Композиция для ухода за кожей, содержащая цис-9, транс-11 линолевую кислоту
Изобретение относится к области фармацевтики и касается композиции для местного применения способа лечения состояний кожи, выбранных из группы, состоящей из образования морщин, провисаний, поврежденной светом кожи, чувствительной кожи, сухой кожи, шелушащейся кожи, красной кожи, раздраженной кожи, зудящей кожи и возрастных пятен. Изобретение заключается в том, что композиция содержит: (а) конъюгированную линолевую кислоту и/или ее производные, содержащие части молекул конъюгированной линолевой кислоты, где по меньшей мере 50% по массе конъюгированной линолевой кислоты и/или частей молекул присутствует в виде цис-9 транс-11 изомера, и (b) дерматологически приемлемый носитель. Изобретение обеспечивает широкий диапазон полезных эффектов ухода за кожей, такие как разглаживание морщин и восстановление поврежденной светом кожи. 3 н. и 1 з.п. ф-лы, 8 табл.
Это изобретение относится к композициям для местного применения для нанесения на кожу человека и к их применению для улучшения состояния и внешнего вида кожи.
Предпосылки к созданию изобретения и уровень техники
Кожа подвергается разрушению из-за дерматологических расстройств, неблагоприятных воздействий окружающей среды (ветра, воздушного кондиционирования, центрального отопления) или в результате нормального процесса старения (хроностарение), которое может ускоряться под воздействием на кожу солнца (фотостарение). В последние годы чрезвычайно выросла потребность в косметических композициях и косметических методах улучшения внешнего вида и состояния кожи.
Возрастающим потребительским спросом пользуются косметические продукты “против старения”, которые лечат или отдаляют признаки хроностарения и фотостарения кожи, такие как морщины, линии, провисание, гиперпигментация и возрастные пятна.
Потребители часто ищут другие выгоды от косметических продуктов в дополнение к эффекту против старения. Общее представление о “чувствительной коже” также увеличивает потребительский спрос косметических продуктов, которые улучшают внешний вид и состояние чувствительной, сухой, грубой и/или шелушащейся кожи и ослабляют красноту, раздражение и/или зуд кожи. Потребители также хотят иметь косметические продукты, которые лечат пятна, угревую сыпь, дефекты кожи и т.п.
Косметические и дерматологические композиции для ухода за кожей, улучшающие состояние и внешний вид кожи, содержащие длинноцепочечные триглицеридные сложные эфиры полиненасыщенных незаменимых жирных кислот, свободные кислоты и их соли с щелочными металлами или аммонием, хорошо известны в технике. Например, GB 2181349 А описывает наряду с прочим композицию, содержащую триглицериды линолевой кислоты для улучшения мягкости и упругости кожи. Коммерческий продукт “Linola Fett n” от Dr. August Wolff Gmbh является доступным для лечения болезней сухой кожи и дерматозов, он содержит наряду с прочим смесь 9,11-изомеров конъюгированной линолевой кислоты.
Однако продолжает существовать потребность в альтернативных эффективных косметических композициях для местного нанесения на кожу для лечения/отдаления видимых признаков стареющей и поврежденной светом кожи, таких как морщины, линии, провисание, гиперпигментация и возрастные пятна. Особенно желательны композиции и косметические методы, которые обеспечивают другие полезные эффекты ухода за кожей в дополнение к эффекту против старения, такие как улучшение внешнего вида и состояния сухой, грубой и шелушащейся кожи и облегчение раздражения и зуда кожи.
В настоящее время неожиданно обнаружено, что эффективное лечение и профилактика нормальных состояний кожи, являющихся следствием хроностарения или фотостарения, таких как морщины, линии, провисание, гиперпигментация и возрастные пятна, и/или чувствительной, сухой, грубой, шелушащейся, красной, зудящей, раздраженной кожи, могут быть достигнуты путем нанесения на кожу косметических композиций, которые специфически обогащены конкретным изомером конъюгированной линолевой кислоты или ее производных.
Краткое описание изобретения
Согласно первому аспекту данного изобретения предложена композиция для местного применения, содержащая:
(a) конъюгированную линолевую кислоту и/или ее производные, содержащие части молекул конъюгированной линолевой кислоты, где, по меньшей мере, 50 маc.% конъюгированной линолевой кислоты и/или частей молекул присутствует в виде цис-9, транс-11 изомера, и
(b) дерматологически приемлемый носитель.
Такие композиции особенно полезны для местного нанесения на кожу человека для косметического лечения/профилактики состояний кожи, выбранных из группы, состоящей из образования морщин, провисаний, поврежденной светом кожи, чувствительной кожи, сухой кожи, грубой кожи, шелушащейся кожи, красной кожи, раздраженной кожи, зудящей кожи и возрастных пятен. Композиции также полезны для нанесения на кожу для косметической обработки пятен, угревой сыпи и дефектов или в качестве косметического продукта для ухода за кожей, который промотирует восстановление кожи и/или способствует отложению коллагена в коже.
Согласно второму аспекту данное изобретение относится к косметическому способу лечения/профилактики состояний кожи, выбранных из группы, состоящей из образования морщин, провисания, поврежденной светом кожи, чувствительной кожи, сухой кожи, грубой кожи, шелушащейся кожи, красной кожи, раздраженной кожи, зудящей кожи и возрастных пятен, способ включает нанесение на кожу композиции для местного применения, как описано выше.
В дополнительном аспекте изобретение также относится к применению конъюгированной линолевой кислоты и/или ее производных, содержащих части молекул конъюгированной линолевой кислоты, в композиции для местного применения для лечения/профилактики состояний кожи, выбранных из группы, состоящей из образования морщин, провисания, поврежденной светом кожи, чувствительной кожи, сухой кожи, грубой кожи, шелушащейся кожи, красной кожи, раздраженной кожи, зудящей кожи и возрастных пятен, где, по меньшей мере, 50 мас.% конъюгированной линолевой кислоты и/или частей молекул присутствует в виде цис-9, транс-11 изомера.
Изобретенные композиции и способы, таким образом, обеспечивают полезные эффекты против старения, результирующиеся в поддержании гладкой и мягкой кожи с улучшенной упругостью, уменьшении или замедлении появления морщин и состарившейся кожи, с улучшенным цветом кожи. Главное усовершенствование достигается во внешнем виде, текстуре и состоянии, особенно в отношении сияния, чистоты и общего молодого вида кожи. Изобретенные композиции и способы также полезны для смягчения и успокоения чувствительной, сухой, грубой, раздраженной, красной, шелушащейся и зудящей кожи. Таким образом, изобретенные композиции и способы с успехом обеспечивают широкий диапазон полезных эффектов ухода за кожей.
