4-(2-бутиламино)-2,7-диметил-8-(2-метил-6-метоксипирид-3-ил)пиразоло-[1,5-а]-1,3,5-триазин, фармацевтическая композиция, его содержащая, и его применение

Описывается новое соединение 4-(2-бутиламино)-2,7-диметил-8-(2-метил-6-метоксипирид-3-ил)пиразоло[1,5-а]1,3,5-триазин формулы (I):

его стереоизомерные формы или фармацевтически приемлемые солевые формы, фармацевтическая композиция, его содержащая, и его применение для получения фармацевтической композиции для лечения тревоги у млекопитающих. 5 н. и 2 з.п. ф-лы.

 

Область изобретения

Данное изобретение относится к лечению психиатрических расстройств и неврологических заболеваний, включая большую депрессию, расстройства, связанные с тревогой, посттравматическое стрессовое расстройство, супрануклеарный паралич и расстройства питания, а также к лечению иммунологических, сердечно-сосудистых или связанных с сердцем заболеваний и гиперчувствительности толстой кишки, связанной с психопатологическими нарушениями и стрессом, путем введения 4-(2-бутиламино)-2,7-диметил-8-(2-метил-6-метоксипирид-3-ил)пиразоло-[1,5-а]-1,3,5-триазина, его энантиомеров и фармацевтически приемлемых солей в качестве лиганда рецепторов рилизинг-фактора кортикотропина.

Предпосылки изобретения

Рилизинг-фактор кортикотропина (называемый здесь CRF), пептид из 41 аминокислоты, представляет собой первоначальный физиологический регулятор секреции пептидов, производных проопиомеланокортина (РОМС), из переднего гипофиза [J.Rivier et al., Proc. Nat. Acad. Sci. (USA) 80:4851 (1983); W.Vale et al., Science 213:1394 (1981)]. В дополнение к его эндокринной роли на уровне гипофиза иммуногистохимическое определение локализации CRF показало, что гормон имеет широкое распределение вне гипоталамуса в центральной нервной системе и продуцирует широкий спектр вегетативных, электрофизиологических и поведенческих эффектов, согласующихся с ролью нейромедиатора или нейромодулятора в головном мозге [W.Vale et al., Rec. Prog. Hor. Res. 39:245 (1983); G.F.Koob, Persp. Behav. Med. 2:39 (1985); E.B.De Souza et al., J. Neurosci, 5:3189 (1985)]. Существуют также доказательства того, что CRF играет существенную роль в интегрировании реакции иммунной системы на физиологические, психологические и иммунологические стрессоры [J.E.Blalock, Physiological Reviews 69:1 (1989); J.E.Morley, Life Sci. 41:527 (1987)].

Клинические данные предоставляют доказательства того, что CRF играет роль при психиатрических расстройствах и неврологических заболеваниях, включая депрессию, расстройства, связанные с тревогой, и расстройства питания. Утверждалось также, что CRF играет роль в этиологии и патофизиологии болезни Альцгеймера, болезни Паркинсона, болезни Хантингтона, прогрессирующем супрануклеарном параличе и боковом амиотрофическом склерозе, поскольку они относятся к дисфункции CRF нейронов в центральной нервной системе [обзор см. в публикации E.B De Souza, Hosp. Practice 23:59 (1988)].

При аффективном расстройстве или большой депрессии концентрация CRF значительно увеличивается в спинно-мозговой жидкости (CSF) у лиц, не принимающих лекарственные препараты [C.B.Nemeroff et al., Science 226:1342 (1984); C.M.Banki et al., Am. J. Psychiatry 144:873 (1987); R.D.France et al., Biol. Psychiatry 28:86 (1988); M.Arato et al., Biol. Psychiatry 25:355 (1989)]. Более того, плотность рецепторов CRF значительно снижается в лобной коре жертв суицида, что согласуется с гиперсекрецией CRF [C.B.Nemeroff et al., Arch. Gen. Psychiatry 45:577 (1988)]. Кроме того, имеется притупленная реакция адренокортикотропина (АСТН) на CRF (введенный внутривенно), наблюдавшаяся у пациентов с депрессией [P.W.Gold et al., Am. J. Psychiatry 141:619 (1984); F.Holsboer et al., Psychoneuroendocrinology 9:147 (1984); P.W.Gold et al., New Eng. J. Med. 314:1129 (1986)]. Доклинические исследования у крыс и не человекообразных обезьян предоставляют дополнительное подтверждение гипотезы о том, что гиперсекреция CRF может быть вовлечена в симптомы, наблюдаемые при депрессии у людей [R.M.Sapolsky, Arch. Gen. Psychiatry 46:1047 (1989)]. Имеется предварительное доказательство того, что трициклические антидепрессанты могут изменить уровни CRF и, таким образом, модулировать количества рецепторов CRF в головном мозге [Grigoriadis et al., Neuropsychopharmacology 2:53 (1989)].

Утверждалось также, что CRF играет роль в этиологии связанных с тревогой расстройств. CRF вызывает анксиогенные эффекты у животных, и взаимодействия между бензодиазепином/не бензодиазепиновыми анксиолитиками и CRF было продемонстрировано на разнообразных поведенческих моделях тревоги [D.R. Britton et al., Life Sci. 31:363 (1982); C.W.Berridge and A.J.Dunn Regul. Peptides 16:83 (1986)]. Предварительные исследования с использованием предполагаемого антагониста рецепторов CRF α-спирального бычьего CRF (9-41) на разнообразии поведенческих парадигм показывают, что антагонист вызывает «подобные анксиолитическим» эффекты, которые качественно аналогичны бензодиазепинам [C.W.Berridge and A.J.Dunn Horm. Behav. 21:393 (1987), Brain Research Reviews 15:71 (1990)].

Нейрохимические, эндокринные исследования и изучение связывания с рецепторами продемонстрировали взаимодействия между CRF и бензодиазепиновыми анксиолитиками, предоставляя еще одно доказательство вовлечения CRF в данные расстройства. Хлордиазэпоксид ослабляет «анксиогенные» эффекты CRF и в тесте конфликта [K.T.Britton et al., Psychopharmacology 86:170 (1985); K.T.Britton et al., Psychopharmacology 94:306 (1988)] и в тесте акустического испуга [N.R.Swerdlow et al., Psychopharmacology 88:147 (1986)] у крыс. Антагонист безодиазепиновых рецепторов (Ro15-1788), который отдельно не проявлял поведенческой активности при тесте конфликта действия, устранял эффекты CRF зависимым от дозы образом, в то время как обратный агонист бензодиазепина (FG7142) усиливал действие CRF [K.T. Britton et al., Psychopharmacology 94:306 (1988)].

Механизмы и участки действия, посредством которых стандартные анксиолитики и антидепрессанты оказывают свои терапевтические эффекты, еще предстоит выяснить. Однако высказывалась гипотеза, что они участвуют в подавлении гиперсекреции CRF, которая наблюдается при указанных расстройствах. Особый интерес представляет то, что предварительные исследования по изучению эффектов антагониста рецепторов CRF (α-спирального CRF9-41) при разнообразных поведенческих парадигмах показали, что антагонист CRF вызывает «подобные анксиолитическим» эффекты, качественно аналогичные бензодиазепинам [обзор см. в публикациях G.F.Koob and K.T.Britton, In: Corticotropin-Releasing Factor: Basic and Clinical Studies of a Neuropeptide, E.B. De Souza and C.B.Nemeroff eds., CRC Press p221 (1990)].

Далее утверждалось, что CRF играет роль при сердечно-сосудистых или связанных с сердцем заболеваниях, а также при желудочно-кишечных расстройствах, возникающих в результате стресса, таких как гипертония, тахикардия и застойная сердечная недостаточность, инсульт, синдром раздраженного кишечника, послеоперационная кишечная непроходимость и гиперчувствительность толстой кишки, связанные с психопатологическим нарушением и стрессом [обзор см. в публикациях G.F.Koob and K.T.Britton, In: Corticotropin-Releasing Factor: Basic and Clinical Studies of a Neuropeptide, E.B. De Souza and C.B.Nemeroff eds., CRC Press p221 (1990) и C.Maillot, M.Million, J.Y.Wei, A.Gauthier, Y.Tache, Gastroenterology, 119, 1569-1579 (2000)].

