive heart failure. Ann. Intern. Med. 1979; 91:710-7.

11. Von Hoff DD, Layard. Risk factors for development of daunorubicin-cardiotoxicity. Cancer Treat. Rep. 1981; 65 ((suppi 4)):19-23.

12. Hasinoff BB. The iron(III) and copper(II) complexes of adriamycin promote the hydrolysis of the cardioprotective agent ICRF-187 ((+)-1,2-bis(3,5-dioxopiperazinyl-1-y1)propane). Agents and Actions 1990; 29:374-81.

13. Sehested M, Wessel I, Jensen LH, Holm B, Olivieri RS, Kenwrick S, Creighton AM, Nitiss JL, Jensen PB. Chinese hamster ovary cells resistant to the topoisomerase II catalytic inhibitor ICRF-159; a Tyr49Phe mutation confers high level resistance to bisdioxopiperazines. Cancer Res. 1998; 58:1460-8.

14. Wessel I, Jensen LH, Jensen PB, Falck J. Roerth M, Nitiss JL, Sehested M. Human small cell lung cancer NYH cells selected for resistance to the bisdioxopiperazine topoisomerase II (topoll) catalytic inhilbitor ICRF-187 (NYH/187) demonstrate a functional Argl62Gln mutation in the Walker A consensus ATP binding site of the a isoform. [Abstract] Proc. AACR 1998; 39:375

15. Sorensen M, Sehested M, Jensen PB. pH-dependent regulation of camptothecin induced cytotoxicity and cleavable complex formation by the antimalarial agent chloroquin. Biochem. Pharmacol. 1997; 54:373-80.

16. Ishida R, Miki T, Narita T, Yui R, Sato M, Utsumi KR, Tanabe K, Andoh T. Inhibition of intracellular topoisomerase II by antitumor bis(2,6-dioxopiperazine) derivatives: Mode of cell growth inhibition distinct from that of cleavable complex-forming type inhibitors. Cancer Res 1991; 51:4909-16.

17. Roca J. Wang JC. DNA transport by a type II DNA topoisomerase: Evidence in favor of a two-gate mechanism. Cell 1994; 77:609-16.

18. Sehested M, Jensen PB, Sorensen BS, Holm B, Friche E, Demant EJF. Antagonistic effect of the cardioprotector (+)-1,2,-bis(3,5-dioxopiperazinyl-1-y1)propane (ICRF-187) on DNA breaks and cytotoxicity induced by the topoisomerase II directed drugs daunorubicin and etoposide (VP-16). Biochem. Pharmacol. 1993; 46:389-93.

19. Loth TS, Eversmann WW. Jr. Treatment methods for extravasations of chemotherapeutic agents: a comparative study. J. Hand Surg. Am. 1986; 11(3):388-96.

20. Sonneveld P, Wassenaar НА. Nooter К. Long persistence of doxorubicin in human skin after extravasation. Cancer Treat. Rep. 1984; 68(6):895-6.

21. Banerjee A. Cancer chemotherapy agent-induced perivenous extravasation injuries. Postgrad. Med. 1987; 635-9.

22. Dorr RT, Alberts DS, Stone A. Cold protection and heat enhancement of doxorubicin skin toxicity in the mouse. Cancer Treat. Rep. 1985; 69(4):431-7.

23. Dorr RT, Alberts DS, Chen HS. The limited role of corticosteroids in ameliorating experimental doxorubicin skin toxicity in the mouse. Cancer Chemother. Pharmacol. 1980; 5:17

24. Bartowski DL, Daniels JR. Use of sodium bicarbonate as a means of ameliorating doxorubicin-induced dermal necrosis in rat. Cancer Chemother. Pharmacol. 1981; 4:179

25. Disa JJ, Chang RR, Mucci SJ, Goldberg NH. Prevention of adriamycin-induced full-thickness skin loss using hyaluronidase infiltration. Plast. Reconstr. Surg. 1998; 101(2):370-4.

26. Dorr RT, Alberts DS. Modulation of experimental doxorubicin skin toxicity by beta-adrenergic compounds. Cancer Res. 1981; 41 (6):2428-32.

27. Dorr RT, Alberts DS. Failure of DMSO and vitamin E to prevent doxorubicin skin ulceration in the mouse. Cancer Treat. Rep. 1983; 67(5):499-501.