Термин “лечение”, как используется здесь, включает в себя уменьшение, замедление и/или предупреждение вышеупомянутых состояний кожи, таких как морщинистая, старая, поврежденная светом, сухая и/или раздраженная кожа, и, как правило, улучшение качества кожи и улучшение ее внешнего вида и текстуры за счет предотвращения или уменьшения образования морщин и увеличения эластичности, плотности, гладкости, мягкости и упругости кожи. Косметические композиции, способы и применения конъюгированной линолевой кислоты согласно изобретению могут быть полезны для лечения кожи, которая уже находится в морщинистом, состарившемся, поврежденном светом, сухом и раздраженном состоянии, или для обработки молодой кожи для предотвращения или уменьшения указанных разрушительных изменений вследствие нормального процесса старения/фотостарения.
Подробное описание изобретения
Обогащенная цис-9, транс-11 изомером конъюгированная линолевая кислота
Конъюгированная линолевая кислота (называемая здесь далее как КЛК) содержит группу пространственных и геометрических изомеров линолевой кислоты, где возможны различные конфигурации цис и транс двойных связей в положениях (6, 8), (7, 9), (8, 10), (9, 11), (10, 12) или (11, 13). Поэтому существует двадцать четыре различных изомера КЛК.
Существенным активным веществом композиций в соответствии с данным изобретением является цис-9, транс-11 (называемый здесь далее как ц9, т11) изомер. Этот конкретный изомер свободной кислоты имеет структуру (I), показанную ниже:
Изобретение также включает в себя производные свободной кислоты, которые также содержат части молекул конъюгированной линолевой кислоты. К предпочтительным производным относятся те, которые получены замещением карбоксильной группы кислоты, такие как сложные эфиры (напр., ретиниловые сложные эфиры, триглицеридные сложные эфиры, моноглицеридные сложные эфиры, диглицеридные сложные эфиры, сложные фосфоэфиры), амиды (напр., производные церамида), соли (напр., соли щелочных и щелочноземельных металлов, соли аммония), и/или те, которые получены замещением С18 углеродной цепи, такие как альфа-гидрокси- и/или бета-гидрокси-производные.
В случае триглицеридных сложноэфирных производных включены все пространственные изомеры заместителей КЛК на главной цепи глицерина. Триглицериды должны содержать, по меньшей мере, одну часть молекулы КЛК. Например, из трех этерифицируемых положений на главной цепи глицерина положения 1 и 2 могут быть этерифицированы КЛК и положение 3 другим липидом или, как альтернатива, главная цепь глицерина может быть этерифицирована КЛК в положениях 1 и 3 с другим липидом в положении 2.
Где бы ни использовался термин “конъюгированная линолевая кислота” или “КЛК” в данном описании, следует понимать, что ее производные, содержащие части молекулы КЛК, также включены в это понятие. Термин “части молекулы КЛК” относится к жирной ацильной части (частям) КЛК производного КЛК.
Под “обогащенной ц9 Т 11 изомером КЛК” подразумевается, что, по меньшей мере, 50 маc.% всех частей молекул КЛК (и/или КЛК), присутствующих в композиции, находится в форме цис-9, транс-11 изомера. Предпочтительно, по меньшей мере, 70 маc.%, наиболее предпочтительно, по меньшей мере, 90 маc.% всей КЛК и/или частей молекул КЛК, присутствующих в композиции, находится в форме ц9, т 11 изомера.
КЛК и/или ее производные, содержащие части молекулы КЛК, согласно данному изобретению (где, по меньшей мере, 50 маc.% всей КЛК и/или частей молекул КЛК, присутствующих в композиции, находится в форме цис-9, транс-11 изомера) могут быть получены согласно способу, раскрытому в WO 97/18320. Предпочтительный способ получения раскрыт в примере 1 ниже.
Активное вещество, обогащенная ц9 т11 изомером КЛК, для использования в соответствии с данным изобретением присутствует в композиции для местного применения в эффективном количестве. Обычно общее количество активного вещества находится в пределах между 0,00001 и 50 маc.% композиции. Более предпочтительно количество равно от 0,01 до 10% и наиболее предпочтительно - от 0,1 до 5%, чтобы получить максимальные полезные эффекты при минимальной стоимости.
Дерматологически приемлемый носитель
Композиция согласно изобретению также содержит дерматологически/косметически приемлемый носитель, который действует как разбавитель, диспергатор или носитель активного вещества, обогащенной ц9 т11 изомером КЛК. Носитель может содержать материалы, обычно используемые в продуктах для ухода за кожей, такие как вода, жидкие или твердые смягчающие вещества, силиконовые масла, эмульгаторы, растворители, увлажнители, загустители, порошки, пропелленты и тому подобное.
Носитель будет обычно составлять от 5 до 99,9 маc.%, предпочтительно, от 25 до 80 маc.% композиции и может, в отсутствии других косметических добавок, дополнять композицию до 100 маc.%.
Необязательные полезные для кожи материалы и косметические добавки
Помимо активного вещества, обогащенной ц9 т11 изомером КЛК, в композицию также могут быть включены другие специфические полезные для кожи активные вещества, такие как солнцезащитные вещества, осветляющие кожу агенты, агенты для искусственного загара кожи.
Носитель также может включать в себя добавки, такие как отдушки, антиоксиданты, замутнители, консерванты, красители и буферы.
Получение продукта, форма, применение и упаковка
Для получения композиции для местного применения согласно данному изобретению может быть использован обычный способ получения продуктов для ухода за кожей. Активные компоненты, как правило, вводят в дерматологически приемлемый носитель обычным способом. Активные компоненты для включения в композицию вначале подходящим образом могут быть растворены или диспергированы в части воды или другого растворителя или жидкости. Предпочтительные композиции являются эмульсиями типа масло-в-воде или вода-в-масле.
Композиция может быть в форме обычных продуктов для ухода за кожей, таких как крем, гель или лосьон или тому подобное. Композиция также может быть в форме так называемого “смываемого” продукта, например геля для ванны или душа, возможно содержащего систему доставки активных веществ для усиления прилипания к коже во время ополаскивания. Наиболее предпочтительно, продукт является “оставляемым на коже” продуктом, продуктом, который должен быть нанесен на кожу без обусловленной стадии ополаскивания вскоре после нанесения на кожу.