Избыточная экспрессия или недостаточная экспрессия CRF были предложены в качестве основной причины некоторых медицинских расстройств. Такие излечимые расстройства включают, например, без ограничения: аффективное расстройство, тревогу, депрессию, головную боль, синдром раздраженного кишечника, посттравматическое стрессовое расстройство, супрануклеарный паралич, подавление иммунитета, болезнь Альцгеймера, желудочно-кишечные заболевания, невротическую анорексию или другие расстройства питания, наркоманию, симптомы лекарственной или алкогольной абстиненции, воспалительные заболевания, сердечно-сосудистые или связанные с сердцем заболевания, проблемы фертильности, инфекции вирусом иммунодефицита человека, геморрагический стресс, ожирение, бесплодие, травмы головы и спинного мозга, эпилепсию, инсульт, язвы, боковой амиотрофический склероз, гипогликемию, гипертонию, тахикардию и застойную сердечную недостаточность, инсульт, остеопороз, преждевременные роды, психосоциальную карликовость, вызванную стрессом лихорадку, язву, диарею, послеоперационную кишечную непроходимость и гиперчувствительность толстой кишки, связанную с психопатологическим нарушением и стрессом [обзор см. в публикациях J.R.McCarthy, S.C. Heinriches and D.E.Grigoriadis, Curr. Pharm. Res., 5, 289-316 (1999); P.J.Gilligan, D.W.Robertson and R.Zaczek, J. Medicinal Chem., 43, 1641-1660 (2000), G.P.Chrousos, Int. J. Obesity, 24, Suppl. 2, S50-S55 (2000); E.Webster, D.J.Torpy, I.J.Elenkov, G.P.Chousos, Ann. N.Y. Acad. Sci., 840, 21-32 (1998); D.J.Newport and C.B.Nemeroff, Curr. Opin. Neurobiology 10, 211-218 (2000); G.Mastorakos and I.Ilias, Ann. N.Y. Acad. Sci., 900, 95-106 (2000); M.J.Owens and C.B.Nemeroff, Expert Opin. Invest. Drugs, 8, 1849-1858 (1999); G.F.Koob, Ann. N.Y. Acad. Sci., 909, 170-185 (2000)].

В каждой из следующих публикаций описаны соединения, антагонисты CRF; однако ни в одном из них не раскрыты соединения, представленные в настоящем описании: WO95/10506; WO99/51608; WO97/35539; WO99/01439; WO97/44308; WO97/35846; WO98/03510; WO99/11643; PCT/US99/18707; WO99/01454 и WO00/01675.

Сущность изобретения

В соответствии с одним аспектом настоящее изобретение относится к новому соединению, фармацевтической композиции и способам, которые могут применяться при лечении аффективного расстройства, тревоги, депрессии, синдрома раздраженного кишечника, посттравматического стрессового расстройства, супрануклеарного паралича, подавления иммунитета, болезни Альцгеймера, желудочно-кишечных заболеваний, невротической анорексии или другого расстройства потребления пищи, симптомов наркотической или алкогольной абстиненции, наркомании, воспалительных расстройств, нарушений фертильности, расстройств, лечение которых можно осуществить или облегчить путем антагонизма в отношении CRF, включая без ограничения расстройства, возникновение которых вызывает или которому способствует CRF, или расстройство, выбранное из воспалительных расстройств, таких как ревматоидный артрит и остеоартрит, боль, астма, псориаз и различные аллергии; генерализованное тревожное расстройство; паническое, связанное с фобиями, навязчиво-компульсивное расстройство; посттравматическое стрессовое расстройство; расстройства сна, вызванные стрессом; восприятие боли, такое как фибромиалгия; расстройства настроения, такие как депрессия, включая большую депрессию, единичные эпизоды депрессии, рецидивирующую депрессию, депрессию, вызванную жестоким обращением с детьми, и послеродовую депрессию; дистемия; биполярные расстройства; циклотимия; синдром усталости; вызванная стрессом головная боль; рак, инфекции вирусом иммунодефицита человека (ВИЧ); нейродегенеративные заболевания, такие как болезнь Альцгеймера, болезнь Паркинсона и болезнь Хантингтона; желудочно-кишечные заболевания, такие как язвы, синдром раздраженного кишечника, болезнь Крона, спастический колит, диарея и послеоперационная кишечная непроходимость и гиперчувствительность толстой кишки, связанная с психопатологическими нарушениями или стрессом; расстройства потребления пищи, такие как анорексия и невротическая булимия; геморрагический стресс; психотические эпизоды, вызванные стрессом; синдром эутиреоидной болезни; синдром неадекватной выработки антидиуретического гормона (ADH); ожирение; бесплодие; травмы головы; травмы спинного мозга, ишемическое повреждение нейронов (например, церебральная ишемия, такая как церебральная ишемия гиппокампа); эксцитотоксическое повреждение нейронов; эпилепсия; сердечно-сосудистые и связанные с сердцем расстройства, включая гипертонию, тахикардию и застойную сердечную недостаточность; инсульт, иммунная дисфункция, включая иммунные дисфункции, вызванные стрессом (например, вызванные стрессом лихорадки, стрессовый синдром свиней, лихорадка, связанная с транспортировкой коров, лошадиная пароксизмальная фибрилляция и дисфункции, вызванные иммобилизацией в ограниченном пространстве у кур, стресс у овец, отбившихся от отары, или стресс у собак, связанный с взаимодействием между людьми и животными); мышечные спазмы; недержание мочи; старческая деменция типа Альцгеймера; деменция, связанная с множеством инфарктов мозга; боковой амиотрофический склероз; зависимость от химических веществ и наркомания (например, зависимость от алкоголя, кокаина, героина, бензодиазепинов или других препаратов); симптомы наркотической и алкогольной абстиненции; остеопороз; психосоциальная карликовость и гипогликемия у млекопитающего.

Настоящее изобретение относится к новому соединению, которое связывается с рецепторами рилизинг-фактора кортикотропина, посредством этого изменяя анксиогенные эффекты секреции CRF. Соединение по настоящему изобретению можно применять для лечения психиатрических расстройств и неврологических заболеваний, расстройств, связанных с тревогой, посттравматического стрессового расстройства, супрануклеарного паралича и расстройств потребления пищи, а также для лечения иммунологических, сердечно-сосудистых или относящихся к сердцу заболеваний и гиперчувствительности толстой кишки, связанной с психопатологическим нарушением и стрессом у млекопитающего.

В соответствии с другим аспектом настоящее изобретение относится к новому соединению формулы (I) (описанной ниже), которое можно применять в качестве антагониста рилизинг-фактора кортикотропина. Соединение настоящего изобретения проявляет активность в качестве антагониста рилизинг-фактора кортикотропина и, как оказывается, подавляет гиперсекрецию CRF. Настоящее изобретение также включает фармацевтические композиции, содержащие указанное соединение формулы (I), и способы применения этого соединения для подавления гиперсекреции CRF и/или лечения анксиогенных расстройств.

Использование анализов конкурентного связывания считается особенно ценным для скрининга претендентов на новые препараты, например, для идентификации новых лигандов CRF или других соединений, имеющих даже большую или более избирательную аффинность связывания с рецепторами CRF, и поэтому указанные кандидаты могли бы потенциально применяться в качестве лекарственных препаратов. При анализе определяют способность потенциального лиганда замещать меченое соединение.

Поэтому другой вариант осуществления изобретения включает применение соединения по изобретению в анализе связывания, при котором одно или более соединений могут быть присоединены к метке, причем метка может непосредственно или косвенно предоставлять выявляемый сигнал. Различные метки включают радиоизотопы, флюоресцирующие вещества, хемолюминесцентные вещества, молекулы специфического связывания, частицы, например магнитные частицы, и им подобные.

Другой вариант осуществления изобретения относится к применению соединений по изобретению (в частности, меченых соединений данного изобретения) в качестве зондов для определения локализации рецепторов в клетках и тканях и в качестве стандартов и реагентов для применения при определении характеристик связывания с рецепторами тестируемых соединений. Меченые соединения по изобретению можно применять для исследований in vitro, таких как авторадиография срезов тканей, или для способов in vivo, например, эмиссионного позитронного томографического (РЕТ) или однофотонного эмиссионного компьютерного томографического (SPECT) сканирования. В частности, предпочтительные соединения по изобретению можно применять в качестве стандартов и реагентов при определении способности потенциального фармацевтического средства связываться с рецептором CFR1.

Подробное описание изобретения

[1] В первом варианте осуществления настоящее изобретение относится к соединению формулы (I):

(I)

и его стереоизомерным формам или смесям его стереоизомерных форм и его фармацевтически приемлемым солям или пролекарственным формам.

[2] В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к соединению варианта осуществления [1], его изомерам, его стереоизомерным формам, смесям его стереоизомерных форм, его фармацевтически приемлемым пролекарствам или его фармацевтически приемлемым солевым формам, причем указанное соединение представляет собой 4-((R)-2-бутиламино)-2,7-диметил-8-(2-метил-6-метоксипирид-3-ил)[1,5-a]-пиразоло-1,3,5-триазин или 4-((S)-2-бутиламино)-2,7-диметил-8-(2-метил-6-метоксипирид-3-ил)[1,5-a]-пиразоло-1,3,5-триазин.

[3] В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к соединению любого из вариантов осуществления [1] и [2], его фармацевтически приемлемым пролекарствам или его фармацевтически приемлемым солевым формам, причем в указанном соединении по существу отсутствует его (S) стереоизомер.

[4] В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к соединению варианта осуществления [1], причем указанное соединение представляет собой 4-(2-бутиламино)-2,7-диметил-8-(2-метил-6-метоксипирид-3-ил)[1,5-a]пиразоло-1,3,5-триазин.

[5] В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к соединению варианта осуществления [1], причем указанное соединение представляет собой 4-((R)-2-бутиламино)-2,7-диметил-8-(2-метил-6-метоксипирид-3-ил)[1,5-a]пиразоло-1,3,5-триазин.

[6] Фармацевтическая композиция, содержащая фармацевтически приемлемый носитель и терапевтически эффективное количество любого соединения из вариантов осуществления [1]-[5].

