Питательная среда для культивирования личинок wohlfahrtia magnifica
Владельцы патента RU 2327347:
Федеральное государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования Ставропольский государственный аграрный университет (RU)
Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано при искусственном разведении личинок Wohlfahrtia magnifica всех стадий развития. Питательная среда содержит гидролизат мышечной ткани крупного рогатого скота, дефибринированную кровь овец, дрожжевой экстракт, глюкозу, агар-агар, пенициллин, стрептомицин и раствор Хенкса. Изобретение позволяет повысить выход полноценно сформированных личинок и удешевить получение этих личинок.
Область техники, к которой относится изобретение
Изобретение относится к ветеринарии, преимущественно к ветеринарной паразитологии, и может быть использовано при искусственном разведении личинок Wohlfahrtia magnifica всех стадий развития, используемых для проведения лабораторных, в частности токсикологических, исследований, необходимых для разработки новых эффективных средств и методов борьбы с вольфартиозом.
Уровень техники
Известна питательная среда для культивирования личинок желудочных оводов, содержащая пятипроцентный рыбий гидролизат, раствор Хенкса и сыворотку крови лошади (Сомов С.Л., Сомова Н.М., Красюкова Л.С. Способ культивирования личинок желудочных оводов. А.С. №1001900, А01К 67/00, 1983).
Однако указанный способ культивирования и питательная среда не могут быть использованы для культивирования личинок вольфартовой мухи, так как данные паразиты отличаются способом паразитирования и циклами развития.
Наиболее близким по технической сущности и достигаемому положительному эффекту к предлагаемой питательной среде и принятый авторами за прототип является питательная среда для выращивания личинок вольфартовой мухи, в качестве которой используется сухая сыворотка крови крупного рогатого скота, которая помещается в марлевый мешочек, смачивающийся дистиллированном водой и рибофлавином, который помещается на кусочки кожи крупного рогатого скота с личинками мух.
Однако способ не обеспечивает постоянное культивирование всех фаз развития насекомых, а количество получаемых куколок зависит от комплекса абиотических факторов и характеризуется выплодом неполноценных насекомых от 35 до 40% (ТЕРНОВОЙ В.И. Проблемы ветеринарной санитарии, Труды ВНИИВС, М, 1962, Т. XXI, с.84-87).
Раскрытие изобретения
Задачей предлагаемого изобретения является создание искусственной питательной среды, обеспечивающей достаточно высокий выход полноценно сформированных личинок Wohlfahrtia magnifica.
Технический результат, который может быть получен с помощью предлагаемого изобретения, сводится к возможности получения в лабораторных условиях независимо от времени года полноценно сформированных личинок вольфартовой мухи различных стадий развития для проведения исследований, направленных на борьбу с вольфартиозом, удешевлению получения личинок.
Технический результат достигается с помощью питательной среды для культивирования личинок Wohlfahrtia magnifica, содержащей гидролизат мышечной ткани крупного рогатого скота, дефибринированную кровь овец, глюкозу, агар-агар, дрожжевой экстракт, стрептомицин, пенициллин и раствор Хенкса в следующем соотношении компонентов (г):
Гидролизат мышечной ткани крупного рогатого скота (ФГМ) - 30,5-31,5
Дефибринированная кровь овец - 10,0-11,0
Глюкоза - 5,0-6,0
Агар-агар - 1,0-1,5
Дрожжевой экстракт - 0,3-0,4
Стрептомицин - 0,05-0,06
Пенициллин - 0,05-0,06
Раствор Хенкса - 53,1-49,48
Сущность получения питательной среды:
В 53,1-49,48 г раствора Хенкса добавляют 1-1,5 г агар-агара и помещают на водяную баню при температуре 50-52°С до полного растворения агар-агара при периодическом помешивании. В теплый раствор агар-агара добавляют 30,5-31,5 г гидролизата мышечной ткани крупного рогатого скота, 5-6 г глюкозы, 0,3-0,4 г дрожжевого экстракта, 10-11 г дефибринированной крови овец, 0,05-0,06 г стрептомицина и 0,05-0,06 г пенициллина.
Затем среда разливается в чашки Петри. Культивирование проводят в термостате при температуре 38-40°С и влажности 70-75%. Продолжительность культивирования 5-7 суток. Выход личинок 79-85%. Выход мух из полученных на искусственной питательной среде личинок составляет 68-72%.
Питательная среда не подлежит хранению и готовится непосредственно перед началом культивирования.
Осуществление изобретения
Примеры конкретного выполнения получения питательной среды для культивирования личинок Wohlfahrtia magnifica.
Пример 1
Соотношение компонентов среды составляет (г):
Гидролизат мышечной ткани крупного рогатого скота - 20,0
Дефибринированная кровь овец - 5,0
Глюкоза - 3,0
Агар-агар - 0,5
Дрожжевой экстракт - 0,2
Стрептомицин - 0,1
Пенициллин - 0,1
Раствор Хенкса - 71,1
В 71,1 г раствора Хенкса добавляют 0,5 г агар-агара и помещают на водяную баню при температуре 50-52°С до полного растворения агар-агара при периодическом помешивании. В теплый раствор агар-агара добавляют 2 г гидролизата мышечной ткани крупного рогатого скота, 3 г глюкозы, 0,2 г дрожжевого экстракта, 5 г дефибринированной крови овец, 0,1 г стрептомицина и 0,1 г пенициллина.
