Способ диагностики бруцеллеза мелкого рогатого скота
Владельцы патента RU 2303458:
ГНУ Всероссийский научно-исследовательский институт бруцеллеза и туберкулеза животных (ГНУ ВНИИБТЖ) (RU)
ГНУ Институт экспериментальной ветеринарии Сибири и Дальнего Востока (ГНУ ИЭВС и ДВ) (RU)
Изобретение относится к ветеринарии. Способ заключается в исследовании сыворотки крови животного с антигеном в реакции иммунодиффузии. При этом в качестве антигена используют О-ПС М-антиген, приготовленный из вакцинного штамма B.melitensis Rev-1. Способ позволяет значительно повысить чувствительность метода и эффективность диагностики. 4 табл.
Изобретение относится к ветеринарии, а именно к диагностике инфекционных заболеваний.
Известен способ диагностики бруцеллеза крупного рогатого скота с помощью реакции иммунодиффузии (РИД) с О-полисахаридным антигеном (О-ПС), который готовится из вакцинного штамма B.abortus 19 [1].
Применительно к бруцеллезу мелкого рогатого скота эта реакция недостаточно чувствительна, что объясняется гетерогенностью антигена к возбудителю инфекции B.melitensis [2].
Задачей изобретения является повышение эффективности диагностики бруцеллеза мелкого рогатого скота путем использования в РИД гомологичного антигена, изготовленного из вакцинного штамма В.melitensis Rev-1.
Сравнительное изучение антигенов A-(abortus) и М-(melitensis) проводилось в экспериментальных и производственных условиях.
Предлагаемый способ диагностики бруцеллеза мелкого рогатого скота (РИД с О-ПС антигеном) повышает чувствительность метода в 2-2,5 раза.
Пример 1. Испытание активности антигенов -А и -М в РИД проводилось в эксперименте по проверке иммунитета у овец, привитых по различным схемам вакциной из штамма В.abortus 19:
- первая группа (9 овцематок). Первично прививали подкожно в дозе 40 млрд.м.к. и через 12 месяцев реиммунизировали конъюнктивально в дозе 4 млрд.м.к.;
- вторая группа (9 овцематок). Первично и повторно с интервалом в 12 месяцев прививали подкожно в дозе 40 млрд.м.к.;
- третья группа (9 овцематок). Первично и повторно с интервалом в 12 месяцев животных прививали конъюнктивально в дозе 4 млрд.м.к.;
- четвертая группа (9 овцематок). Прививали подкожно в дозе 40 млрд.м.к.;
- пятая группа (8 овцематок). Прививали конъюнктивально в дозе 4 млрд.м.к.;
- шестая группа (5 овцематок). Интактные животные служили контролем. Их одновременно с подопытными овцематками (первая, вторая и третья группах через 50 дней после ревакцинации и четвертая и пятая группах по истечении 13 месяцев после первичной прививки) инфицировали подкожно в области локтевого сустава двухсуточной культурой вирулентного штамма B.melitensis H-102 в десятикратной инфицирующей дозе (1 млн.м.к.).
Результаты опыта, отраженные в таблице 1, показывают избирательную чувствительность диагностикумов в зависимости от их антигенной структуры.