[7] В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу антагонистического воздействия на рецептор CRF у млекопитающего, включающий введение млекопитающему терапевтически эффективного количества любого соединения из вариантов осуществления [1]-[5].

[8] В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу лечения расстройства, проявляющегося гиперсекрецией CRF у теплокровного животного, включающему введение животному терапевтически эффективного количества любого соединения из вариантов осуществления [1]-[5].

[9] В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу лечения расстройства, лечение которого можно осуществить или облегчить антагонистическим воздействием на CRF, включающему введение млекопитающему терапевтически эффективного количества любого соединения из вариантов осуществления [1]- [5].

[10] В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу антагонистического воздействия на рецептор CRF у млекопитающего, включающему введение млекопитающему терапевтически эффективного количества любого соединения из вариантов осуществления [1]-[5].

[11] В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу лечения тревоги или депрессии у млекопитающего, включающему введение млекопитающему терапевтически эффективного количества любого соединения из вариантов осуществления [1]-[5].

[12] В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу скрининга для выявления лигандов рецепторов CRF, причем способ включает:

а) проведение анализа конкурентного связывания с рецептором CRF количества любого соединения из вариантов реализации от [1] до [5], которое мечено выявляемой меткой, и потенциального лиганда; и

b) определение способности указанного потенциального лиганда заместить указанное меченое соединение.

[13] В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу выявления рецепторов CRF в ткани, включающему:

а) обеспечение контакта любого соединения из вариантов осуществления [1]-[5], которое мечено выявляемой меткой, с тканью при условиях, которые обеспечивают возможность связывания соединения с тканью; и

b) выявление меченого соединения, связанного с тканью.

[14] В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу ингибирования связывания CRF с рецептором CRF-1, включающему обеспечение контакта любого соединения из вариантов осуществления [1]-[5] с раствором, включающим клетки, экспрессирующие рецептор CRF1, причем соединение присутствует в растворе в концентрации, достаточной для ингибирования связывания CRF с рецептором CRF-1.

[15] В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к изделию, включающему:

а) упаковочный материал;

b) соединение любого из вариантов осуществления [1]-[5] и

с) этикетку или вкладыш упаковки, содержащийся внутри указанного упаковочного материала и указывающий, что данное соединение эффективно для лечения тревоги или депрессии.

[16] Настоящее изобретение также включает способ лечения аффективного расстройства, тревоги, депрессии, головной боли, синдрома раздраженного кишечника, посттравматического стрессового расстройства, супрануклеарного паралича, подавления иммунитета, болезни Альцгеймера, желудочно-кишечных заболеваний, невротической анорексии или других расстройств потребления пищи, наркомании, симптомов лекарственной или алкогольной абстиненции, воспалительных заболеваний, сердечно-сосудистых или относящихся к сердцу заболеваний, проблем фертильности, инфекций вирусом иммунодефицита человека, геморрагического стресса, ожирения, бесплодия, травм головы и спинного мозга, эпилепсии, инсульта, язв, бокового амиотрофического склероза, гипогликемии или расстройства, лечение которого можно осуществить или облегчить путем антагонизма в отношении CRF, включая, но не ограничиваясь этим, расстройства, возникновение которых вызывает или которому способствует CRF, у млекопитающего, включающий введение млекопитающему терапевтически эффективного количества любого соединения из вариантов осуществления [1]-[5].

Определения

Используемый здесь термин «фармацевтически приемлемые соли» относится к солям, полученным из фармацевтически приемлемых нетоксичных кислот, включающих неорганические кислоты и органические кислоты. Подходящие нетоксичные кислоты включают неорганические кислоты и органические кислоты основных остатков, таких как амины, например уксусную, бензолсульфоновую, бензойную, амфорсульфоновую, лимонную, этолсульфоновую, фумаровую, глюконовую, глютаминовую, бромистоводородную, хлористоводородную, изетионовую, молочную, малеиновую, яблочную, миндальную, метансульфоновую, слизевую, азотную, памоевую, пантотеновую, фосфорную, янтарную, серную, винную кислоту, п-толуолсульфоновую и им подобные; и щелочные или органические соли кислотных остатков, таких как карбоксильные кислоты, например соли щелочных и щелочноземельных металлов, полученные из следующих оснований: гидрид натрия, гидроокись натрия, гидроокись калия, гидроокись кальция, гидроокись алюминия, гидроокись лития, гидроокись магния, гидроокись цинка, аммиак, триметиламмиак, триэтиламмиак, этилендиамин, н-метил-глюкамин, лизин, аргинин, орнитин, холин, N,N'-дибензилэтилендиамин, хлорпрокаин, диэтаноламин, прокаин, н-бензилфенетиламин, диэтиламин, пиперазин, трис(гидроксиметил)аминометан, гидроокись тетраметиламмония и им подобные.

Фармацевтически приемлемые соли соединений по изобретению можно получить путем взаимодействия свободных кислотных или основных форм данных соединений со стехиометрическим количеством соответствующего основания или кислоты в воде или в органическом растворителе, или в смеси их обоих; обычно предпочтительны неводные среды, подобные простому эфиру, этилацетату, этанолу, изопропанолу или ацетонитрилу. Перечни подходящих солей можно найти в руководстве Remington's Pharmaceutical Sciences, 17^th ed., Mack Publishing Company, Easton, PA, 1985, p.1418, описание которого включено здесь в качестве ссылки.

Используемый здесь термин «фармацевтически приемлемые пролекарства» означает любые ковалентно связанные носители, которые высвобождают родовой препарат формулы (I) in vivo, когда такое пролекарство вводят млекопитающему субъекту. Пролекарства соединений формулы (I), а также, если возможно, цвиттерионные формы соединений по изобретению известные специалистам в данной области медицины, пригодны для применения в контакте с тканями людей и животных и имеют уровень токсичности, раздражения, аллергической реакции и тому подобного, соизмеримый с целесообразным соотношением выгода/риск, и являются эффективными при их предполагаемом применении. Термин «пролекарство» означает соединение, которое быстро трансформируется in vivo с получением родового соединения формулы (I), например, путем гидролиза в крови. Функциональные группы, которые могут быть быстро трансформированы метаболическим расщеплением in vivo, образуют класс групп, вступающих в реакцию с карбоксильной группой соединений данного изобретения. Они включают такие группы, как алканоил (такой как ацетил, пропионил, бутирил и им подобные), незамещенный и замещенный ароил (такой как бензоил и замещенный бензоил), алкоксикарбонил (такой как этоксикарбонил), триалкилсилил (такой как триметил- и триэтилсилил), сложные моноэфиры, образованные с дикарбоксильными кислотами (такие как сукцинил) и им подобные, но не ограничиваются ими. Ввиду легкости, с которой метаболически расщепляемые группы соединений, которые можно применять в соответствии с данным изобретением, расщепляются in vivo, соединения, несущие такие группы, действуют в качестве пролекарств. Соединения, несущие метаболически расщепляемые группы, имеют то преимущество, что они могут проявить улучшенную биологическую доступность в результате усиленной растворимости и/или скорости всасывания, приданную родовому соединению, благодаря присутствию метаболически расщепляемой группы. Детальное обсуждение пролекарств предоставлено в следующих публикациях: Design of Prodrugs, H.Bundgaard, ed., Elsevier, 1985; Methods in Enzymology, K.Widder et al., Ed., Academic Press, 42, p.309-396, 1985; A Texbook of Drug Design and Development, Krogsgaard-Larsen and H.Budgaard, ed. Chapter 5; "Design and Application of Prodrugs" p.113-191, 1991; Advanced Drug Delivery Reviews, H.Bungaard, 8, p.1-38, 1992; Journal of Pharmaceutical Sciences, 77, p.285, 1988; Chem. Pharm. Bull., N.Nakeya et al., 32, p.692, 1984; Pro-drugs as Novel Delivery Systems, T.Higuchi and V.Stella, Vol.14 of the A.C.S. Symposium Series, and Bioreversible Carriers in Drug Design, Edward B.Roche, ed., American Pharmaceutical Association and Pergamon Press, 1987, которые включены сюда в качестве ссылок.

«Пролекарствами» считают любые ковалентно связанные носители, которые высвобождают активный родительский препарат формулы (I) in vivo, когда такое пролекарство вводят млекопитающему. Пролекарства соединений формулы (I) получают модификацией функциональных групп, присутствующих в соединениях, таким образом, что модификации расщепляются, либо при обычной манипуляции, либо in vivo, до родового соединения. Пролекарства включают соединения, в которых гидроксильная, амино- или сульфгидрильная группы связаны с любой группой, которая при введении млекопитающему субъекту отщепляется с образованием соответственно свободной гидроксильной, амино- или сульфгидрильной группы. Примеры пролекарств включают ацетатные, формиатные и бензоатные производные спиртовых и амино функциональных групп в соединениях формулы (I) и тому подобное, но не ограничиваются ими.

Используемый здесь для описания соединения термин «по существу без его (S) стереоизомера» означает, что соединение состоит из значительно большей доли его (R) стереоизомера, чем его оптического антипода (т.е. его (S) стереоизомера). В предпочтительном варианте осуществления изобретения термин «по существу без его (S) стереоизомера» означает, что соединение состоит, по меньшей мере, приблизительно из 90 мас.% его (R) стереоизомера и приблизительно из 10 мас.% или менее его (S) стереоизомера.