Композиция может быть упакована обычным образом в любую подходящую упаковку, такую как баночка, флакон, пробирка, упаковка для нанесения шариком-роликом или тому подобное.
Способ данного изобретения может быть осуществлен один или несколько раз в сутки на коже, которая требует лечения. Улучшение внешнего вида кожи обычно становится заметным через 3-6 месяцев в зависимости от состояния кожи, концентрации активных компонентов, используемых в изобретенном способе, используемого количества композиции и частоты его нанесения. Как правило, небольшое количество композиции, например от 0,1 до 5 мл, наносят на кожу из подходящего контейнера или аппликатора и размазывают на коже и/или втирают в нее с помощью рук или пальцев или подходящего устройства. Затем, необязательно, может следовать стадия ополаскивания в зависимости от того, является ли композиция “оставляемым на коже” или “смываемым” продуктом.
Для того чтобы можно было легче понять данное изобретение, приведены следующие примеры, являющиеся только иллюстративными.
ПРИМЕРЫ
Пример 1
Этот пример поясняет синтез КЛК, содержащей (1) смесь ц9, т11 изомера и т10, ц12 изомера в соотношении 1:1; (2) 93 маc.% ц9 т11 изомера от массы всех частей молекул КЛК, соединения, включенного в изобретенные композиции; (3) 80,5 мас.% т10 ц12 изомера от массы всех частей молекул КЛК, соединение за пределами объема данного изобретения.
Смешанные изомеры КЛК получают высокотемпературной щелочной обработкой сафлорового масла с образованием КЛК с равными количествами ц9, т11 и т10, ц12 изомеров. КЛК, обогащенную ц9, т11 КЛК, отделяют от смеси путем избирательной этерификации луариловым спиртом, используя в качестве катализатора Geotrichum Candidum. Обогащенную ц9, т11 КЛК подвергают гидролизу и превращают в триглицерид. После стадии этерификации и разделения оставшиеся свободные кислоты КЛК обогащают т10 ц12 КЛК.
1. Получение смешанных изомеров КЛК
“Реагент аналар” (AR) гидроксид натрия (0,6 кг) растворяли в 6 кг пропиленгликоля фармацевтического сорта путем смешивания и нагревания до 80-85°С. Образец охлаждали и добавляли 2 кг сафлорового масла. Используя стандартное экспериментальное оборудование, смесь кипятили с обратным холодильником в течение 3 часов с быстрым перемешиванием при 170°С. Реакционную смесь охлаждали до около 95°С, мешалку переводили на среднюю скорость и смесь нейтрализовали, используя 1,280 литра 35,5% хлороводородной кислоты, растворенной в деминерализованной воде (8 литров), поддерживая температуру около 90°С. Реакционной смеси давали отстояться и водную фазу сливали. Масляную фазу промывали 2×1 литр 5% солевым раствором AR и 2×1 литр деминерализованной водой при 90°С, удаляя какой-либо мыльный материал. Обогащенное КЛК масло сушили при 100°С в вакууме до слива при около 50°С и фильтровали через систему Бюхнера, содержащую фильтр Ватмана и тонкий слой вспомогательного целитного-гифло-фильтровального вещества. Масло смешанных изомеров КЛК хранили под азотом при -25°С, пока оно не потребуется. Состав масла, полученного этим способом, установлен в таблице 1 ниже:
| Таблица 1 | |
| Состав жирных кислот смеси КЛК (мас.%): | Относительная процентная доля от суммарного жирнокислотного липида |
| ц9, т11 | 34,1 (47% от суммарной КЛК} |
| т10, ц12 | 34,1 (47% от суммарной КЛК) |
| ц9, ц11 и ц10, ц12 | 2,3 |
| т9, т11т и т10, 12т | 0,7 |
| Другая КЛК | 1,4 |
| Суммарная КЛК | 72,6 |
| 16;0 | 7,0 |
| 16:1 | 0,8 |
| 18:0 | 2,5 |
| 18:1 | 13,3 |
| 18:2 (не КЛК) | 3,3 |
| Другая жирная кислота | 0,5 |
2. Получение КЛК, обогащенной ц9, т11 изомером
(I) Получение лауриловых сложных эфиров:
КЛК, полученную из сафлорового масла (2,0 кг), добавляли к 2 молярным эквивалентам лаурилового спирта (1-додеканол; 98% от Aldrich chemicals) наряду с 5,96 кг деминерализованной воды. Температуру доводили до 25°С и добавляли 1% (маc./маc.) Geotrichum Candidum (от Amano Pharmaceuticals, Япония), предварительно смешанного с небольшим количеством воды, и тщательно перемешивали. Реакцию прекращали через 44 часа. Сосуд нагревали до 80-90°С, водный слой сливали и масло промывали деминерализованной водой и сушили при 100°С в вакууме в течение 30 минут. Масло охлаждали до 50°С и фильтровали через систему Бюхнера, содержащую фильтр Ватмана и тонкий слой вспомогательного целитного-гифло-фильтровального вещества.
(II) Отделение сложных эфиров, обогащенных ц9, т11 КЛК:
Остаточный лауриловый спирт удаляли при 130°С при скорости потока 25-35 мл в минуту путем молекулярной перегонки. Остаток грубо разделяли на сложные лауриловые эфиры (обогащенные ц9, т11 КЛК) и свободные кислоты (обогащенные т10, ц12 КЛК) путем выпаривания при 158°С при скорости потока 25-35 мл в минуту. Содержание каких-либо остающихся свободных кислот в остатке сложного лаурилового эфира снижали дальнейшей перегонкой при 171°С при скорости потока 30-40 мл в минуту. 2790 г остатка сложного лаурилового эфира нейтрализовали при 90°С, используя 330 мл 4М гидроксида натрия AR, с последующим отделением масла от водной фазы, 3 раза промывали масло в деминерализованной горячей воде, дополнительно промывали 0,1М щелочью и два раза горячей водой. Образец обогащенного сложным лауриловым эфиром масла сушили, как прежде.
(III) Омыление сложных лауриловых эфиров, обогащенных ц9, т11 КЛК:
Сложные лауриловые эфиры, обогащенные ц9, т11 КЛК, омыляли, используя гидроксид натрия AR/96% пищевой спирт и повторно подкисляли, используя концентрированную хлороводородную кислоту AR. Реакционную смесь, содержащую обогащенные КЛК свободные жирные кислоты, сушили при 100°С и фильтровали, как прежде, при температуре около 50°С. Лауриловый спирт выпаривали при 132°С при скорости 25-30 мл в минуту. Чтобы удалить какой-либо остаточный луариловый спирт, свободные спирты этерифицировали жирными кислотами, присутствующими в реакционной смеси, используя липазу Mucor miehei SP392 (5%, партия lux 0110 от Novo Nordisk). Содержащие обогащенную ц9 т11 КЛК жирные кислоты отделяли от сложных лауриловых эфиров молекулярной перегонкой в вакууме при 155°С при скорости 15-20 мл в минуту.