| Таблица 1 Результаты сравнительного изучения активности О-ПС бруцеллезных антигенов -А и -М в РИД на овцах, иммунизированных вакциной из штамма 19, в экспериментальных условиях | ||||||||||
| № группы | Характеристика групп (схема иммунизации) | Исследовано животных | Реагировало положительно в РИД | |||||||
| до заражения | после заражения (х) | |||||||||
| всего | в т.ч. | всего | в т.ч. | |||||||
| А+М | А | М | А+М | А | М | |||||
| 1 | Подкожно + конъюнктивально 40+4 млрд м.к. | 9 | 1 | - | 1 | - | 7 | 2 | - | 5 |
| 2 | Подкожно + подкожно 40+40 млрд м.к. | 9 | 6 | - | 6 | - | 5 | 3 | 1 | 1 |
| 3 | Конъюнктивально + конъюнктивально 40+4 млрд м.к. | 9 | - | - | - | - | 7 | 2 | - | 5 |
| 4 | Подкожно 40 млрд м.к. | 9 | - | - | - | - | 3 | 2 | - | 1 |
| 5 | Конъюнктивально 4 млрд м.к. | 8 | - | - | - | - | 6 | 5 | - | 1 |
| Итого (подопытные животные, abortus + melitensis) | 44 | 7 | - | - | 28 | 14 | 1 | 13 | ||
| 6 | Контроль (невакцинированные) melitensis | 5 | - | - | - | - | 3 | 2 | - | 1 |
| Примечание: антиген А - изготовлен из штамма B.abortus 19 антиген М - изготовлен из штамма B.melitensis Rev-1 х - на 30-й день после заражения шт. B.melitensis |
Так, у овец, на 50-й день после ревакцинации вакциной из штамма B.abortus 19, РИД с антигеном -А была установлена в семи случаях при отрицательных показаниях с антигеном -М.
И, наоборот, на 30-й день после заражения B.melitensis преимущество было явно за антигеном -М. Так, всего реагировало положительно с обоими антигенами 31 проба, из них только с антигеном -М - 14, а с антигеном -А лишь две пробы или в 7 раз меньше.
Таким образом, экспериментальным путем была доказана видоспецифичность антигенов -А и -М, проявленная в перекрестных реакциях иммунодиффузии.
К тому же в вышеописанном опыте (таблица 2) из 18 животных с подтвержденным бруцеллоносительством в РИД реагировало 13 (72,2%). Из них только с антигеном -А реагировало одно животное (7,7%), а с антигеном -М 31,0%, то есть в четыре раза больше.
| Таблица 2 Результаты сравнительного изучения активности О-ПС бруцеллезных антигенов -А и -М в РИД на овцах, иммунизированных вакциной из штамма 19, с подтвержденным бруцеллоносительством после искусственного заражения B.melitensis | ||||||||||
| № п/п | Характеристика групп | Количество животных | Реагировало положительно в РИД | |||||||
| всего | в т.ч. | |||||||||
| А+М | А | М | ||||||||
| кол-во | % | кол-во | % | кол-во | % | кол-во | % | |||
| 1 | Вакцинированные и ревакцинированные | 13 | 10 | 76,9 | 6 | 60,0 | 1 | 7,7 | 3 | 23,1 |
| 2 | Неиммунизированные | 5 | 3 | 60,0 | 2 | 66,6 | - | - | 1 | 20,0 |
| Итого | 18 | 13 | 72,2 | 8 | 61,5 | 1 | 7,7 | 4 | 31,0 |
Следовательно, при бактериологическом исследовании также была установлена видоспецифичность бруцеллезных антигенов -А и -М в РИД.
Пример 2. Сравнительное изучение чувствительности антигенов -А и -М в РИД было продолжено в производственных условиях в двух хозяйствах, благополучных по бруцеллезу мелкого рогатого скота. В первом хозяйстве овцы были вакцинированы и через 12 месяцев ревакцинированы вакциной из штамма Rev-1 (B.melitensis), а во втором - по той же схеме вакциной из штамма 19 (B.abortus). Исследование овец в обоих хозяйствах проводили через 4 месяца после ревакцинации.
В данном опыте (таблица 3) четко прослеживается связь результатов с видоспецифичностью антигена.