28. Soble M, Dorr RT, Plezia P, Breckenridge S. Dose-dependent skin ulcers in mice treated with DNA binding antitumor antibiotics. Cancer Chemother. Pharmacol. 1987; 20:33-6.

29. Bekerecioglu M, Kutluhan A, Demirtas I, Karaayvaz M. Prevention of adriamycin-induced skin necrosis with various free radical scavengers. J. Surg. Res. 1998; 75(1):61-5.

30. Averbuch SD, Gaudiano G. Koch TH, Bachur NR. Doxorubicin-induced skin necrosis in the swine model: protection with a novel radical dimer. J. Clin. Oncol. 1986; 4(1):88-94.

31. Dahlstrom KK, Chenoufi HL, Daugaard S. Fluorescence microscopic demonstration and demarcation of doxorubicin extravasation. Experimental and clinical studies. Cancer 1990; 65(8):1722-6.

32. Rudolph R, Suzuki M, Luce JK. Experimental skin necrosis produced by adriamycin. Cancer Treat. Rep. 1979; 63(4):529-37.

33. Bleicher JN, Haynes W. Massop DW, Daneff RM. The delineation of adriamycin extravasation using fluorescence microscopy. Plast. Reconstr. Surg. 1984; 74(1):114-6.

34. Luedke DW, Kennedy PS, Rietschel RL. Histopathogenesis of skin and subcutaneous injury induced by adriamycin. Plast. Reconstr. Surg. 1979; 63(4); 463-5.

35. Brothers ТЕ, Von Moll LK, Niederhuber JE, Roberts JA, Walker-Andrews S, Ensminger WD. Experience with subcutaneous infusion ports in three hundred patients. Surg Gynecol Obstet 1988; 166:295

36. European Communities Council В 86 A.D.; 86/609/EEC.

37. The Council of Europe Convention S 1986;

38. Svendsen P. Svendsen P and Hau J, editors. Handbook of Laboratory Animal Science. 1 ed. CRC Press Inc; 1994. 332р.

1. Лекарственное средство для лечения или предупреждения поражения ткани, вызванного случайной транссудацией цитотоксического яда для топоизомеразы II в месте введения яда для топоизомеразы II пациенту, подвергавшемуся лечению указанным ядом для топоизомеразы II, где указанное средство включает бисдиоксопиперазин.

2. Лекарственное средство по п.1, где указанное средство является средством для локального введения бисдиоксопиперазина в ткань, пораженную за счет транссудации яда для топоизомеразы II.

3. Лекарственное средство по п.1, где указанное средство является средством для системного введения бисдиоксопиперазина в ткань, пораженную за счет транссудации яда для топоизомеразы II.

4. Лекарственное средство по любому из предыдущих пунктов, где яд для топоизомеразы II выбирают из группы, состоящей из этопозида, фосфата этопозида, тенипозида, даунорубицина, доксорубицина, идарубицина, эпирубицина, митоксантрона, m-AMSA и антрациклина.

5. Лекарственное средство по п.4, где антрациклин выбирают из группы, состоящей из даунорубицина, доксорубицина, идарубицина и эпирубицина.

6. Лекарственное средство по любому из предыдущих пунктов, где указанное лекарственное средство представлено в форме для однократных или многократных введений.

7. Лекарственное средство по любому из предыдущих пунктов, где указанное лекарственное средство вводят после лечения ядом для топоизомеразы II.

8. Лекарственное средство по любому из предыдущих пунктов, где указанное лекарственное средство вводят после лечения ядом для топоизомеразы II и до тех пор, пока ткань содержит яд для топоизомеразы II или его активные метаболиты.

9. Лекарственное средство по любому из пп.1-6, где указанное лекарственное средство вводят после проявления случайной транссудации указанного яда для топоизомеразы II.

10. Лекарственное средство по любому из пп.1-6, где указанное лекарственное средство вводят после первого проявления боли, эритемы или опухания, вызванного случайной транссудацией указанного яда для топоизомеразы II.

11. Лекарственное средство по любому из пп.1-6, где указанное лекарственное средство вводят, по существу, одновременно с введением яда для топоизомеразы II.