Состав обогащенной ц9 т11 КЛК, полученной указанным способом, установлен в таблице 2 ниже:
| Таблица 2 | |
| Состав типичного препарата обогащенных ц9, т11 КЛК жирных кислот (мас.%): | Относительная процентная доля от суммарного жирнокислотного липида |
| ц9, т11 | 66,1 (93% от суммарной КЛК) |
| т10, ц12 | 4,1 |
| ц9, ц11 и ц10, ц12 | 0,3 |
| т9, т11т и т10, 12т | 0,4 |
| Другая КЛК | 0,2 |
| Суммарная КЛК | 71,1 |
| 16:0 | 1,6 |
| 16:1 | - |
| 18:0 | 0,4 |
| 18:1 | 22,3 |
| 18:2 (не КЛК) | 4,5 |
| Другая жирная кислота | 0,1 |
3. Выделение КЛК, обогащенной т10, ц12 изомером
Свободные кислоты КЛК со стадии (II) выше перегоняли снова при 160-165°С и скорости 20-30 мл/мин, чтобы уменьшить содержание сложного эфира. Содержание остаточного лаурилового спирта дополнительно уменьшали перегонкой при 131°С и скорости потока 25-30 мл/мин. Какое-либо количество остаточного лаурилового спирта уменьшали повторной этерификацией, как описано на стадии (III) выше для ц9, т11 изомеров, используя липазу Mucor miehei SP392. Какие-либо образовавшиеся сложные лауриловые эфиры удаляли перегонкой, как описано для ц9, т11 изомера, получая обогащенную т10, ц12 КЛК, состав которой представлен в таблице 3 ниже:
| Таблица 3 | |
| Состав типичного препарата обогащенных т10,ц12 КЛК жирных кислот (мас.%): | Относительная процентная доля от суммарного жирнокислотного липида |
| ц9, т11 | 8,3 |
| т10, ц12 | 53,9 (80/5% от суммарной КЛК) |
| ц9, ц11 и ц10, ц12 | 2,9 |
| т9, т11т и т10, 12т | 1,1 |
| Другая КЛК | 0,7 |
| Суммарная КЛК | 66,9 |
| 16:0 | 13,6 |
| 16:1 | - |
| 18:0 | 4,6 |
| 18:1 | 10,3 |
| 18:2 (не КЛК) | 3,1 |
| Другая жирная кислота | 1,5 |
Пример 2
Получение триглицеридов ц9,т11 КЛК
Обогащенную ц9,т11 КЛК (55 г), полученную согласно примеру 1, смешивали с 5,55 г (10,1%) глицерина (Pricerine 9083 глицерин СР от Ellis and Everards) и добавляли 3 г (приблизительно 5%) неспецифической липазы Mucor Miehei SP392 (Mucor Miehei от Novo Nordisk партия lux 0110). Смешанные материалы перемешивали в вакууме во вращающемся испарителе при 60°С со слабым током азота.
Спустя 24 часа содержание жирных кислот снижалось до 12,7%, и дополнительно добавляли 0,15 г глицерина. Через 48 часов содержание жирных кислот снижалось до 3,4%, и реакцию прекращали фильтрованием смеси через тонкий слой вспомогательного целитного супер-цел-фильтровального вещества на воронке Бюхнера, собирая масляную фазу триглицерида КЛК, состав которой приведен в таблице 4 ниже:
| Таблица 4 | |
| Состав жирных кислот триглицеридов | Относительная процентная доля от суммарного жирнокислотного липида |
| ц9, т11 | 64,9 (93% от КЛК) |
| т10, ц12 | 3,9 |
| ц9, ц11 и ц10, ц12 | 0,4 |
| т9, т1т и т10, 12т | 0,6 |
| Другая КЛК | - |
| Суммарная КЛК | 69,8 |
| 16:0 | 1,7 |
| 16:1 | 0,9 |
| 18:0 | 0,5 |
| 18:1 | 22,4 |
| 18:2 (не КЛК) | 4,5 |
| Другая жирная кислота | 0,2 |
Пример 3
Этот пример демонстрирует полезные эффекты КЛК, обогащенной ц9, т11 изомером, против старения.
Идентификация проколлагена-1 и апрегуляции декорина в коже in vivo, сопровождаемая местной обработкой ретиноевой кислотой для целей сравнения
Известно, что коллаген, доминирующий белок матрикса кожи, придает коже прочность при растяжении. Декорин является протеогликаном, который известен как важный для регулирования и коррекции отложения коллагена во внеклеточном матриксе кожи. Из предшествующего уровня техники также известно, что содержание коллагена и декорина в коже заметно снижается в стареющей и/или поврежденной светом коже. Многие исследования показали, что содержание коллагена типа I в коже снижается с возрастом и/или из-за усиленного повреждения светом (например, Lavker, R. J.Inv.Derm. (1979), 73, 79-66; Griffiths et al. N. Eng. J. med. (1993) 329, 530-535). В случае декорина было показано, что экспрессия мРНК и экспрессия протеогликана сильно снижаются в поврежденной светом коже in vitro (Bernstein et al. Lab. Invest. (1995) 72, 662-669). Снижение содержания указанных кожных белков соответственно ассоциируется со снижением прочности при растяжении кожи, что является причиной образования морщин и вялости.
Из предшествующего уровня техники хорошо известно, что ретиноевая кислота является сильным активным веществом против старения и вызывает восстановление поврежденной светом кожи. Показано, что разглаживание морщин и восстановление кожи после местной обработки кожи ретиноевой кислотой усиливаются за счет отложения и синтеза в коже нового коллагена (например, Griffiths et al. N. Eng. J. med. (1993) 329, 530-535). Широко признано, что упрочнение кожного матрикса повышением содержания коллагена в коже с помощью ретиноевой кислоты обеспечивает полезные эффекты против старения и для восстановления кожи. Проколлаген I является предшественником коллагена. Усиленное образование проколлагена I в ответ на нанесение испытуемого соединения является признаком повышенного содержания коллагена.