Так, в первом хозяйстве только на антиген -А реагировало 8,3%, а на антиген -М - 66,6%. Во втором хозяйстве, где овец прививали вакциной из штамма 19 (B.abortus), соотношение показателей было обратным: только на антиген -А в РИД реагировало положительно 16,6%, а антиген -М не выявил дополнительно ни одного животного.
| Таблица 3 Результаты сравнительного изучения активности О-ПС бруцеллезных антигенов -А и -М в РИД в производственных условиях | ||||||||||
| № п/п | Вакцинный штамм | Количество исследованных животных | Реагировало положительно в РИД | |||||||
| всего | в т.ч. | |||||||||
| А+М | А | М | ||||||||
| голов | % | голов | % | голов | % | голов | % | |||
| 1 | Rev-1 + Rev-1 (B.melitensis) | 200 | 12 | 6,0 | 3 | 25,0 | 1 | 8,3 | 8 | 66,6 |
| 2 | 19+19 (B.abortus) | 98 | 6 | 6,1 | 5 | 83,3 | 1 | 16,6 | - | - |
Таким образом, и в производственных условиях была подтверждена ранее выявленная экспериментальным путем определенная видоспецифичность бруцеллезных антигенов -А и -М в РИД.
Пример 3. В данном опыте проводились исследования на бруцеллез сывороток крови от овец и крупного рогатого скота из неблагополучных по бруцеллезу хозяйств Республики Тыва.
Результаты сравнительного изучения антигенов -А и -М показали не только их выраженную видоспецифичность (таблица 4), но и явное преимущество по чувствительности антигена -М.
При исследовании 21 пробы сывороток крови от овец в РИД с обоими антигенами реагировало 4 пробы. Только с антигеном -А во всех пробах был получен отрицательный результат. Только с антигеном -М реагировало 14 проб. Причем из 3 убитых овец, которые реагировали только на антиген -М, в двух случаях выделен возбудитель бруцеллеза B.melitensis.
| Таблица 4 Результаты исследования сывороток крови от животных из неблагополучных по бруцеллезу пунктов в РИД с разными антигенами | ||||||
| № п/п | Вид животных | Количество сывороток | Реагировало положительно в РИД | |||
| всего | в т.ч. только с антигеном | |||||
| А+М | -А | -М | ||||
| 1 | Овцы | 21 | 18 | 4 | - | 14 |
| 2 | Крупный рогатый скот | 50 | 41 | 36 | 3 | 2 |
При исследовании 50 проб сывороток крови от крупного рогатого скота в РИД с обоими антигенами реагировала 41 проба. Только с антигеном -А реагировало 3 пробы, а с антигеном -М - 2 пробы.
Таким образом, включение в комплекс стандартного бруцеллезного О-ПС антигена РИД М-компонента значительно повышает чувствительность этой реакции при диагностике бруцеллеза у мелкого рогатого скота, вызываемого возбудителем B.melitensis.
Учитывая выявленную в эксперименте и производственных условиях четко проявляемую видоспецифичность антигенов в РИД, является целесообразным применение для диагностики бруцеллеза мелкого рогатого скота в этой реакции О-ПС М-антигена, родственного возбудителю этого заболевания (B.melitensis).
Предлагаемый способ диагностики бруцеллеза мелкого рогатого скота (РИД с О-ПС антигеном) значительно повышает чувствительность метода при включении в технологию изготовления О-ПС антигена вакцинного штамма B.melitensis Rev-1 в 2-2,5 раза.
Литература
1. Филиппенко М.Л. Способ получения антигена для дифференциальной диагностики вакцинированных и больных бруцеллезом животных / М.Л.Филиппенко, Е.А.Киселев, В.М.Чекишев, Ш.Р.Файзрахманов // Патент №2035188. - 1995.
2. Аракелян П.К. Значение РИД при диагностике бруцеллеза овец / П.К.Аракелян, И.А.Косилов, С.К.Димов, Е.Б.Барабанова, В.М.Чекишев // Ветеринария. - 2004. - №8. - С.20-25.
Способ диагностики бруцеллеза мелкого рогатого скота, включающий исследование сыворотки крови с антигеном в реакции иммунодиффузии, отличающийся тем, что в качестве антигена используют О-ПС М-антиген, приготовленный из вакцинного штамма В.melitensis Rev-1.
