Экстракт солодки голой, обладающий противотуберкулезной активностью

Изобретение относится к фитотерапии, а именно к созданию средств растительного происхождения, обладающих противотуберкулезной активностью. Экстракт солодки голой, обладающий противотуберкулезной активностью, получен путем экстракции наземной или подземной частей солодки голой Glycyrrhiza glabra 40% этиловым спиртом при соотношении 1:5 и выдерживанием экстракта в темном месте при комнатной температуре в течение 10 дней с последующим фильтрованием и автоклавированием, при этом экстракт из подземной части содержит 20-30% глицирризина и солей Cа и К глицирризиновой кислоты, 10-20% глицирретиновой кислоты, 40-50% флавоноидов (ликвиритин, флавин, флавонолы, флавоны), 10-15% дубильных веществ, лектиновых белков и углеводов и экстракт из наземной части содержит 20-25% тритерпенового сапонина, 30-45% флавонолов (кверцетин, темпферол), 25-40% флавоноидов (халканы, ауроны), 10-15% С-гликозидов, кумаринов и лектиновых белков. Предложено также применение экстракта солодки голой в качестве средства, обладающего противотуберкулезной активностью, и способ получения экстракта солодки голой по п.1, заключающийся в том, что наземную или подземную части солодки голой Glycyrrhiza glabra экстрагируют 40% этиловым спиртом при соотношении 1:5, далее экстракт выдерживают в темном месте при комнатной температуре в течение 10 дней, фильтруют и автоклавируют под давлением 0,3-0,5 атм в течение 15-30 мин. Средство на основе экстракта солодки голой может быть использовано как дополнение к комплексной противотуберкулезной терапии. 3 н.п. ф-лы, табл.1, 2 ил.

 

Изобретение относится к области медицины, а именно к фитотерапии, и представляет собой лекарственное средство растительного происхождения и может быть использовано в качестве профилактического средства противотуберкулезного действия в виде биологических добавок.

Фтизиатрия испытывает трудности, связанные с особенностями течения заболевания туберкулезом. Это выражено резким повышением показателей распространенности инфекции, высоким удельным весом активных и хронических деструктивных процессов, массивным бактериовыделением. Все это приводит к недостаточной результативности специфической терапии, обусловленной нарастанием резистентности возбудителя к традиционным противотуберкулезным препаратам (Васильев А.В., Гришко А.Н. // Туберкулез и город: проблемы профилактики, диагностики и лечения. - СПб., 1996. - С.9-16).

Существуют противотуберкулезные растительные композиции, содержащие цветки багульника, лист подорожника, лист тимьяна, лист крапивы, корень валерианы, лист черной смородины, цветы календулы и корень одуванчика при определенном соотношении компонентов, которые используются на фоне антибактериальной терапии (Патент №96121489 RU, 1996 г.). В патенте представлена многокомпонентная композиция из растений, каждый компонент которой может подавлять активность других и влиять на активность отдельных компонентов, что является недостатком данной композиции.

Известен экстракт пихтовой лапки, используемый для лечения больных инфильтративным туберкулезом легких (Патент №2050855 RU, 1992 г), включающий пероральный прием; растительный экстракт способствует исчезновению побочных явлений, возникающих от введения туберкулостатиков, стимулирует клеточный иммунитет.

Недостатками этого средства является его слабая специфичность. В состав большинства противомикробных средств местного и организменного действия входят антисептики химического происхождения, которые являются для организма ксенобиотиками и обуславливают дополнительное напряжение его метаболизирующих и элиминирующих систем, и являются причиной развития побочных реакций, особенно у детей и больных хроническими заболеваниями.

Задачей настоящего изобретения является выделение растительных веществ из корня и других органов (соцветий, листьев, побегов) растения Glycyrrhiza glabra для создания натурального растительного средства, обладающего значительным противотуберкулезным действием за счет более высоких концентраций биологически активных растительных веществ и не вызывающего побочных явлений при попадании в организм.