В более предпочтительном варианте осуществления изобретения термин «по существу без его (S) стереоизомера» означает, что соединение состоит, по меньшей мере, приблизительно из 95 мас.% его (R) стереоизомера и приблизительно из 5 мас.% или менее его (S) стереоизомера. В еще более предпочтительном варианте осуществления изобретения термин «по существу без его (S) стереоизомера» означает, что соединение состоит, по меньшей мере, приблизительно из 99 мас.% его (R) стереоизомера и приблизительно из 1 мас.% или менее его (S) стереоизомера. В другом предпочтительном варианте реализации изобретения термин «по существу без его (S) стереоизомера» означает, что соединение состоит почти из 100 мас.% его (R) стереоизомера. Указанные выше процентные доли базируются на общем количестве объединенных стереоизомеров соединения.

Термин «терапевтически эффективное количество» соединения данного изобретения означает количество, эффективное для противодействия патологическому уровню CRF или лечения симптомов аффективного расстройства, тревоги или депрессии у хозяина.

Используемый здесь термин «меченое» значит, что соединение или непосредственно, или косвенно мечено меткой, которая обеспечивает выявляемый сигнал, например, радиоизотопом, флюоресцирующими веществами, ферментом, антителами, частицами, такими как магнитные частицы, хемолюминесцентными веществами, Р³², I¹³¹ и At²¹¹ и т.д.

Способы синтеза

Многие органические соединения существуют в оптически активных формах, т.е. они обладают способностью вращать плоскость поляризованного света. При описании оптически активного соединения приставки D и L или R и S используются для обозначения абсолютной конфигурации молекулы вокруг ее хирального центра (центров). Приставки d и l или (+) и (-) используются для обозначения признака вращения плоско-поляризованного света соединением, причем (-) или l значат, что соединение является левовращающим. Соединение с приставкой (+) или d является правовращающим. Для данной химической структуры данные соединения, называемые стереоизомерами, идентичны за исключением того, что они являются зеркальными изображениями друг друга. Конкретный стереоизомер может также именоваться энантиомером, и смесь таких изомеров часто называется энантиомерная смесь. Смесь энантиомеров 50:50 называют рацемической смесью.

Настоящее изобретение включает все стереоизомерные формы соединений формулы I. Центры асимметрии, которые присутствуют в соединениях формулы I, могут все независимо друг от друга иметь S конфигурацию или R конфигурацию. Приставки d и l или (+) и (-) используются для обозначения признака вращения плоско-поляризованного света соединением, причем (-) или l значат, что соединение является левовращающим. Соединение с приставкой (+) или d является правовращающим. Изобретение включает все возможные энантиомеры и диастереомеры и смеси двух или более стереоизомеров, например смеси энантиомеров и/или диастереомеров во всех соотношениях. Таким образом, энантиомеры являются предметом изобретения в энантиомерно чистой форме и в виде левовращающих, и в виде правовращающих антиподов, в виде рацематов и в виде смесей двух энантиомеров во всех соотношениях. В случае цис/транс изомерии изобретение включает и цис-форму, и транс-форму, а также смеси данных форм во всех соотношениях. Получение отдельных стереоизомеров можно проводить при желании разделением смеси обычными способами, например хроматографией или кристаллизацией, использованием стереохимически однородных исходных материалов для синтеза или стереоизбирательным синтезом. Необязательно дериватизацию можно проводить перед разделением стереоизомеров. Разделение смеси стереоизомеров можно проводить на стадии соединений формулы I или на стадии промежуточного соединения во время синтеза. Настоящее изобретение также включает все таутомерные формы соединений формулы (I).

Соединения формулы (I) можно получить в результате использования методов, представленных на схеме 1.

Схема 1

Соединение формулы (II), где X=F, можно обработать алкоксидом металла (например, метоксидом натрия, метоксидом калия; предварительно образованным или образованным in situ) в инертном растворителе с получением промежуточного соединения формулы (III). Инертные растворители могут включать, но не ограничиваются ими, алкиловые спирты (1-8 атомов углерода, предпочтительно метанол или этанол), низшие алканнитрилы (1-6 атомов углерода, предпочтительно ацетонитрил), воду, простые диалкиловые эфиры (предпочтительно простой диэтиловый эфир), простые циклические эфиры (предпочтительно тетрагидрофуран или 1,4-диоксан), N,N-диалкилформамиды (предпочтительно диметилформамид), N,N-диалкилацетамиды (предпочтительно диметилацетамид), циклические амиды (предпочтительно N-метилпирролидин-2-он), диалкилсульфоксиды (предпочтительно диметилсульфоксид) или ароматические углеводороды (предпочтительно бензол или толуол). Предпочтительная температура реакции находится в диапазоне от 0°С до 100°С.

Альтернативно соединение формулы (II), где Х=ОН, можно обработать алкилирующим агентом в присутствии основания в инертном растворителе с образованием промежуточного продукта формулы (III). Алкилирующие агенты включают, но не ограничиваются ими, галогеналканы (например, CH₃I), диалкилсульфаты (например, Me₂SO₄) или алкилтрифторсульфонаты (например, CH₃O₃SCF₃).

Основания могут включать, но не ограничиваются ими, щелочные металлы, гидриды щелочных металлов (предпочтительно гидрид натрия), алкоксиды щелочных металлов (1-6 атомов углерода) (предпочтительно метоксид натрия или этоксид натрия), гидриды щелочноземельных металлов, карбонаты металлов щелочей, карбонаты щелочных металлов, карбонаты переходных металлов (например, карбонат серебра), диалкиламиды щелочных металлов (предпочтительно диизопропиламид лития), бикарбонаты щелочных металлов, гидроксиды щелочных металлов, бис(триалкилсилил)амиды щелочных металлов (предпочтительно бис(триалкилсилил)амид натрия), триалкиламины (предпочтительно N,N-диизопропил-N-этиламин) или ароматические амины (предпочтительно пиридин).

Инертные растворители могут включать, но не ограничиваются ими, галогензамещенные углеводороды (1-8 атомов углерода, 1-8 атомов галогена), низшие алканнитрилы (1-6 атомов углерода, предпочтительно ацетонитрил), воду, простые диалкиловые эфиры (предпочтительно простой диэтиловый эфир), простые циклические эфиры (предпочтительно тетрагидрофуран или 1,4-диоксан), N,N-диалкилформамиды (предпочтительно диметилформамид), N,N-диалкилацетамиды (предпочтительно диметилацетамид), циклические амиды (предпочтительно N-метилпирролидин-2-он), диалкилсульфоксиды (предпочтительно диметилсульфоксид) или ароматические углеводороды (предпочтительно бензол или толуол). Предпочтительная температура реакции находится в диапазоне от 50°С до 150°С.

Соединение формулы (III) можно трансформировать в соединение формулы (IV) взаимодействием с бромирующим агентом в инертном растворителе в присутствии или в отсутствие добавки. Бромирующие агенты включают, но этим не ограничиваются, N-бромсукцинимид-2,2'-азобисизобутиронитрил (AIBN)), бром. Добавки включают, но этим не ограничиваются, фосфаты щелочных металлов (например, K₃PO₄, Na₃PO₄), гидрофосфаты щелочных металлов (например, Na₂HPO₄, K₂HPO₄), дигидрофосфаты щелочных металлов (например, NaH₂PO₄, KH₂PO₄). Инертные растворители включают, но этим не ограничиваются, галогензамещенные углеводороды (1-6 атомов углерода, 1-6 атомов галогена, предпочтительно хлор), воду, N,N-диалкилформамиды (предпочтительно диметилформамид), N,N-диалкилацетамиды (предпочтительно диметилацетамид), циклические амиды (предпочтительно N-метилпирролидин-2-он). Температура реакции находится в диапазоне от 0 до 200°С (предпочтительно от 20 до 120°С).

Соединение формулы (IV) можно преобразовать в соединение формулы (V) последовательной реакцией с (1) алкиллитием в инертном растворителе при температуре в диапазоне от -100 до 50°С; (2) соединением формулы В(OR^a)₃ (где R^a представляет собой разветвленный или прямоцепочечный алкил из 1-20 атомов углерода) при температуре в диапазоне от -100 до 50°С и (3) кислотой в присутствии или в отсутствие воды при температуре в диапазоне от -100 до 100°С. Алкиллитий может представлять собой разветвленное или прямоцепочечное соединение, содержащее 1-20 атомов углерода. Инертные растворители включают, но этим не ограничиваются, простые диалкиловые эфиры (предпочтительно простой диэтиловый эфир), простые циклические эфиры (предпочтительно тетрагидрофуран или 1,4-диоксан) или ароматические углеводороды (предпочтительно бензол или толуол).

Кислоты могут включать, но этим не ограниваются, алкановые кислоты из 2-10 атомов углерода (предпочтительно уксусную кислоту), галогеналкановые кислоты (2-10 атомов углерода, 1-10 атомов галогена, такие как трифторуксусная кислота), арилсульфоновые кислоты (предпочтительно п-толуолсульфоновая кислота или бензолсульфоновая кислота), алкансульфоновые кислоты из 1-10 атомов углерода (предпочтительно метансульфоновая кислота), хлористоводородную кислоту, серную кислоту или фосфорную кислоту.