Были укомплектованы две группы женщин с одинаковыми или близкими степенями повреждений светом, от слабого до умеренного, на внешней стороне каждого предплечья. Их обеспечивали 0,05% ретиноевой кислотой в увлажняющей основе (Retinova®) и также сочетающимся по цвету увлажняющим кремом с подобными сенсорными характеристиками (лосьон Dermacare®), но без активных ингредиентов в качестве плацебо-контроля. Каждой участнице из двух групп наносили Retinova® на внешнюю часть одного предплечья и плацебо (Dermacare®) на внешнюю часть другого предплечья. Группе 1 наносили продукты ежедневно на внешние части их предплечий в течение 14 недель и группе 2 наносили продукты ежедневно на внешние части их предплечий в течение 28 недель. В конце исследования с обработанных участков каждого предплечья с помощью фермата брали 2 пробы толщиной 4 мм для биопсии. Иммуногистохимический анализ биоптата ткани, взятой у участниц, проводили для идентификации влияния обработки ретиноевой кислотой на экспрессию компонентов внеклеточного матрикса кожи, декорина и проколлагена-1 в сравнении с обработанными плацебо предплечьями. Процедуру осуществляли следующим образом:
МАТЕРИАЛЫ
Буфер разбавления антитела для парафиновых срезов был приготовлен из трис-забуференного солевого раствора (TBS), 3% альбумина бычьей сыворотки (BSA), 0,05% тритона Х-100 и 0,05% азида натрия. Первичные антитела для проколлагена-1 (аминоконцевой) получали от Chemicon International Inc. (cat# MAB 1912, крысиный IgGI) и использовали на парафиновых срезах при разбавлении 1:800 в течение ночи при 4°С после того, как срез был предварительно обработан трипсином (0,5 мг/мл, 25 мин, 37°С). Первичные антитела для декорина, полученные от Biogenesis (кроличьи поликлональные), использовали на парафиновых срезах при разбавлении 1:800 в течение ночи при 4°С.
Антикрысиные биотинилированные вторичные антитела, полученные от DAKO (cat# Е0468, кроличьи поликлональные), наносили на парафиновые срезы при разбавлении 1:400. Антикроличьи биотинилированные вторичные антитела, полученные от Amersham (cat# RPN 1004, обезьяньи поликлональные), наносили на парафиновые срезы при разбавлении 1:400. Щелочную фосфатазу, конъюгированную со стрептовидином, получали от Zymed (cat# 43-4322) и использовали при концентрации 1:2500. Быстрый Красный хромоген получали от DAKO (cat# K597). Гемотоксилин gills #3 для контрастирующего окрашивания ядер получали от Sigma (cat# GHS-3), фильтровали и использовали без разбавления. Трипсин получали от Sigma (cat# T-7186) и предметные стекла монтировали с глицергелем от DAKO (cat# С563).
МЕТОДЫ
Парафиновые срезы ткани для биопсии монтировали на покрытых силаном предметных стеклах и сушили в течение 18 часов при 55°С. Предметные стекла освобождали от парафина ксилолом и спиртом и переносили в воду и затем переносили в TBS. Перо DAKO® использовали, чтобы обвести кружком срезы. Срезы обрабатывали для восстановления антигена, используя трипсин, где это необходимо, как указано для каждого антитела. Когда восстановление антигена было необходимо, предметные стекла инкубировали в течение 25 минут при 35°С с трипсином при 0,5 мг/мл (Sigma cat# T-7186). После этого протазу смывали (2×2 минуты) TBS. После восстановления антигена, если необходимо, или иначе непосредственно после очерчивания кружком срезов неспецифическое связывание антитела блокировали 5% растворами сыворотки вторичного антитела хозяина в TBS/0,5% BSA/0,1% азид натрия в качестве блокирующего раствора, по меньшей мере, в течение 20 мин при комнатной температуре во влажной камере. Избыток блокирующего раствора сливали, но срезам не позволяли высохнуть. Срезы затем инкубировали с первичным антителом (соответствующим образом разбавленным, как указано выше) во влажной камере в течение ночи при 4°С. Антитело затем сливали со срезов, не позволяя им высохнуть. Предметные стекла затем промывали TBS, чтобы удалить несвязанное антитело - одноминутное промывание с последующими тремя пятиминутными промываниями - и затем инкубировали с соответствующим вторичным антителом (соответствующим образом разбавленным, как указано выше) во влажной камере в течение 1 часа при комнатной температуре. Раствор антитела затем сливали с предметных стекол, не позволяя срезу высохнуть. Предметные стекла промывали в TBS, одноминутное промывание с последующими 4×5 мин промываниями, чтобы удалить несвязанное вторичное антитело. В случае биотинилированного вторичного антитела срезы затем инкубировали с конъюгатом стрептовидина в течение 45 мин при 37°С и затем промывали в TBS, чтобы удалить несвязанный конъюгат стрептовидина. Добавляли хромоген и наблюдали за окрашиванием, чтобы избежать чрезмерного окрашивания. Затем срезы подвергали контрастирующему окрашиванию и готовили для исследования под микроскопом.
Различия в экспрессии проколлагена-I и декорина между участками, обработанными ретиноевой кислотой (Retinova®) и плацебо (Dermacare®), определяли путем визуальной оценки иммуногистохимически окрашенных срезов с помощью световой микроскопии.
Указанный анализ идентифицировал заметную апрегуляцию и проколлагена-1, и декорина в поврежденной светом коже после местного применения ретиноевой кислоты (Retinova®), как показано в таблице 5 ниже.
| Таблица 5 | |||
| Влияние обработки ретиноевой кислотой на экспрессию проколлагена I и декорина в коже in vivo | |||
| Общее число участников | Число участников, показавших заметное увеличение экспрессии проколлагена-I | Число участников, показавших заметное увеличение экспрессии декорина | |
| Группа 1 после 14 недель | 16 | 9 | 10 |
| Группа 2 после 28 недель | 15 | 10 | 15 |
Компоненты внеклеточного матрикса, проколлаген I и декорин, являются, таким образом, ясно индентифицируемыми показателями вызываемого ретиноевой кислотой восстановления кожи.
