Способ выделения из крови больных сахарным диабетом гельминтов, личинок гельминтов в нативной форме
Владельцы патента RU 2287814:
Логачев Михаил Федорович (RU)
Иванова Оксана Ивановна (RU)
Кочергина Елена Сергеевна (RU)
Балугян Ружена Шаликовна (RU)
Сеид-Гусейнов Алексей Асадович (RU)
Микулин Александр Евгеньевич (RU)
Изобретение относится к области медицины. Препараты для микроскопирования готовят из обогащенной глюкозой надосадочной жидкости в результате смешивания пробы крови с антикоагулянтом К3-ЭДТА, добавляют концентрированный раствор глюкозы не более 10% от объема пробы крови для создания в пробе крови концентрации глюкозы 50-100 ммоль/л, инкубируют пробы крови в термостате при 37°С в течение 15 минут, из верхнего слоя надосадочной жидкости отбирают 10-15 мкл и переносят на предметное стекло, покрывают покровным стеклом и проводят микроскопирование с объективами 10 и 40. Изобретение позволяет выявить паразитов в 100% случаях. 2 ил.
Изобретение относится к области медицины и может быть использовано для выделения из крови больных, например больных сахарным диабетом I и II типов, гельминтов, личинок гельминтов и других паразитов. Предложенный способ является новым, ранее в научной и медицинской литературе не описан.
Целью изобретения является разработка способа выделения из крови больных сахарным диабетом гельминтов, личинок гельминтов и других паразитов.
Поставленная цель достигается способом получения препарата крови на предметном стекле путем предварительного забора крови у больного с антикоагулянтом К3-ЭДТА (калиевая соль этилендиаминтетрауксусной кислоты); добавлением концентрированного раствора глюкозы (не более 10% от объема пробы крови) для создания в пробе крови концентрации глюкозы 30-100 ммоль/л; инкубированием пробы крови в термостате при 37°С в течение 15 минут; забором из верхнего слоя надосадочной жидкости 10-15 мкл жидкости и перенесением ее на предметное стекло; полученная капля покрывается покровным стеклом и далее производится микроскопия полученного препарата с объективами 10 и 40, что позволяет обнаружить в крови больных сахарным диабетом I и II типов гельминтов, личинок гельминтов и других паразитов в нативной форме (в живом виде).
Новым в предложенном способе является то, что в результате последовательного применения описанных этапов удалось выявить в 100% случаев в крови больных сахарным диабетом 1 и 2 типов имевшихся там гельминтов, личинок гельминтов и других паразитов.
Новый способ обнаружения гельминтов, личинок гельминтов и других паразитов в нативной форме в крови больных сахарным диабетом необходим для разработки новых методов фармакотерапии и улучшения диагностики при лечении этих больных.
При отрабатывании отдельных этапов способа проверены и обоснованы параметрические значения концентраций, времени, температуры и так далее, что отражено в приведенных примерах.
ПРИМЕР 1 (фиг.1а, б).
1. У больного сахарным диабетом берется 0.5 мл венозной крови с антикоагулянтом К3-ЭДТА.
2. К ней добавляется 50 мкл раствора глюкозы (раствор глюкозы готовится на физиологическом растворе с концентрацией глюкозы 500 ммоль/л), и проба перемешивается.
3. Проба инкубируется при 37°С в течение 15 минут.
4. С поверхности надосадочной жидкости берут 15 мкл и переносят на предметное стекло в виде капли. Капля накрывается покровным стеклом.
5. Микроскопия препарата с объективами 10 и 40 позволила обнаружить в крови паразитов в нативной форме.
ПРИМЕР 2 (фиг.2).
1. У больного сахарным диабетом взято 100 мкл капиллярной крови.
2. К ней добавлено 10 мкл раствора глюкозы с концентрацией 500 ммоль/л.
3. Проба инкубируется при 37°С в течение 15 минут.
4. С поверхности надосадочной жидкости берут 15 мкл и переносят на предметное стекло в виде капли. Капля накрывается покровным стеклом.
5. Микроскопия препарата с объективами 10 и 40 позволила обнаружить в крови паразитов.
Всего венозная и капиллярная кровь была исследована более чем у 60 больных сахарным диабетом, и во всех препаратах, приготовленных по данной методике, были обнаружены гельминты, личинки гельминтов и другие паразиты.
Предлагаемый способ позволяет в обычных лабораторных условиях с помощью недорогих реактивов получать препараты крови больных сахарным диабетом и определять в них гельминтов, личинок гельминтов и других паразитов.
Способ выделения из крови больных сахарным диабетом гельминтов, личинок гельминтов в нативной форме, включающий получение микроскопических препаратов из обогащенной глюкозой надосадочной жидкости в результате смешивания пробы крови с антикоагулянтом К3-ЭДТА, добавление концентрированного раствора глюкозы не более 10% от объема пробы крови для создания в пробе крови концентрации глюкозы 50-100 м моль/л, инкубирование пробы крови в термостате при 37°С в течение 15 мин, забор из верхнего слоя надосадочной жидкости 10-15 мкл жидкости и перенесение ее на предметное стекло, покрытие капли покровным стеклом и микроскопию полученного препарата с объективами 10 и 40.
