Способ разделения донорской крови на компоненты

Изобретение относится к медицине и, в частности, к заготовке и обработке донорской крови. Способ включает центрифугирование цельной крови, отделение компонентов, фильтрование эритроцитарной массы и плазмы с сохранением их в стерильных условиях. При этом отделяют лейкотромбоцитарный слой, вначале фильтруют плазму, оставляют часть плазмы в фильтре, и через фильтр, заполненный плазмой, фильтруют эритроцитарную массу; остаточную плазму отделяют до начала прохождения эритроцитов и объединяют с отфильтрованной плазмой. Способ обеспечивает сохранение и отбор лейкотромбоцитарного слоя при снижении затрат на фильтрование и уменьшение потерь компонентов крови. 1 табл.

 

Изобретение относится к медицине, а именно к заготовке донорской крови, и, в частности, к разделению донорской крови на компоненты и получению обедненной лейкоцитами плазмы, эритроцитарной массы, а также лейкотромбоцитарной массы.

Разделение донорской крови на компоненты вызвано необходимостью отделения лейкоцитов и тромбоцитов, способных вызвать у реципиента побочные реакции и осложнения - температурную реакцию, аллоиммунизацию, рефрактерность к трансфузиям тромбоцитов, перенос реципиенту ассоциированных с белыми клетками вирусов, таких как цитомегаловирус и т.п.Международный стандарт допускает остаточное содержание лейкоцитов, не превышающее 10⁶ белых клеток в дозе эритромассы и менее 10⁵ в дозе плазмы. С другой стороны, лейкотромбоцитарный слой является ценной фракцией: из лейкоцитов может вырабатываться интерферон, а выделенные тромбоциты применяются при лечении тромбоцитопении и тромбоцитопатии.

Известен способ разделения донорской крови на компоненты, включающий разделение цельной крови центрифугированием на плазму, лейкотромбоцитарный слой и эритроцитарную массу и фильтрование компонентов крови через отдельные лейкофильтры, специально предназначенные для каждого компонента [Masse M., Transfusion Clinique et Biologique, 2001, v.8, р.297-302].

Указанный способ позволяет отделить и использовать все компоненты крови, в том числе лейкотромбоцитарный слой; однако это дорогой способ, т.к. лейкофильтры, применяющиеся для крови, дороги вообще, а специальные фильтры дороги особенно. Таким способом перерабатывается только небольшая часть заготовленной донорской крови и в основном со специальной целью выделения тромбоконцентратов, обедненных лейкоцитами.

Наиболее близким по совокупности существенных признаков к заявляемому способу является способ разделения донорской крови на компоненты, включающий фильтрование цельной крови для максимального освобождения ее от лейкоцитов, затем разделение ее центрифугированием на эритроцитарную массу и плазму и вторичное фильтрование отделенной плазмы [Riggert J. et al. Vox Sang., 1995, v.69, р.201-205].

Дважды профильтрованная плазма содержит 10³-10⁴ лейкоцитов в литре, эритроцитарная масса содержит 10⁶ лейкоцитов в литре и менее. Однако способ имеет тот недостаток, что лейкотромбоцитарная фракция остается на фильтре и полностью теряется возможность получения ценного компонента крови - тромбоконцентрата.

Технический результат, на достижение которого направлено заявляемое изобретение, заключается в сохранении и отборе лейкотромбоцитарного слоя при снижении затрат на фильтрование и уменьшении потерь компонентов крови.

Указанный технический результат достигается тем, что в способе разделения донорской крови на компоненты, включающем центрифугирование цельной крови, отделение компонентов, фильтрование эритроцитарной массы и плазмы с последующим их сохранением в стерильном состоянии, центрифугированием дополнительно отделяют лейкотромбоцитарный слой, плазму фильтруют и через фильтр, заполненный плазмой, фильтруют эритроцитарную массу, при этом вначале вытесняют остаточную плазму и объединяют ее с отфильтрованной плазмой.

Заявляемый способ осуществляется следующим образом.

В контейнер, соединенный трубками с двумя контейнерами-сателлитами, отбирается доза донорской крови, консервированной на "Глюгицире" или другом гемоконсерванте. Контейнер с кровью помещают в центрифугу и центрифугируют кровь для разделения ее на компоненты. С помощью гемоэкстракгора в один контейнер-сателлит переводится плазма, в другой контейнер-сателлит - лейкотромбоцитарный слой. Контейнер-сателлит с лейкотромбоцитарным слоем в стерильных условиях отсоединяют и герметизируют; лейкотромбоцитарная масса направляется на обработку и использование.

Трубка, соединяющая контейнер с эритроцитарной массой и контейнер с плазмой, перекрывается зажимом. Контейнер с плазмой в стерильных условиях соединяют с фильтровальным устройством. Полость корпуса фильтра заполняют плазмой, вытесняя из него воздух в соединенный с корпусом фильтра микроконтейнер для воздуха.

