Способ количественного определения мочевины в молоке и молочных продуктах
Владельцы патента RU 2293984:
Государственное учреждение Волгоградский научно-исследовательский технологический институт мясо-молочного скотоводства и переработки продукции животноводства Россельхозакадемии (ГУ ВНИТИ ММС и ППЖ Россельхозакадемии) (RU)
Изобретение относится к способам исследования пищевых продуктов, а именно молока и молочных продуктов колориметрическим методом. Способ предусматривает добавление в пробу исследуемого продукта 1%-ного спиртового раствора диметилглиоксима и тиосемикарбазида в 25%-ной серной кислоте, кипячение в течение 15 минут и охлаждение. Затем образующуюся в ходе реакции белково-липидную суспензию отделяют фильтрацией, а окрашенный прозрачный фильтрат колориметрируют при 530 нм. Изобретение позволяет с большей достоверностью определить содержание мочевины в молоке.
Изобретение относится к способам исследования пищевых продуктов, конкретно молока и молочных продуктов колориметрическим методом.
В настоящее время анализ мочевины в молоке не входит в набор обязательных анализов молока, принятый в РФ. Однако в других странах, например в США, его широко используют как показатель усвоения белков грубых кормов у лактирующих коров, а также для оценки эффективности рубцового пищеварения. Американские исследователи используют уреазный метод определения мочевины в молоке, основанный на ферментативном гидролизе мочевины под действием коммерческого препарата уреазы и определении образующегося в результате этой реакции аммиака [1]. Будучи энзиматическим этот метод требует четкой стандартизации активности фермента уреазы.
Определение мочевины в молоке целесообразно использовать также в случаях обогащения кормов мочевиной (карбамидом) - контроль передозировки. В ветеринарной практике определение мочевины в молоке используется как диагностический тест почечной недостаточности лактирующих животных. В процессе молочнокислого брожения уровень мочевины постепенно снижается до нулевых значений, таким образом определение мочевины в кисломолочных продуктах используется как показатель технологической эффективности процесса брожения.
Известен колориметрический метод определения мочевины, основанный на цветной реакции Фирона-Арчибалда. В практике клинической биохимии данная цветная реакция используется для определения мочевины в крови [2]. Для этой цели выпускаются специальные диагностические наборы с применением аналитического реагента - диацетилмоноксима и хлорида железа (III). Для анализа мочевины в молоке эти диагностические наборы малопригодны по причине образования в пробе устойчивой мути (коагуляция белково-липидных комплексов молока).
Техническое решение - обеспечение возможности количественного определения мочевины в молоке и молочных продуктах колориметрическим методом.
Это достигается тем, что в способе определения мочевины в молоке и молочных продуктах, включающем взаимодействие продукта с аналитическими реагентами с образованием окрашенного соединения; в качестве аналитических реагентов используют диметилглиоксим с тиосемикарбазидом, образующаяся в ходе реакции непрозрачная белково-липидная суспензия отделяется фильтрацией через бумажный фильтр.
Способ осуществляется следующим образом.
0,2 мл молока разводится дистиллированной водой до 2,0 мл. К пробе последовательно добавляется 0,2 мл 1%-ного спиртового раствора диметилглиоксима и 2 мл тиосемикарбазида в 25%-ной серной кислоте; после 15-минутного кипения пробы охлаждаются и фильтруются через бумажный фильтр для удаления белково-липидного коагулята; прозрачный окрашенный фильтрат колориметрируется при 530 нм.
Концентрацию мочевины в молоке (мг/л) находят по калибровочному графику, выполненному с разведениями 10-3 моль раствора мочевины (калибратор).
Результаты анализов смешанного коровьего молока (n=30) составили 107±15 мг/л.
Предложенный способ позволяет определить количественное содержание мочевины в молоке с большой достоверностью, используя недорогие аналитические реагенты.
Источники информации
1. Балаховский С.Д., Балаховский И.С. М.: Медизд., 1953, с.387-389.
2. Храмов В.А., Нарбутович Н.И. Количественное определение мочевины в крови "Лабораторное дело", 1968; № 7, с.439-440.
Способ количественного определения мочевины в молоке и молочных продуктах, включающий взаимодействие продукта с аналитическими реагентами с образованием окрашенного соединения, отличающийся тем, что в качестве аналитического реагента используют 0,2 мл 1%-ного спиртового раствора диметилглиоксима и 2 мл тиосемикарбазида в 25%-ной серной кислоте, которые добавляют в пробу, кипятят в течение 15 мин, охлаждают, фильтруют, полученный окрашенный фильтрат колориметрируют при 530 нм, а концентрацию мочевины определяют по калибровочному графику, выполненному с разведениями 10-3 моль раствора мочевины.