Соединение формулы (VII) можно получить взаимодействием соединения формулы (V) с соединением формулы (VI) в присутствии комплекса соли палладия или никеля, основания и инертного растворителя. Комплексы палладия или никеля включают, но этим не ограничиваются, фосфиновые комплексы, такие как Pd(PPh₃)₄, PdCl₂(PPh₃)₂, NiCl₂(PPh₃)₂, или [1,1-бис(дифенилфосфино)ферроцен]дихлорпалладий. Основания могут включать, но этим не ограничиваются, щелочные металлы, гидриды щелочных металлов (предпочтительно гидрид натрия), алкоксиды щелочных металлов (1-6 атомов углерода) (предпочтительно метоксид натрия или этоксид натрия), карбонаты щелочных металлов, карбонаты щелочноземельных металлов (например, карбонат бария), карбонаты переходных металлов (например, карбонат серебра) или триалкиламины (например, триэтиламин). Инертные растворители могут включать, но этим не ограничиваются, простые диалкиловые эфиры (предпочтительно простой диэтиловый эфир), простые циклические эфиры (предпочтительно тетрагидрофуран или 1,4-диоксан) или ароматические углеводороды (предпочтительно бензол или толуол). Предпочтительная температура реакции находится в диапазоне от -100 до 100°С.

Промежуточное соединение формулы (VII) может вступать в реакцию с основанием в присутствии инертного растворителя с получением соединения формулы (VIII), где М представляет собой катион щелочного металла (например, натрия или калия). Основания могут включать, но этим не ограничиваются, гидроокиси щелочных металлов (например NaOH или KOH), алкоксиды щелочных металлов (1-6 атомов углерода) (предпочтительно метоксид натрия или этоксид натрия) или гидроксиды щелочноземельных металлов. Инертные растворители могут включать, но этим не ограничиваются, алкиловые спирты (1-6 атомов углерода), низшие алканнитрилы (1-6 атомов углерода, предпочтительно ацетонитрил), воду, простые циклические эфиры (предпочтительно тетрагидрофуран или 1,4-диоксан), N,N-диалкилформамиды (предпочтительно диметилформамид), N,N-диалкилацетамиды (предпочтительно диметилацетамид), циклические амиды (предпочтительно N-метилпирролидин-2-он), диалкилсульфоксиды (предпочтительно диметилсульфоксид). Предпочтительная температура реакции находится в диапазоне от 0°С до 150°С.

Соединения формулы (VIII) можно обработать гидразингидратом в присутствии кислоты и инертного растворителя при температуре в диапазоне от 0 до 200°С, предпочтительно от 70 до 150°С, с получением соединений формулы (IX). Кислоты могут включать, но этим не ограниваются, алкановые кислоты из 2-10 атомов углерода (предпочтительно уксусная кислота), галогеналкановые кислоты (2-10 атомов углерода, 1-10 атомов галогена, такие как трифторуксусная кислота), арилсульфоновые кислоты (предпочтительно п-толуолсульфоновая кислота или бензолсульфоновая кислота), алкансульфоновые кислоты из 1-10 атомов углерода (предпочтительно метансульфоновая кислота), хлористоводородную кислоту, серную кислоту или фосфорную кислоту.

Инертные растворители могут включать, но этим не ограничиваются, воду, алкиловые спирты (1-8 атомов углерода, предпочтительно метанол или этанол), низшие алканнитрилы (1-6 атомов углерода, предпочтительно ацетонитрил), простые циклические эфиры (предпочтительно тетрагидрофуран или 1,4-диоксан), N,N-диалкилформамиды (предпочтительно диметилформамид), N,N-диалкилацетамиды (предпочтительно диметилацетамид), циклические амиды (предпочтительно N-метилпирролидин-2-он), диалкилсульфоксиды (предпочтительно диметилсульфоксид) или ароматические углеводороды (предпочтительно бензол или толуол).

Соединение формулы (IX) может вступать в реакцию с соединениями формулы H₃C(C=NH)OR^c (где R^c представляет собой алкил (1-6 атомов углерода) в присутствии или в отсутствие кислоты, в присутствии инертного растворителя при температуре в диапазоне от 0 до 200°С с получением соединения формулы (X). Кислоты могут включать, но этим не ограниваются, алкановые кислоты из 2-10 атомов углерода (предпочтительно уксусную кислоту), галоалкановые кислоты (2-10 атомов углерода, 1-10 атомов галогена, такие как трифторуксусная кислота), арилсульфоновые кислоты (предпочтительно п-толуолсульфоновую кислоту или бензолсульфоновую кислоту), алкансульфоновые кислоты из 1-10 атомов углерода (предпочтительно метансульфоновую кислоту), хлористоводородную кислоту, серную кислоту или фосфорную кислоту. Можно использовать стехиометрические или каталитические количества таких кислот.

Инертные растворители могут включать, но этим не ограничиваются, воду, алканнитрилы (1-6 атомов углерода, предпочтительно ацетонитрил), галогензамещенные углеводороды из 1-6 атомов углерода и 1-6 атомов галогена (предпочтительно дихлорэтан или хлороформ), алкиловые спирты из 1-10 атомов углерода (предпочтительно этанол), простые диалкиловые эфиры (4-12 атомов углерода, предпочтительно простой диэтиловый эфир или простой диизопропиловый эфир) или простые циклические эфиры, такие как диоксан или тетрагидрофуран. Предпочтительная температура реакции находится в диапазоне от 0 до 100°С.

Соединение формулы (X) можно преобразовать в промежуточное соединение формулы (XI) обработкой соединением C=О(R^d)₂ (где R^d представляет собой галоген (предпочтительно хлор), алкокси (1-4 атомов углерода) или алкилтио (1-4 атомов углерода)) в присутствии или в отсутствие основания в инертном растворителе при температуре реакции от -50 до 200°С. Основания могут включать, но этим не ограничиваются, гидриды щелочных металлов (предпочтительно гидрид натрия), алкоксиды щелочных металлов (1-6 атомов углерода) (предпочтительно метоксид натрия или этоксид натрия), карбонаты щелочных металлов, гидроксиды щелочных металлов, триалкиламины (предпочтительно N,N-диизопропил-N-этиламин или триэтиламин) или ароматические амины (предпочтительно пиридин).

Инертные растворители могут включать, но этим не ограничиваются, алкиловые спирты (1-8 атомов углерода, предпочтительно метанол или этанол), низшие алканнитрилы (1-6 атомов углерода, предпочтительно ацетонитрил), простые циклические эфиры (предпочтительно тетрагидрофуран или 1,4-диоксан), N,N-диалкилформамиды (предпочтительно диметилформамид), N,N-диалкилацетамиды (предпочтительно диметилацетамид), циклические амиды (предпочтительно N-метилпирролидин-2-он), диалкилсульфоксиды (предпочтительно диметилсульфоксид) или ароматические углеводороды (предпочтительно бензол или толуол).

Соединение формулы (XI) можно обработать галогенирующим агентом в присутствии или в отсутствие основания в присутствии или в отсутствие инертного растворителя при температуре реакции в диапазоне от -80 до 250°С с получением галогенированного промежуточного соединения (XII) (где Х представляет галоген). Галогенирующие агенты включают, но этим не ограничиваются, SOCl₂, POCl₃, PCl₃, PCl₅, POBr₃, PBr₃ или PBr₅. Основания могут включать, но этим не ограничиваются, триалкиламины (предпочтительно N,N-диизопропил-N-этиламин или триэтиламин) или ароматические амины (предпочтительно N,N-диэтиланилин).

Инертные растворители могут включать, но этим не ограничиваются, N,N-диалкилформамиды (предпочтительно диметилформамид), N,N-диалкилацетамиды (предпочтительно диметилацетамид), циклические амиды (предпочтительно N-метилпирролидин-2-он) или ароматические углеводороды (предпочтительно бензол или толуол). Предпочтительная температура реакции находится в диапазоне от 20 до 200°С.

Соединение формулы (XII) может вступать в реакцию с алкиламином в присутствии или в отсутствие основания при температуре реакции в диапазоне от -80 до 250°С с образованием соединений формулы (I). Основания могут включать, но этим не ограничиваются, гидриды щелочных металлов (предпочтительно гидрид натрия), алкоксиды щелочных металлов (1-6 атомов углерода) (предпочтительно метоксид натрия или этоксид натрия), гидриды щелочноземельных металлов, диалкиламиды щелочных металлов (предпочтительно диизопропиламид лития), карбонаты щелочных металлов, бикарбонаты щелочных металлов, бис(триалкилсилил)амиды щелочных металлов (предпочтительно бис(триалкилсилил)амид натрия, триалкиламины (предпочтительно N,N-диизопропил-N-этиламин) или ароматические амины (предпочтительно пиридин).