Процедура измерения синтеза декорина в фибробластах кожи человека
Получение кондиционированной кожными фибробластами среды
Первичные фибробласты крайней плоти человека при пересеве 2 (Р2) высевали на 12-луночные планшеты при 10000 клеток/см2 и выдерживали в течение 24 часов в атмосфере 5% диоксида углерода и 4% кислорода в модифицированной по способу Дульбекко среде Игла (DMEM) с добавлением 10% фетальной телячьей сыворотки. После указанного периода времени клетки промывали DMEM, не содержащей сыворотки, и затем инкубировали в свежей DMEM, не содержащей сыворотки, дополнительно в течение 60 часов. Монослои фибробластов затем промывали снова DMEM, не содержащей сыворотки. Испытуемые реагенты и контроли носителя добавляли к клеткам в трех экземплярах до конечного объема 0,4 мл/лунка свежей DMEM, не содержащей сыворотки, и инкубировали в течение следующих 24 часов. Эту кондиционированную фибробластами среду либо анализировали сразу же, либо мгновенно замораживали в жидком азоте и хранили при -70°С для будущего анализа. Клетки затем подсчитывали и данные дот-блот анализа впоследствии нормализовали по числу клеток.
Дот-блот анализ белка декорина в кондиционированной кожными фибробластами среде
Пробы кондиционированной среды от кожных фибробластов, обработанных носителем (в качестве контроля) или испытуемыми реагентами, дополняли 20 мМ дитиотреитола (1:10 разбавление 200 мМ исходного раствора) и 0,1% додецилсульфатом натрия (1:100 разбавление 10% исходного раствора), хорошо перемешивали и затем инкубировали при 75°С в течение 2 минут. Стандарт для анализа получали путем последовательного разбавления неразбавленной кондиционированной фибробластами среды от фибробластов, высеянных при 10000 клеток/см2 в склянку 175 см2 и выдержанных в DMEM, не содержащей сыворотки, как описано выше. Пробы для анализа затем наносили в трех экземплярах на предварительно смоченный лист блоттинг-мембраны Immobilon-P, используя 96-луночный био-дот аппарат от Bio-Rad, как описано в руководстве изготовителя. Приблизительно 200 мкл среды наносили в каждую лунку. Среде позволяли фильтроваться через мембрану под действием силы тяжести (30 минут), после чего мембрану промывали дважды PBS (200 мкл). Используемому для промываний PBS позволяли фильтроваться через мембрану под действием силы тяжести (2×15 минут). Био-дот аппарат затем присоединяли к вакуумной линии и третье и окончательное промывание PBS проводили под вакуумом. Аппарат разбирали, мембрану удаляли и быстро разрезали, как требуется, перед тем как поместить в блокирующий буфер на ночь при 4°С. Мембраны, подготовленные для анализа декорина, блокировали 3% (маc./об.) BSA/0,1% (об./об.) Твин 20 в PBS. На следующий день мембраны исследовали нанесением разбавления 1:10000 первичных антител к декорину человека (кроличьи поликлональные, Biogenesis) на 2 часа при комнатной температуре. Затем мембраны промывали TBS/0,05% Твин 20 (3×5 минут) и потом инкубировали с разбавлением 1:1000 фрагментов F(ab/)2 антикролик (Amersham) в течение 1 часа при комнатной температуре. После этого полоски Immobilon снова промывали TBS/Твин 20 (3×5 минут) перед тем, как позволить им высохнуть на воздухе при комнатной температуре. Высушенные мембраны обертывали целофаном и подвергали действию молекулярного динамического накопительного фосфоресцентного экрана в течение 16-18 часов. В конце этого времени экспонированный экран сканировали фосфоресцентным формирователем изображения (Molecular Dynamics Phosphorimager SF), используя программное обеспечение ImageQuant™. Дог-интенсивность оценивали анализом изображения с помощью компьютера, используя инструменты количественной оценки в ImageQuant™, стандартизированные по числу клеток, и влияние различных испытуемых реагентов на синтез декорина определяли по отношению к величине обработанного носителем контроля, принятой за 100 арбитражных единиц.
ИСПЫТАНИЯ
В таблице 6 ниже представлены агенты, которые оценены по их влияниям на синтез декорина в кожных фибробластах человека, и количества, в которых они были нанесены. Чтобы нормализовать результаты, влияния испытуемых веществ определяли по отношению к величине обработанного носителем контроля, принятой за 100 арбитражных единиц.
“КЛК ц9, т11” в таблице относится к КЛК, где 93 маc.% всей КЛК составляет ц9, т11 изомер, т.е. активный агент, который входит в объем данного изобретения. Его получают, как описано в примере 1 выше.
“КЛК т10, ц12” в таблице относится к КЛК, где 80,5 мас.% всей КЛК составляет т10, ц12 изомер, имеющий структуру 2, см. ниже:
Указанный агент не входит в объем данного изобретения. Его получают, как описано в примере 1.
“Смесь КЛК” в таблице относится к смеси ц9, т11 изомера и т10, ц12 изомера в соотношении 1:1, в которой присутствует по 47% каждого изомера от массы всей КЛК. Этот агент не входит в объем данного изобретения. Его получают, как описано в примере 1.
Исследования, осуществляемые с “КЛК т10,ц12” и “смесью КЛК”, проводили в целях сравнения.
Также для сравнения проводили исследование с ретиноевой кислотой, чтобы оценить ее влияние на синтез декорина в кожных фибробластах человека. Концентрации реагентов, используемые в исследованиях, не влияют на жизнеспособность клеток.
| Таблица 6 | |
| Эффект, оказываемый на синтез декорина фибробластами в ответ на обработку различными испытуемыми соединениями | |
| Обработка | Декорин |
| Контроль (носитель) | 100 |
| КЛК ц9, т11 (10 мкМ) | 151,6±22,4 (р=0,01, n=3) |
| Смесь КЛК (10 мкМ) | 81,5±4,3 |
| КЛК т10, ц12 (10 мкМ) | 99,3±24,8 |
Результаты в таблице 6 показывают, что обогащенная ц9, т11 изомером КЛК заметно способствует синтезу декорина в кожных фибробластах человека по сравнению с контролем и по сравнению с т10, ц12 КЛК и смесью КЛК.
Содержание декорина в коже ассоциируется с улучшенным состоянием и внешним видом кожи. Увеличение содержания декорина в коже важно для регулируемого и правильного отложения коллагена в коже, с которым связывают многие полезные кожные эффекты, такие как разглаживание морщин и восстановление поврежденной светом кожи.
Сравнительное исследование с ретиноевой кислотой (1 мкм) показало апрегуляцию декорина 138±14,0 (р=0,035, n=4), как определено по отношению к величине обработанного носителем контроля, принятой за 100 арбитражных единиц. Неожиданно эти данные, таким образом, дополнительно показывают, что величина апрегуляции синтеза декорина в кожных фибробластах человека под влиянием ц9, т11 изомера конъюгированной линолевой кислоты превышает уровень, достигаемый с помощью восстанавливающего кожу активного вещества против старения - ретиноевой кислоты.