12. Лекарственное средство по любому из пп.1-6, где указанное лекарственное средство вводят в пределах периода 3 недель после введения яда для топоизомеразы II, например, в пределах 2 недель, предпочтительно, в пределах 1 недели, более предпочтительно, в пределах 5 дней, еще более предпочтительно, в пределах 3 дней, еще более предпочтительно, в пределах 1 дня, после введения яда для топоизомеразы II.

13. Лекарственное средство по любому из пп.1-6, где указанное лекарственное средство вводят в пределах периода 18 ч после введения яда для топо II, например, в пределах 12 ч, предпочтительно, в пределах 6 ч, более предпочтительно, в пределах 4 ч, еще более предпочтительно, в пределах 2 ч, и еще более предпочтительно, в пределах 1 ч, например 20 мин, после введения яда для топоизомеразы II.

14. Лекарственное средство по любому из предыдущих пунктов, где указанное лекарственное средство вводят по меньшей мере в двух повторных дозировках.

15. Лекарственное средство по любому из предыдущих пунктов, где указанное лекарственное средство вводят по меньшей мере в трех повторных дозировках.

16. Лекарственное средство по любому из предыдущих пунктов, где указанное лекарственное средство вводят по меньшей мере в четырех повторных дозировках.

17. Лекарственное средство по любому из пп.14-16, где указанные повторные дозировки вводят с интервалом от 1 до 3 дней после первой дозы, предпочтительно, с интервалом 2 дня, более предпочтительно, с интервалом 1 день.

18. Лекарственное средство по любому из пп.14-16, где указанные повторные дозировки вводят с интервалом более чем 24 ч, предпочтительно, более чем 18 часов, более предпочтительно, более чем 6 часов, например, с интервалами примерно 3 часа, после введения первой дозы указанного лекарственного средства.

19. Лекарственное средство по любому из предыдущих пунктов, где указанное лекарственное средство вводят в пределах 12 ч, предпочтительно, в пределах 6 ч после выявления или подозрения на случайную транссудацию яда для топоизомеразы II.

20. Лекарственное средство по любому из предыдущих пунктов, где указанное лекарственное средство вводят в пределах 12 ч, предпочтительно, в пределах 6 ч после введения яда для топоизомеразы II.

21. Лекарственное средство по любому из предыдущих пунктов, где указанное лекарственное средство представляет собой ICRF-187 (дексразоксан).

22. Применение бисдиоксопиперазина для получения лекарственного средства для предупреждения или лечения поражения ткани, вызванного случайной транссудацией цитотоксического яда для топоизомеразы в месте введения яда для топоизомеразы II пациенту, подвергавшемуся лечению указанным ядом для топоизомеразы II.

23. Применение по п.22, где яд для топоизомеразы II выбирают из группы, состоящей из этопозида, фосфата этопозида, тенипозида, даунорубицина, доксорубицина, идарубицина, эпирубицина, митоксантрона, м-АМSА и антрациклина.

24. Применение по п.23, где антрациклин выбирают из группы, состоящей из даунорубицина, доксорубицина, идарубицина и эпирубицина.

25. Применение по любому из пп.22-24, где бисдиоксопиперазин представляет собой ICRF-187 (дексразоксан).

26. Способ лечения или предупреждения поражения ткани, вызванного случайной транссудацией цитотоксического яда для топоизомеразы в месте введения яда для топоизомеразы II пациенту, подвергавшемуся лечению указанным ядом для топоизомеразы II, отличающийся тем, что бисдиоксопиперазин вводят в количестве, достаточном для того, чтобы он присутствовал в ткани и предупреждал развитие поражения ткани, вызванное ядом для топоизомеразы II, или излечивал поражение ткани, вызванное ядом для топоизомеразы II.

27. Способ по п.26, где введение бисдиоксопиперазина в ткань, пораженную транссудацией яда для топоизомеразы II, осуществляется местно.

28. Способ по п.26, где введение бисдиоксопиперазина в ткань, пораженную транссудацией яда для топоизомеразы II, осуществляется системно.

29. Способ по любому из пп.26-28, где яд для топоизомеразы II выбирают из группы, состоящей из этопозида, фосфата этопозида, тенипозида, митоксантрона и м-AMSA.

30. Способ по п.29, где яд для топоизомеразы II представляет собой антрациклин.