Инертные растворители могут включать, но этим не ограничиваются, алкиловые спирты (1-8 атомов углерода, предпочтительно метанол или этанол), низшие алканнитрилы (1-6 атомов углерода, предпочтительно ацетонитрил), простые диалкиловые эфиры (предпочтительно простой диэтиловый эфир), простые циклические эфиры (предпочтительно тетрагидрофуран или 1,4-диоксан), N,N-диалкилформамиды (предпочтительно диметилформамид), N,N-диалкилацетамиды (предпочтительно диметилацетамид), циклические амиды (предпочтительно N-метилпирролидин-2-он), диалкилсульфоксиды (предпочтительно диметилсульфоксид), ароматические углеводороды (предпочтительно бензол или толуол) или галогеналканы из 1-10 атомов углевода и 1-10 атомов галогена (предпочтительно дихлорэтан). Предпочтительная температура реакции находится в диапазоне от 0°С до 140°С.

Соединения по изобретению можно получить в виде соединений с радиоактивной меткой проведением их синтеза с использованием предшественников, включающих, по меньшей мере, один атом, который является изотопом. Радиоизотоп, предпочтительно выбирают из, по меньшей мере, одного из атомов углерода (предпочтительно ¹⁴С), водорода (предпочтительно ³Н), серы (предпочтительно ³⁵S), или йода (предпочтительно ¹²⁵I). Такие меченные радиоактивными изотопами зонды удобно синтезируются поставщиком радиоизотопов, специализирующимся в синтезе на заказ меченных радиоактивными изотопами соединений-зондов. Такие поставщики включают фирмы Amersham Corporation, Arlington Heights, Ill.; Cambridge Isotope Laboratories, Inc. Andover, Mass,; SRI International, Menlo Park, Calif., Wizard Laboratories, West Sacramento, Calif.; ChemSyn Laboratories, Lexena, KS; American Radiolabeled Chemicals, Inc., St.Louis, Mo.; и Moravek Biochemicals Inc., Brea, Calif.

Меченные тритием соединения-зонды можно также удобно получить каталитически посредством катализируемого платиной обмена меченной тритием уксусной кислоты, катализируемого кислотой обмена меченной тритием трифторуксусной кислоты, или гетерогенного катализируемого обмена с газообразным тритием. Такие способы получения также удобно проводят в виде проводимой на заказ радиоактивной метки любым поставщиком, перечисленным в предыдущих абзацах, с использованием соединения изобретения в качестве субстрата. Кроме того, некоторые предшественники могут быть подвергнуты обмену тритий-галоген газообразным тритием, восстановлением газообразным тритием ненасыщенных связей или восстановлением с использованием боротритида натрия, как желательно.

Авторадиографию рецепторов (картирование рецепторов) можно проводить in vitro, как описано Kuhar в разделе 8.1.1-8.1.9 публикации Current Protocols in Pharmacology (1998) John Wiley & Sons, New York, с использованием соединений по изобретению, меченных радиоактивной меткой.

ПРИМЕРЫ

Данные анализов регистрировали для соединений, описанных ниже, в использованием следующих общих методов. Регистрировали протонные ЯМР спектры на аппаратах Varian VXR или Unity 300 FT-NMR (300 МГц); химические сдвиги определяли в м.д. (δ) относительно внутреннего тетраметилсиланового стандарта в дейтерохлороформе или дейтеродиметилсульфоксиде, как определено ниже. Масс-спектры (MS) или масс-спектры высокого разрешения (HRMS) регистрировали на спектрометре Finnegan MAT 8230 или спектрометре модели Hewlett Packard 5988A (с использованием химиоионизации (CI) с NH₃ в качестве газа-носителя, электро-аэрозольного распылителя (TSI), химиоионизации при атмосферном давлении (APCI) или газовой хроматографии (GC)). Точки плавления регистрировали на нагревательном блочном приборе MelTemp 3.0 и не корригировали. Точки кипения не корригировали. Все определения рН во время разработки проводили индикаторной бумагой.

Реагенты были закуплены в коммерческих источниках и при необходимости были очищены перед использованием в соответствии с общими методами, описанными D.Perrin and W.L.F.Armarego, Purification of Laboratory Chemicals, 3^rd ed., (New York: Pergamon Press, 1988). Хроматографию выполняли на силикагеле с использованием систем растворителей, указанных ниже. Для смешанных систем растворителей даны объемные соотношения. В противном случае части и процентные доли даны по массе. Обычно используемыми аббревиатурами являются: ДМФ (N,N-диметилформамид) EtOH (этанол), MeOH (метанол), EtOAc (этилацетат), HOAc (уксусная кислота), DME (1,2-диэтоксиэтан) и ТГФ (тетрагидрофуран).Следующие примеры представлены для более подробного описания изобретения. Данные примеры, которые представляют лучший способ, предусматриваемый в настоящее время для осуществления изобретения, предназначены для иллюстрации, а не для ограничения изобретения.

Пример 1

Получение 2,7-диметил-8-(2-метил-6-метоксипирид-3-ил)[1,5-a]пиразоло-[1,3,5]-триазин-4(3Н)-она

А. 2-Метокси-6-метилпиридин

Натрий (31,0 г, 1,35 моль) добавляли порциями в метанол (500 мл) в течение 30 мин при перемешивании в колбе, оборудованной обратным холодильником. После завершения добавления реакционной смеси давали возможность охладиться до окружающей температуры. Порциями добавляли 2-фтор-6-метилпиридин (50 г, 450 ммоль) при перемешивании. Затем реакционную смесь нагревали до температуры флегмы и перемешивали в течение 48 час. Смесь затем охлаждали до окружающей температуры и растворитель удаляли в вакууме с получением желтого масла. Остаток обрабатывали водой (500 мл) и проводили три экстракции простым эфиром (200 мл). Объединенные органические слои сушили над MgSO₄, фильтровали и растворитель удаляли в вакууме из фильтрата с получением желтого жидкого продукта: ¹Н-ЯМР (CDCl₃, 300 МГц): δ 7,44 (дд, 1Н, J=8, 7), 6,71 (д, 1Н, J=7), 6,53 (д, 1Н, J=8), 3,91 (с, 3Н), 2,45 (с, 3Н).

В. 2-Метокси-6-метилпиридин

Смесь 2-гидрокси-6-метилпиридина (6,85 г, 62,8 ммоль), карбоната серебра (22,5 г, 81,6 ммоль), йодметана (39,1 мл, 628 ммоль) и хлороформа (200 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 40 час в темноте. Реакционную смесь фильтровали через целит. Собранное твердое вещество промывали простым эфиром. Объединенные фильтраты концентрировали в вакууме с получением жидкого продукта (6,25 г), который был идентичен продукту со стадии А.

С. 6-Метокси-3-бром-2-метилпиридин

Смесь 2-метокси-6-метилпиридина (17,0 г, 138 ммоль) и раствора дигидрофосфата натрия (0,15 моль в воде, 250 мл) перемешивали при комнатной температуре. Бром (7,1 мл, 139 ммоль) добавляли по каплям в течение 15 мин через капельную воронку. Реакционную смесь затем перемешивали при комнатной температуре в течение 4 час. Прозрачный бесцветный раствор разбавляли водой (500 мл) и экстрагировали дихлорметаном (200 мл) три раза. Объединенные органические слои сушили над MgSO₄, фильтровали и растворитель удаляли в вакууме из фильтрата с получением желтой жидкости. Флэш-хроматография на силикагеле (EtOAc:гексан::1:20) и удаление растворителя из желаемых объединенных фракций дали прозрачный, бесцветный жидкий продукт (15,4 г): ¹Н-ЯМР (CDCl₃, 300 МГц): δ 7,60 (д, 1Н, J=8), 6,46 (д, 1Н, J=8), 3,89 (с, 3Н), 2,54 (с, 3Н).

D. 6-Метокси-2-метилпиридин-3-борная кислота

Раствор 6-метокси-3-бром-2-метилпиридина (59,8 г, 296 ммоль) в сухом ТГФ (429 мл) охлаждали при перемешивании до -78°С в атмосфере азота. Раствор н-бутиллития (2,5 моль, 130,4 мл, 326 ммоль) в гексане добавляли по каплям в течение 30 мин. Реакционную смесь перемешивали в течение 3 час при ˜-78°С. Добавляли по каплям в течение 30 мин раствор триизопропилбората (102,7 мл, 445 ммоль) в сухом ТГФ (100 мл). Реакционную смесь нагревали до комнатной температуры при перемешивании в течение 16 час. В реакционную смесь при перемешивании добавляли уксусную кислоту (37,35 г, 622 ммоль), затем воду (110 мл). Через 2 час слои разделяли и органический слой концентрировали в вакууме. Остаток обрабатывали 2-пропанолом (750 мл) и растворитель удаляли на роторном испарителе (температура бани ˜50°С). Остаток растирали в простом эфире. Продукт собирали фильтрованием и сушили в вакууме (48,4 г): т.пл.>200°C; ¹Н-ЯМР (CDCl₃, 300 МГц): δ 7,83 (д, 1Н, J=8), 6,56 (д, 1Н, J=8), 3,85 (с, 3Н), 2,44 (с, 3Н); Газовая хроматография-масс-спектрометрия: 168 (М⁺+Н).