Пример 4
Этот пример измеряет влияние различных испытуемых соединений на токсичность для кератиноцитов додецилсульфата натрия (SDS).
Анализ жизнеспособности кератиноцитов при воздействии SDS
Методология
Кератиноциты выращивали в 96-луночных планшетах до слияния приблизительно 80% в среде для выращивания кератиноцитов (KGM), которую затем заменяли KGM без гидрокортизона на 24-48 часов. Затем клетки обрабатывали додецилсульфатом натрия (SDS) в такой концентрации, которая будет давать жизнеспособность клеток приблизительно 50% (5 μ /мл). К клеткам затем добавляли дозы испытуемых соединений, которые использовались в концентрациях, приведенных в таблице 7 ниже. Испытуемые соединения “ц9, т11 КЛК” и “т10, ц12 КЛК” в таблице 7 были такими же, как агенты, описанные выше в примере 3. Контроль не содержал никаких испытуемых соединений. После инкубирования в течение 24 часов среду удаляли и жизнеспособность определяли методом нейтрального красного. По этому методу клетки инкубировали в течение 3 часов в KGM, содержащей 25 мкг/мл нейтрального красного, после чего среду удаляли и клетки затем экстрагировали 1 мл 1% (об./об.) уксусной кислоты, 50% (об./об.) этанола в течение 30 минут. Оптическую плотность экстракта определяли при 562 нм и жизнеспособность оценивали по сравнению с лунками, которые не содержали ни SDS, ни испытуемых соединений. Полученные результаты суммированы в таблице 7 ниже:
| Таблица 7 | |||
| Испытуемое соединение | % от SDS | 3d | n |
| (концентрация) | контроль среднее | ||
| Контроль SDS 5 мкг/мл | 100,0 | 16,6 | 8 |
| 50 мкМ КЛК ц9, т11 + SDS 5 мкг/мл | 134,8 | 27,2 | 8 |
| 50 мкМ КЛК т10, ц12 + SDS 5 мкг/мл | 69,2 | 16,3 | 8 |
Результаты выражены как % от величины жизнеспособности при 5 мкг/мл SDS.
ц9, т11 КЛК (агент, входящий в объем данного изобретения) заметно повышали жизнеспособность по сравнению с величиной при 5 мкг/мл SDS, как определено 1 методом ANOVA с многократным сравнением по методу Student-Neumann-Kuels, р<0,05, т10, ц12 КЛК (агент вне объема данного изобретения) не повышали жизнеспособность клеток по сравнению с контролем SDS.
Эта методология показала, что токсичность для кератиноцитов раздражителя относится к раздражающему эффекту агента in vivo. (Lawrence, JN, Starkey, S., Dickson, FM & Benford, DJ. Use of human and rat keratinocyte cultures to assess skin irritation potential. Toxicol. In Vitro. 10, 331-340 (1996)). Таким образом, здесь показано, что обработка “ц9, т11 КЛК” значительно снижает токсичные воздействия SDS на кератиноциты и, следовательно, она имеет антираздражающую функциональность, в то время как “т10, ц12 КЛК” не изменяет заметно токсичность SDS на этих клетках и поэтому не имеет антираздражающего действия.
Пример 5
Этот пример иллюстрирует способность испытуемых соединений индуцировать дифференцировку кератиноцитов, дифференцировка является частью процесса, который является фундаментальным в формировании зрелого рогового слоя. Зрелый роговой слой важен для барьерной функции кожи и помогает предохранить кожу от обезвоживания и огрубления. Образование ороговевшей оболочки (СЕ) и активность фермента трансглутаминазы измеряли как показатели дифференцировки. Ороговевшая оболочка ответственна за форму, прочность и структурную целостность корнеоцитов внутри рогового слоя, и фермент трансглутаминаза является существенным для правильного формирования ороговевшей оболочки.
Анализ дифференцировки кератиноцитов
Методологии
Клеточная культура
Эпидермис человека изолировали от ювинильной крайней плоти, используя обычные методики, и выращивали в не содержащей сыворотку среде для выращивания кератиноцитов (“KGM”; Clonetics). Кератиноциты третьего пассажа, высеянные при 4000 клеток/лунка в 96-луночные планшеты (Costar), использовали во всех исследованиях. Кератиноциты выращивали в течение трех суток при 37°С перед тем, как обработать в KGM, содержащей 30 мкМ Са2+. Клетки обрабатывали либо испытуемыми соединениями, либо одним носителем (диметилсульфоксид) за 48 часов до сбора. Испытуемые соединения “ц9 т11 КЛК” и “т10 ц12 КЛК” в таблице 8 являются такими же, как агенты, описанные выше в примере 3.
Количественный анализ ДНК
После обработки клетки промывали 3 раза в забуференном фосфатом солевом растворе (PBS) и затем экстрагировали в 100 мкл Тритона Х-100, 50 мМ трис/НСl рН 8,0, содержащем 20 мкл пепстатина и 20 мкМ лейпептина. (Буфер экстракции ДНК) 15 мкл этого экстракта анализировали на содержание ДНК, используя набор для анализа Pico Green (Molecular Probes, 4849 Pichford Avenue, Eugene, Oregon, USA) точно, как описано производителями.
Специфическая активность трансглутаминазы (тгазы)
После обработки буфером экстракции ДНК клетки быстро промывали в свежем буфере и затем инкубировали с флуоресцентным субстратом тгазы кадаверином Texas Red (молекулярные зонды). Клетки обрабатывали в течение 16 часов при 37°С в 15 мкМ кадаверине Texas Red в 50 мМ трис/HCl рН 8,0, 150 мМ NaCl, содержащем 5 мМ дитиотреитола, 50 мМ CaCl2, промывали 2 раза в дистиллированной воде и измеряли флуоресценцию, используя флуорометр Cytofluor с возбуждением при 590 нм и эмиссией при 645 нм.
Активность тгазы выражали в единицах флуоресценции/нг ДНК.