Плазма фильтруется в контейнер для профильтрованной плазмы под давлением примерно 15 см Н₂О. Отфильтрованная плазма собирается в контейнер. В корпусе фильтра остается примерно 1/10 часть плазмы.

Эритроцитарная масса переводится в контейнер-сателлит, в котором раньше была плазма, и затем из этого контейнера поступает в фильтровальный узел, заполненный плазмой. При фильтрации эритроцитов вначале в приемный контейнер поступает остаточная плазма, которую (без примеси эритроцитов) переводят в контейнер с профильтрованной плазмой. Эритроциты затем фильтруются в отдельный контейнер. Фильтровальный узел затем продувают воздухом из емкости с воздухом в контейнер с профильтрованными эритроцитами. Контейнер с эритроцитарной массой герметизируется в стерильных условиях.

В заявляемом способе могут быть использованы фильтры из целлюлозы (хлопка или древесины), такие как фильтры Imngard lg-500 фирмы Terumo, Япония, Erypur голландской фирмы Organon Teknika B.V. или Miropore фирмы Miromed, Италия. Могут быть использованы фильтры, выполненные из синтетического волокна, полиэфирного, полипропиленового и др. Это фильтры Leukoseize-2 фирмы Dideco, Италия, Sepacele R-500 фирмы Asahi, Япония, и Cellselect FR голландской фирмы NPBJ, Pall R.C. 100 фирмы Pall Biomedical Prod. Corp; США и др.

Далее заявляемый способ иллюстрируется примерами.

ПРИМЕР 1

491 г цельной донорской крови, консервированной на консерванте Глюгицире со сроком хранения при 4°С 1 сутки, помещенной в контейнер, связанный с двумя контейнерами-сателлитами, центрифугируют при скорости 900g в течение 15 мин; торможение центрифуги 9 мин. В один контейнер-сателлит переводится 237 г образовавшейся (отделений) плазмы; во второй контейнер-сателлит переводят 29 г лейкотромбослоя. Контейнер с лейкотромбослоем в стерильных условиях герметизируют и отсоединяют. Плазму фильтруют через фильтр.

Скорость фильтрования 188,6 мл/мин, количество профильтрованной плазмы 220 г.

Первоначальное количество отделенной эритроцитарной массы составляет 225 г. Эритроцитарная масса фильтруется через фильтрующий узел, заполненный плазмой. При фильтровании эритроцитов вначале поступает профильтрованная плазма в количестве 20 г, которую переводят в контейнер с профильтрованной плазмой. Затем начинает поступать профильтрованная эритроцитарная масса. После фильтрования и продувки системы собирается 210 г эритроцитарной массы.

Потери плазмы составили (237-220)=17 г или 7,2%; потери эритроцитарной массы составили (226-210)=15 г или 6,7%.

Исходное количество лейкоцитов в эритроцитарной массе после удаления лейкотромбослоя составило 5,47·10⁹ в литре. Количество лейкоцитов в эритроцитарной массе после фильтрования составило 2·10⁶ в литре. В дозе (200 мл) эритроцитарной массы количество лейкоцитов составляет 4·10⁵.

Количество лейкоцитов в плазме после фильтрования 8·10⁴ в литре, в дозе плазмы (300 мл) - 2,6·10⁴ лейкоцитов.

Таблица
Характеристика эритроцитарной массы до и после фильтрования
Показатели	Морфологич. индекс, ед.	Гематокрит, л/л	Свободный гемоглобин, г/л	Процент гемолиза
До фильтрования	100	0,783	0,090	0,010
После фильтрования	100	0,693	0,033	0,006

Из таблицы видно, что заявляемый способ разделения донорской крови не снижает качества эритроцитарной массы. При этом процент гемолиза (разрушения) не только не повышается, но снижается.

Полученная заявляемым способом эритроцитарная масса сохраняет морфо-функциональные свойства при хранении до 21 суток при +4°С:

- морфологический индекс - 81.4 ед;

- гематокрит - 70,0% (0,70 л/л);

- содержание свободного гемоглобина - 0,21 г/л;

- процент гемолиза - 0,037;

- содержание АТФ (по отношению к исходному) - 73,3%.

Полученная эритроцитарная масса пригодна для трансфузии, а плазма пригодна для замораживания и переработки на препараты (альбумин, факторы свертывания крови, в том числе термолабильные).

Преимуществом заявляемого способа является также возможность получения двух обедненных лейкоцитами компонентов с использованием одного фильтрующего устройства.

Способ разделения донорской крови на компоненты, включающий центрифугирование цельной крови, отделение компонентов, фильтрование эритроцитарной массы и плазмы через один фильтр с последующим их сохранением в стерильном состоянии, отличающийся тем, что центрифугированием дополнительно отделяют лейкотромбоцитарный слой, плазму фильтруют, оставляя часть плазмы в фильтре, и через фильтр, заполненный плазмой, фильтруют эритроцитарную массу, при этом вначале отделяют остаточную плазму и объединяют ее с отфильтрованной плазмой.