Е. 2-Метил-3-(5-метилизоксазол-4-ил)-6-метоксипиридин

Смесь 4-йод-5-метилизоксазола (18,2 г, 87 ммоль), 6-метокси-2-метилпиридин-3-борной кислоты (14,6 г, 87 ммоль), бикарбоната натрия (22,0 г, 262 ммоль), воды (150 мл) и DME (150 мл) дегазировали три раза при перемешивании подачей вакуума, а затем введением азота. Одной порцией добавляли [1,1-бис(Дифенилфосфино)ферроцен]дихлорпалладий (II) (2,14 г, 2,6 ммоль). Реакционную смесь дегазировали, как указано выше. Реакционную смесь затем перемешивали при 80°С в течение 4 час, затем охлаждали до комнатной температуры. Трижды экстракция EtOAc, сушка объединенных органических слоев над MgSO₄, фильтрация и удаление растворителя в вакууме давали масло. Флэш-хроматография (EtOAc:гексан::1:9) и удаление растворителя в вакууме из желательных фракций давали продукт (7,15 г): ¹Н-ЯМР (CDCl₃, 300 МГц): δ 8,16 (с, 1Н), 7,33 (д, 1Н, J=8), 6,63 (д, 1Н, J=8), 3,95 (с, 3Н), 2,35 (с, 6Н); APCI⁺- масс-спектрометрия: 205 (М⁺+Н).

F. 1-Циан-1-(2-метил-6-метоксипирид-3-ил)пропан-2-он, натриевая соль

Смесь метоксида натрия (25% мас./мас., 13 мл, 70 ммоль), 2-метил-3-(5-метилизоксазол-4-ил)-6-метоксипиридина (7,15 г, 35 ммоль) и метанола (50 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 16 час. Растворитель удаляли в вакууме с получением желтого масла. Растирание в простом эфире, фильтрация и сушка в вакууме давали неочищенный продукт в виде белого твердого вещества (9,3 г).

G. 5-Амино-4-(2-метил-6-метоксипирид-3-ил)-3-метилпиразол

Смесь 1-циан-1-(2-метил-6-метоксипирид-3-ил)пропан-2-она натриевой соли (9,3 г), гидразингидрата (6 мл, 123,3 ммоль) и ледяной уксусной кислоты (150 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 4 час. Реакционную смесь концентрировали в вакууме. Остаток растворяли в 1н. HCl и полученный в результате раствор экстрагировали EtOAc два раза. В водный слой добавляли 1н. раствор NaOH до достижения рН 12. Полученный полураствор экстрагировали три раза этилацетатом. Объединенные органические слои сушили над MgSO₄ и фильтровали. Растворитель удаляли в вакууме с получением вязкого масла (5,8 г): ¹Н-ЯМР (CDCl₃, 300 МГц): 7,37 (д, 2Н, J=8), 6,62 (д, 2Н, J=8), 3,95 (с, 3Н), 2,36 (с, 3Н), 2,08 (с, 3Н); APCI⁺- масс-спектрометрия: 219 (М⁺+Н); 260 (М⁺+CH₃CN).

H. 5-Ацетамидино-4-(2-метил-6-метоксипирид-3-ил)-3-метилпиразол, соль уксусной кислоты

Этилацетамидатгидрохлорид (6,46 г, 52,2 ммоль) быстро добавляли в быстро перемешиваемую смесь карбоната калия (6,95 г, 50,0 моль), дихлорметана (60 мл) и воды (150 мл). Слои разделяли и водный слой экстрагировали дихлорметаном (2Ч60 мл). Объединенные органические слои сушили над MgSO₄ и фильтровали. Растворитель удаляли простой дистилляцией и остаток в резервуаре использовали без дальнейшей очистки.

Ледяную уксусную кислоту (1,0 мл, 17,4 ммоль) добавляли в перемешиваемую смесь 5-амино-4-(2-метил-6-метоксипирид-3-ил)-3-метилпиразола (3,8 г, 17,4 ммоль), свободного основания этилацетамида и дихлорметана (100 мл). Полученную реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 час; в конце этого периода концентрировали в вакууме. Остаток растирали в простом эфире, продукт фильтровали и промывали обильными количествами простого эфира. Белое твердое вещество сушили в вакууме (5,4 г): ¹Н-ЯМР (CDCl₃, 300 МГц): 7,43 (д, 2Н, J=8), 6,69 (д, 2Н, J=8), 4,9 (шир.с, 3Н), 3,93 (с, 3Н), 2,31 (с, 3Н), 2,24 (с, 3Н), 2,13 (с, 3Н), 1,88 (с, 3Н); APCI⁺- масс-спектрометрия: 260 (М⁺+Н).

I. 2,7-Диметил-8-(2-метил-6-метоксипирид-3-ил)[1,5-a]-пиразоло-[1,3,5]триазин-4(3Н)-он

Гранулы натрия (3,9 г, 169 ммоль) добавляли порциями в этанол (200 мл) при энергичном перемешивании. После вступления в реакцию всего натрия добавляли 5-ацетамидино-4-(2-метил-6-метоксипирид-3-ил)-3-метилпиразол, соль уксусной кислоты (5,4 г, 16,9 ммоль) и диэтилкарбонат (16,4 мл, 135,3 ммоль). Полученную реакционную смесь нагревали до температуры флегмы и перемешивали в течение 18 час. Смесь охлаждали до комнатной температуры и растворитель удаляли в вакууме. Остаток растворяли в воде и медленно добавляли 1н. раствор HCl до достижения рН˜6. Водный слой экстрагировали EtOAc три раза; объединенные органические слои сушили над MgSO₄ и фильтровали. Растворитель удаляли в вакууме с получением твердого вещества. Растирание в простом эфире, фильтрация и сушка в вакууме давали белое твердое вещество (3,9 г): ¹Н-ЯМР (CDCl₃, 300 МГц): 7,49 (д, 2Н, J=8), 6,69 (д, 2Н, J=8), 3,93 (с, 3Н), 2,35 (с, 3Н), 2,28 (с, 3Н), 2,24 (с, 3Н); APCI⁺- масс-спектрометрия: 286 (М⁺+H).

Пример 2

Получение 4-((R)-2-бутиламино)2,7-диметил-8-(2-метил-6-метоксипирид-3-ил)[1,5-а]пиразоло-1,3,5-триазина

А. 4-Хлор-2,7-диметил-8-(2-метил-6-метоксипирид-3-ил)[1,5-а]пиразолотриазин

Смесь 2,7-диметил-8-(2-метил-6-метоксипирид-3-ил)[1,5-a]-пиразоло-[1,3,5]триазин-4-она (пример 1, 3,9 г, 13,7 ммоль), диизопропилэтиламина (9,5 мл, 54,7 ммоль), оксихлорида фосфора (5,1 мл, 54,7 ммоль) и толуола (75 мл) перемешивали при температуре флегмы в течение 4 час. Летучие вещества удаляли в вакууме. Остаток помещали на подкладку из силикагеля на целите и элюировали 1:1 смесью EtOAc и гексана. Растворитель удаляли в вакууме из фильтрата с получением масла.

В. 4-((R)-2-Бутиламино)2,7-диметил-8-(2-метил-6-метоксипирид-3-ил)[1,5-а]пиразоло-1,3,5-триазин

Смесь 4-хлор-2,7-диметил-8-(2-метил-6-метоксипирид-3-ил)- [1,5-а]пиразолотриазина, (R)-2-бутиламина (2,0 мл, 20,5 ммоль), диизопропилэтиламина (9,5 мл, 54,7 ммоль) и сухого ТГФ (25 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 18 час. Растворитель удаляли в вакууме. Хроматография остатка на колонке (сначала с использованием EtOAc : гексана 1:2, затем с использованием EtOAc : гексана 1:4) давала продукт. Удаление растворителя в вакууме давало белое твердое вещество (2,3 г): т.пл. 118,3°C; ¹Н-ЯМР (CDCl₃, 300 МГц): δ 7,41 (д, 1Н, J=8), 6,63 (д, 1Н, J=8), 6,25 (шир.д, 1Н, J=9), 4,35-4,30 (м, 1Н), 3,95 (с, 3Н), 2,49 (с, 3Н), 2,35 (с, 3Н), 2,30(с, 3Н), 1,76-1,66 (м, 2Н), 1,34 (д, 3Н J=7), 1,02 (т, 3Н, J=7); ¹³C-ЯМР (CDCl₃, 100,52 МГц): δ 163,8, 163,0, 155,7, 153,7, 147,8, 146,6, 141,6, 118,5, 107,4, 106,6, 53,3, 48,2, 29,7, 26,1, 22,9, 20,4, 13,1, 10,3; ИК (без примесей, KBr, см^-1): 3380 (м), 3371 (м), 2968 (м), 2928 (м), 2872 (в), 1621 (с), 1588 (с), 1544 (с), 1489 (с), 1460 (с), 1425 (с), 1413 (с), 1364 (с), 1346 (м), 1304 (с), 1275 (с), 1247 (с), 1198 (м), 1152 (м), 1134 (м), 1112 (м), 1034 (с), 1003 (м); ESI(+)-HRMS: Расчетная для C₁₈H₂₄N₆O: 341.2089; Найденная: 341.2093 (М⁺+Н). Аналитически расчетная для C₁₈H₂₄N₆O: С, 63,51, Н, 7,12, N, 24,69; Найденная: С, 63,67, Н, 7,00, N, 24,49.

Полезность

Анализ связывания с рецепторами CRF крыс для оценки биологической активности.