Затем среда разливается в чашки Петри. Культивирование проводят в термостате при температуре 38-40°С и влажности - 70-75%. Продолжительность культивирования 5-7 суток.
При культивировании личинок вольфартовой мухи на среде с таким составом выход личинок составил 41-43%, а выход мух - 23-25%.
Пример 2 проводится аналогично примеру 1, но соотношение компонентов среды составляет (г):
Гидролизат мышечной ткани крупного рогатого скота - 30,5
Дефибринированная кровь овец - 10,0
Глюкоза - 5,0
Агар-агар - 1,0
Дрожжевой экстракт - 0,3
Стрептомицин - 0,05
Пенициллин - 0,05
Раствор Хенкса - 53,1
При культивировании личинок вольфартовой мухи на среде с таким составом выход личинок составил 79-85%, а выход мух - 68-72%.
Пример 3 проводится аналогично примеру 1, но соотношение компонентов среды составляет (г):
Гидролизат мышечной ткани крупного рогатого скота - 31,5
Дефибринированная кровь овец - 11,0
Глюкоза - 6.0
Агар-агар 1.5
Дрожжевой экстракт - 0.4
Стрептомицин - 0.06
Пенициллин - 0,06
Раствор Хенкса - 49,48
При культивировании личинок вольфартовой мухи на среде с таким составом выход личинок составил 79-85%, а выход мух - 68-72%.
Пример 4 проводится аналогично примеру 1, но соотношение компонентов среды составляет (г):
Гидролизат мышечной ткани крупного рогатого скота - 35,0
Дефибринированная кровь овец - 16,0
Глюкоза - 15,0
Агароза - 3,0
Дрожжевой экстракт - 1,0
Стрептомицин - 0,5
Пенициллин - 0,5
Раствор Хенкса - 29,0
При культивировании личинок вольфартовой мухи на среде с таким составом выход личинок составил 61-65%, а выход мух - 65-67%. Уменьшение выхода личинок объясняется избыточным содержанием питательных веществ в среде и нарушением их соотношения.
Таким образом, примеры 2 и 3 являются наиболее оптимальными, т.к. выход личинок является наиболее высоким и составляет 79-85%, а выплод мух составляет 68-72%.
Испытания изобретения показали, что предложенная питательная среда позволяет получать достаточно высокий выход личинок Wohlfahrtia magnifica в лабораторных условиях без использования лабораторных животных, что позволит более эффективно проводить исследования, направленные на разработку совершенных методов и способов борьбы с вольфартиозом.
Предлагаемое изобретение по сравнению с прототипом и другими известными техническими решениями имеет следующие преимущества:
- возможность получения в лабораторных условиях полноценно сформированных личинок вольфартовой мухи;
- удешевление получения питательной среды;
- высокий процент выхода личинок;
- проведение лабораторных исследований независимо от времени года.
Приготовление гидролизата мышечной ткани
Мясо крупного рогатого скота очищают от костей, жира и пленок, измельчают в мясорубке. Фарш кладут в широкую бутыль и заливают 4-х кратным количеством дистиллированной воды (на 1 кг фарша - 4 л воды). На каждый литр смеси добавляют 30 мл соляной кислоты (уд. вес 1,19). Содержимое бутыли хорошо перемешивают, бутыль закрывают пробкой и ставят в автоклав. Гидролиз проводят при 2 атм в течение 3 часов. Затем гидролизат отстаивают и фильтруют. Содержание общего азота по Къельдалю 800-1000 мг/%, аминного азота 500-600 мг/%, степень гидролиза 0,60.
Приготовление дрожжевого экстракта
250 г прессованных пекарских дрожжей суспендируют до образования гомогенной массы в 1 л дистиллированной воды. Суспензию кипятят 4-5 минут, непрерывно помешивая. Микробную массу осаждают центрифугированием при 3-4 тыс об/мин в течение 30 минут. Надосадочную жидкость сливают и стерилизуют через фильтр Зейтца. Экстракт хранят в посуде темного цвета при 4-5°С и используют в течение 8-10 дней с момента изготовления.
Питательная среда не подлежит хранению и готовится непосредственно перед началом культивирования.
Питательная среда для культивирования личинок Wohlfahrtia magnifica, содержащая гидролизат мышечной ткани крупного рогатого скота, дефибринированную кровь овец, глюкозу, агар-агар, дрожжевой экстракт, пенициллин, стрептомицин и раствор Хенкса в следующем соотношении компонентов, г:
| Гидролизат мышечной ткани крупного рогатого скота | 30,5-31,5 |
| Дефибринированная кровь овец | 10,0-11,0 |
| Глюкоза | 5,0-6,0 |
| Агар-агар | 1,0-1,5 |
| Дрожжевой экстракт | 0,3-0,4 |
| Стрептомицин | 0,05-0,06 |
| Пенициллин | 0,05-0,06 |
| Раствор Хенкса | 53,1-49,48 |