Формирование ороговевшей оболочки
Формирование ороговевшей оболочки (СЕ) оценивали путем определения количества нерастворимого в SDS белка, остающегося в лунках 24-луночного планшета для культивирования кератиноцитов. После удаления буфера экстракции Тритон (описано выше) лунки промывали буфером карбонат/бикарбонат (Sigma) рН 9,6. Каждую лунку затем инкубировали с N-гидроксисукцинамидом, связанным с биотином (источник, растворенный при 10 мг/мл в ДМСО) в карбонат-бикарбонатном буфере при 0,1 мг/мл (200 мкл/лунка). Планшеты инкубировали при взбалтывании в течение 60 минут при комнатной температуре. Добавляли 50 мкл/лунка 10% SDS, 100 мМ DTT и планшеты инкубировали при 60°С дополнительно 60 минут. Оболочки фильтровали (с промыванием в ТВS-Твин) на мембране PVDF (предварительно блокированной в TBS 0,5% Твин), используя дот-блот аппарат. Мембрану осторожно зондировали стрептавидином-HRP (Zymed), разбавленным 1/1000, в течение 60 минут при комнатной температуре, промывали (ТВS-Твин) и инкубировали с субстратом ECL (Pierce) в течение 2 минут. Мембраны обертывали в “липкую пленку” и экспонировали к рентгеновской пленке для визуализации белка. Интенсивность пятна количественно оценивали путем сканирования и анализа Phoretix. Результаты суммированы в таблице 8 ниже. Результаты выражены как процентная доля от контрольной величины для каждого измеренного параметра.
| Таблица 8 | ||||||
| Испытуемое соединение (концентрация) | Активность тгазы (% контроля) | sd | n | Формирование СЕ (% контроля) | sd | n |
| КОНТРОЛЬ | 100,0 | 15 | 6 | 100 | 30 | 6 |
| 10 мкМ “ц9 т11 КЛК” | 166* | 20 | 6 | 515* | 28 | 6 |
| 10 мкМ “т10 ц12 КЛК” | 101 | 14 | 6 | 107 | 43 | 6 |
| *р <0,01 |
“ц9 т 11 КЛК” (агент, входящий в объем данного изобретения) заметно (р<0,01) усиливал активность трансглутаминазы и формирование СЕ по сравнению с контролем (обработанным только ДМСО). “т10 ц12 КЛК” (агент вне объема данного изобретения) не увеличивал ни один из этих двух параметров дифференцировки кератиноцитов по сравнению с контролем.
Таким образом, показано, что обработка “ц9 т11 КЛК” заметно усиливает дифференцировку кератиноцитов in vitro и, следовательно, она имеет функциональность усовершенствования дифференцировки, тогда как “т10 ц12 КЛК не изменяет заметно состояния дифференцировки кератиноцитов и поэтому не имеет эффекта усовершенствования дифференцировки. “ц9 т11 КЛК” соответственно применима для предотвращения состояний обезвоженной и огрубевшей кожи и для смягчения и увлажнения кожи, уже находящейся в обезвоженном и огрубевшем состоянии.
Пример 6
Рецептура ниже описывает крем типа масло-в-воде, включающий в себя изобретенную композицию, которая является подходящей для способов и применений в соответствии с данным изобретением. Указанные процентные доли даны по массе композиции, если не оговорено иного.
| мас.% | |
| Минеральное масло | 4 |
| Триглицерид КЛК (93% ц9, т11 изомера по массе всех частей молекул КЛК), полученный согласно примеру 2 | 1,15 |
| Brij 56* | 4 |
| Alfol 16RD* | 4 |
| Триэтаноламин | 0,75 |
| Бутан-1,3-диол | 3 |
| Ксантановая камедь | 0,3 |
| Отдушка | qs |
| Бутилированный гидрокситолуол | 0,01 |
| Вода | до 100 |
| * Brij 56 является цетиловым спиртом РОЕ (10) | |
| Alfol 16RD является цетиловым спиртом |
Пример 7
Рецептура ниже описывает эмульсию типа масло-в-воде, включающую в себя изобретенную композицию, которая является подходящей для способов и случаев в соответствии с данным изобретением. Указанные процентные доли даны по массе композиции, если не оговорено иного.
| маc.% | |
| Полностью гидрогенизированное кокосовое масло | 9,9 |
| Триглицерид КЛК (93% ц9, т11 изомера по массе всех частей молекул КЛК), полученный согласно примеру 2 | 2 |
| Brij 92* | 5 |
| Бентон 38 | 0,5 |
| MgSO4 7H2 | 0,5 |
| Бутилированный гидрокситолуол | 0,01 |
| Отдушка | qs |
| Вода | до 100 |
| * Brij 92 является простым олеиловым эфиром полиоксиэтилена (2) |
Обе указанные композиции для местного применения из примеров 6 и 7 обеспечивают эффективную косметическую обработку для улучшения внешнего вида морщинистой, старой, поврежденной светом и/или раздраженной кожи, когда их наносят на кожу, состояние которой ухудшено из-за старения или фотостарения, или когда их наносят на молодую кожу, чтобы помочь предотвращению или отдалению таких разрушительных изменений. Композиции могут быть переработаны обычным образом.
1. Местная композиция для лечения и/или профилактики состояний кожи, содержащая конъюгированную линолевую кислоту и/или ее производные, содержащие части молекул конъюгированной линолевой кислоты, где, по меньшей мере, 50 мас.% конъюгированной линолевой кислоты и частей молекул присутствует в виде цис-9, транс-11 изомера; одну или несколько косметических добавок, выбранных из отдушек, антиоксидантов, замутнителей, консервантов, красителей или буферов; и дерматологически приемлемый носитель.
2. Композиция по п.1, содержащая от 0,00001 до 10 мас.%, предпочтительно 0,01 до 10 мас.% указанной конъюгированной линолевой кислоты и/или ее производных.
3. Способ лечения и/или профилактики состояний кожи, выбранных из группы, состоящей из образования морщин, провисаний, поврежденной светом кожи, сухой кожи, огрубевшей кожи, шелушащейся кожи, раздраженной кожи, зудящей кожи, чувствительной кожи и/или возрастных пятен, включающий нанесение на кожу композиции для местного применения по п.1 или 2.
4. Способ лечения и/или профилактики состояний кожи, выбранных из группы, состоящей из образования морщин, провисаний, поврежденной светом кожи, сухой кожи, огрубевшей кожи, шелушащейся кожи, раздраженной кожи, чувствительной кожи, зудящей кожи и/или возрастных пятен, где способ включает нанесение на кожу местной композиции, содержащей линолевую кислоту и/или ее производные, включающие части молекул конъюгированной линолевой кислоты, где, по меньшей мере, 50 мас.% конъюгированной линолевой кислоты и частей молекул присутствует в виде цис-9, транс-11 изомера.