Аффинность связывания с рецепторами в отношении корковых рецепторов крыс анализировали в соответствии с опубликованными способами (E.B. De Souza, J. Neuroscience, 7: 88 (1987).Кривые ингибирования связывания [¹²⁵I-Tyr°]-o-CRF с клеточными мембранами при различных разведениях тестируемого препарата анализировали программой повторяющегося выравнивания кривой LIGAND [P.J.Munson and D.Rodbard, Anal. Biochem. 107:220 (1980), которая обеспечивает получение величин Ki для ингибирования, которые затем используются для оценки биологической активности.

Ингибирование активности аденилатциклазы, стимулированной CRF

Ингибирование активности аденилатциклазы, стимулированной CRF можно выполнить, как описано G.Battaglia et al. Synapse 1:572 (1987). Вкратце, анализы проводят при 37°С в течение 10 мин в 200 мл буфера, содержащего 100 ммоль Tris-HCl (рН 7,4 при 37°С), 10 ммоль MgCl₂, 0,4 ммоль этиленгликольтетраацетата (EGTA), 0,1% альбумина бычьей сыворотки (BSA), 1 ммоль изобутилметилксантина (IBMX), 250 единиц/мл фосфокреатинкиназы, 5 ммоль креатинфосфата, 100 ммоль гуанозин 5'-трифосфата, 100 нмоль oCRF, антагонистические пептиды (диапазон концентрации от 10^-9 до 10^-6m) и 0,8 мг первоначальной влажной массы ткани (приблизительно 40-60 мг белка). Реакции инициируются добавлением 1 ммоль АТФ/³²P]АТФ (приблизительно 2-4 мКи/пробирку) и прекращают добавлением 100 мл 50 ммоль Tris-HCl, 45 ммоль АТФ и 2% додецилсульфата натрия. Для контроля извлечения цАМФ 1 мкмоль [³H]цАМФ (приблизительно 40000 распадов в 1 мин) добавляют в каждую пробирку перед отделением. Отделение [³²Р]цАМФ от [³²Р]АМФ выполняют последовательным элюированием через колонку Dowex и глиноземную колонку.

Биологический анализ in vivo

Активность in vivo соединения настоящего изобретения можно оценить с использованием одного из биологических анализов, имеющихся и принятых в данной области. Иллюстративные из данных тестов включают анализ акустического испуга, тест подъема по лестнице и анализ хронического введения. Данные и другие модели, которые можно использовать для тестирования соединений настоящего изобретения, были описаны в публикации C.W.Berridge and A.J.Dunn Brain Research Reviews 15:71 (1990).

Соединение можно тестировать у любого вида грызунов или мелкого млекопитающего.

Соединение по данному изобретению можно применять при лечении дисбаланса, связанного с патологическими уровнями рилизинг-фактора кортикотропина у пациентов, страдающих депрессией, аффективными расстройствами и/или тревогой.

Соединение данного изобретения можно вводить для лечения указанных отклонений от нормы средствами, которые создают контакт активного агента с участком действия агента в организме млекопитающего. Соединения можно вводить любым обычным средством, имеющимся для применения в сочетании с лекарственными препаратами или в виде отдельного терапевтического средства, или в комбинации с терапевтическими средствами. Его можно вводить отдельно, но в целом его вводят с фармацевтическим носителем, выбранным на основе выбранного пути введения и стандартной фармацевтической практики.

Введенная дозировка будет варьировать в зависимости от применения и известных факторов, таких как фармакодинамический характер определенного средства и способ и путь его введения; возраст реципиента, масса и состояние здоровья; природа и степень выраженности симптомов; вид сопутствующего лечения; частота лечения и желаемый эффект. Для применения при лечении указанных заболеваний или состояний соединение данного изобретения можно вводить перорально ежедневно в дозировке активного ингредиента 0,002-200 мг/кг массы тела. Обычно доза 0,01-10 мг/кг в дробных дозах 1-4 раза/день или в композиции пролонгированного высвобождения будет эффективна при получении желаемого фармакологического эффекта.

Лекарственные формы (композиции), пригодные для введения, содержат от около 1 мг до около 100 мг активного ингредиента на единицу. В данных фармацевтических композициях активный ингредиент обычно будет присутствовать в количестве приблизительно от 0,5 до 95 мас.% на основании общей массы композиции.

Активный ингредиент можно вводить перорально в твердых лекарственных формах, таких как капсулы, таблетки и порошки, или в жидких формах, таких как эликсиры, сиропы и/или суспензии. Соединения данного изобретения можно также вводить парентерально в стерильных жидких дозированных композициях.

Желатиновые капсулы можно использовать для содержания активного ингредиента и подходящего носителя, такого как лактоза, крахмал, стеарат магния, стеариновая кислота или производные целлюлозы, но не ограничивающегося ими. Аналогичные разбавители можно использовать для изготовления прессованных таблеток. И таблетки, и капсулы можно изготовить в виде продуктов пролонгированного высвобождения для продолжительного высвобождения лекарственного средства в течение периода времени. Прессованные таблетки могут быть покрыты сахаром или пленкой для маскировки неприятного вкуса или используемыми для защиты активных ингредиентов от атмосферы или для обеспечения возможности избирательного распада таблетки в желудочно-кишечном тракте.

Жидкие лекарственные формы для орального введения могут содержать красящие или ароматизирующие агенты для увеличения принятия пациентом.

Обычно вода, фармацевтически приемлемые масла, солевой раствор, водная декстроза (глюкоза) и родственные сахарные растворы и гликоли, такие как пропиленгликоль или полиэтиленгликоль, представляют собой подходящие носители для парентеральных растворов. Растворы для парентерального введения предпочтительно содержат растворимую в воде соль активного ингредиента, пригодные стабилизирующие агенты и, если необходимо, полутвердые жировые вещества. Противоокисляющие агенты, такие как бисульфит натрия, сульфит натрия или аскорбиновая кислота, или отдельно, или в комбинации представляют собой подходящие стабилизирующие агенты. Используют также лимонную кислоту и ее соли и ЭДТА. Кроме того, парентеральные растворы могут содержать консерванты, такие как бензалконийхлорид, метил- или пропил-парабен и хлорбутанол.

Подходящие фармацевтические носители описаны в руководстве "Remington's Pharmaceutical Sciences", A.Osol, стандартной ссылке в данной области. Фармацевтические лекарственные формы, которые можно применять для введения соединений данного изобретения, можно проиллюстрировать, как следует ниже:

Капсулы

Большое количество стандартных лекарственных форм в виде капсул получают заполнением каждой из стандартных состоящих из двух частей твердых желатиновых капсул 100 мг порошкообразного активного ингредиента, 150 мг лактозы, 50 мг целлюлозы и 6 мг стеарата магния.

Мягкие желатиновые капсулы

Смесь активного ингредиента в перевариваемом масле, таком как масло соевых бобов, масло семян хлопка или оливковое масло, готовят и инъецируют посредством положительного смещения закачкой в желатин для формирования мягких желатиновых капсул, содержащих 100 мг активного ингредиента. Капсулы промывают и сушат.

Таблетки

Большое количество таблеток получают обычными процедурами с тем, чтобы стандартная дозированная форма составляла 100 мг активного ингредиента, 0,2 мг коллоидной двуокиси кремния, 5 мг стеарата магния, 275 мг микрокристаллической целлюлозы, 11 мг крахмала и 98,8 мг лактозы. Соответствующие покрытия можно наносить для улучшения вкусовых качеств или отсроченного всасывания.

Соединения данного изобретения можно также применять в качестве реагентов или стандартов при биохимическом исследовании неврологической функции, дисфункции и патологии. Хотя настоящее изобретение было описано и проиллюстрировано с точки зрения определенных предпочтительных вариантов реализации, для специалистов в данной области будут очевидны другие варианты реализации. Поэтому изобретение не ограничивается конкретными описанными и проиллюстрированными вариантами реализации, но может модифицироваться или изменяться без отхода от сущности изобретения, полный диапазон притязаний которого определено прилагаемой формулой изобретения.

1. 4-(2-бутиламино)-2,7-диметил-8-(2-метил-6-метоксипирид-3-ил)пиразоло[1,5-а]1,3,5-триазин формулы (I):

его стереоизомерные формы или фармацевтически приемлемые солевые формы.

2. Соединение по п.1, его фармацевтически приемлемые солевые формы, где указанное соединение представляет собой 4-(R)-(2-бутиламино)-2,7-диметил-8-(2-метил-6-метоксипирид-3-ил)пиразоло-[1,5-а]-1,3,5-триазин.

3. Соединение по п.1, где указанное соединение представляет собой 4-(R)-(2-бутиламино)-2,7-диметил-8-(2-метил-6-метоксипирид-3-ил)пиразоло-[1,5-а]-1,3,5-триазин.

4. Фармацевтическая композиция, обладающая антитревожной активностью, включающая фармацевтически приемлемый носитель и терапевтически эффективное количество соединения по п.1.

5. Фармацевтическая композиция, обладающая антитревожной активностью, включающая фармацевтически приемлемый носитель и терапевтически эффективное количество соединения по п.З.

6. Применение соединения по п.1 для получения фармацевтической композиции для лечения тревоги у млекопитающих.

7. Применение соединения по п.3 для получения фармацевтической композиции для лечения тревоги у млекопитающих.