31. Способ по п.30, где яд для топоизомеразы II выбирают из группы, состоящей из даунорубицина, доксорубицина, идарубицина и эпирубицина.

32. Способ по любому из пп.26-29, где яд для топоизомеразы II представляет собой даунорубицин.

33. Способ по любому из пп.26-29, где яд для топоизомеразы II представляет собой доксорубицин.

34. Способ по любому из пп.26-29, где яд для топоизомеразы II представляет собой идарубицин.

35. Способ по любому из пп.26-29, где яд для топоизомеразы II представляет собой эпирубицин.

36. Способ по любому из пп.26-35, где бисдиоксопиперазин вводят после лечения ядом для топоизомеразы II.

37. Способ по любому из пп.26-36, где бисдиоксопиперазин вводят после лечения ядом для топоизомеразы II и до тех пор, пока ткань содержит яд для топоизомеразы II или его активные метаболиты.

38. Способ по любому из пп.26-35, где бисдиоксопиперазин вводят после проявления случайной транссудации указанного яда для топоизомеразы II.

39. Способ по п.38, где бисдиоксопиперазин вводят после первого проявления боли, эритемы или опухания, вызванного случайной транссудацией указанного яда для топоизомеразы II.

40. Способ по п.38, где бисдиоксопиперазин вводят более чем через 24 ч после введения яда для топоизомеразы II.

41. Способ по п.38, где бисдиоксопиперазин вводят первый раз более чем через 24 ч после введения яда для топоизомеразы II.

42. Способ по любому из пп.26-35, где бисдиоксопиперазин вводят, по существу, одновременно с введением яда для топоизомеразы II.

43. Способ по любому из пп.26-35, где бисдиоксопиперазин вводят в пределах периода 3 недель после введения яда для топоизомеразы II.

44. Способ по любому из пп.26-35, где бисдиоксопиперазин вводят в пределах периода 18 ч после введения яда для топоизомеразы II.

45. Способ по любому из пп.26-35, где бисдиоксопиперазин вводят по меньшей мере в двух повторных дозировках.

46. Способ по п.45, где повторные дозировки осуществляют с интервалом 1-3 дня после введения первой дозы.

47. Способ по п.45, где повторные дозировки осуществляют с интервалом не более чем 24 ч после введения первой дозы.

48. Способ по любому из пп.26-47, где каталитический ингибитор топоизомеразы II вводят по меньшей мере в трех повторных дозировках.

49. Способ по п.48, где каталитический ингибитор топоизомеразы II вводят по меньшей мере в четырех повторных дозировках.

50. Способ по любому из пп.26-35, где бисдиоксопиперазин вводят в течение периода 12 ч после проявления или подозрения на случайную транссудацию указанного яда для топоизомеразы II.

51. Способ по любому из пп.26-35, где бисдиоксопиперазин вводят в пределах периода 12 часов после введения яда для топоизомеразы II.

52. Способ по любому из пп.26-51, где бисдиоксопиперазин вводят в количестве, достаточном для присутствия в ткани для предупреждения или лечения поражения ткани.

53. Способ по любому из пп.26-52, где бисдиоксопиперазин вводят в пределах периода 6 ч после введения яда для топоизомеразы II.

54. Способ по любому из пп.26-52, где бисдиоксопиперазин вводят в пределах периода 4 ч после введения яда для топоизомеразы II.

55. Способ по любому из пп.26-52, где бисдиоксопиперазин вводят в пределах периода 2 ч после введения яда для топоизомеразы II.

56. Способ по любому из пп.26-55, где бисдиоксопиперазин представляет собой ICRF-187 (дексразоксан).

57. Фармацевтический набор для лечения или предупреждения поражения ткани, вызванного случайной транссудацией цитотоксического яда для топоизомеразы II в месте введения яда для топоизомеразы II пациенту, подвергавшемуся лечению указанным ядом для топоизомеразы II, где указанный набор включает бисдиоксопиперазин в виде разовой дозы (разовых доз) и описание процедуры введения бисдиоксопиперазина пациенту.

58. Фармацевтический набор по п.57, где разовая доза бисдиоксопиперазина содержит фармацевтически приемлемый носитель, пригодный для местного или внутривенного введения.

59. Фармацевтический набор по любому из п.57 или 58, где бисдиоксопиперазин представляет собой ICRF-187 (дексразоксан).