Поставленная задача достигается оригинальным способом обработки экстрактов, повышающим содержание в растительных препаратах следующих биологически активных веществ: а) в составе экстракта корня Glycyrrhiza glabra - тритерпеновый сапонин глицирризин, а также Cа и К соли глицирризиновой кислоты (до 20-30%); глицирретиновая кислота (до 10-20%); флавоноиды - ликвиритин, флавин, флавонолы, флавоны, желтый гликозид (до 40-50%); глюкуроновая кислота, дубильные вещества (до 10-15%); - б) в составе вариантов экстракта надземной части (побегов, листьев, соцветий) Glycyrrhiza glabra - тритерпеновый сапонин (до 20-25%), флавонолы - кверцетин, темпферол(до 30-45%); гликозиды флавоноидов - халканы, ауроны (до 5-40%); С-гликозиды, кумарины и др. вещества (до 10-15%).

Отличительной особенностью предлагаемой продукции является то, что авторы впервые для подавления Mc. tuberculosis, активных для организма животных и человека, вызывающих легочные формы туберкулеза, выделили биологически активные вещества и приготовили препарат с противотуберкулезной активностью из различных органов растения Glycyrrhiza glabra.

Согласно биохимическим результатам и литературным данным (Муравьева Д.А., Фармакогнозия) в водно-спиртовых экстрактах (40% спирт) предлагаемых растительных препаратов выделяются следующие биологически активные вещества: в экстрактах корня Glycyrrhiza glabra - тритерпеновый сапонин глицирризин, а также Cа и К соли глицирризиновой кислоты с высоким процентным содержанием, агликон глицирретовой кислоты (сапогенин тритерпенового строения), желтый гликозид ликвиритин (флавин), флавонолы, их агликоновые и гликозидные соединения, халконы, флаваны, флавоноиды, дубильные вещества. В экстрактах наземной части Glycyrrhiza glabra, кроме предыдущих флавоноидов, - кверцетин, изокверцетин, темпферол, халканы, ауроны и др. вещества.

Повышение терапевтической эффективности данных препаратов дает возможность рекомендовать их для внедрения в лабораториях системы здравоохранения в качестве компонентов противотуберкулезных и противомикробных фитопрепаратов.

Результаты научных проработок показали полное или почти полное подавление метаболизма микобактерий под воздействием растительных препаратов из солодки голой, содержащих эти активные вещества.

В опытах исследовано влияние экстрагируемых препаратов в различных концентрациях активных веществ на жизнеспособность чувствительного, выделенного от больных, штамма Mycobacterium tuberculosis (H₃₇RV). Использованы стандартные методы многократных разведений в жидкой прозрачной среде Школьниковой с 0,2 мл культуры Н₃₇RV, разведенной до 10^-8, и абсолютных концентраций на плотной питательной среде Левенштейна-Йенсена. Водно-спиртовые экстракты растений цмина песчаного (Helichrysum arenarium L.), тысячелистника мелкоцветкового (Achillea micrantha M.B) в качестве сравнительного примера, а также экстрагируемые препараты корня с корневищем и надземных органов стебля, листьев, соцветий солодки голой (Glycyrrhiza glabra) участвовали в разведениях, соответствующих дозам на сухой вес активных веществ в жидкой среде: 2,5×10^-4 мг/мл; 1,25×10^-4 мг/мл; 0,625×10^-4 мг/мл; 0,313×10^-4 мг/мл; 0,156×10^-4 мг/мл; 0,078×10^-4 мг/мл. Перед применением экстракты подвергались автоклавированию под ватными пробками для соблюдения антисептики и полного удаления остатков спирта.

В таблице №1 представлены результаты исследования противотуберкулезной активности вариантов водно-спиртовых экстрактов из солодки голой.

Ниже приводятся описания результатов исследования противотуберкулезной активности экстрагируемых растительных препаратов, помещенных в таблицу №1.

Пример №1. При разведении экстракта корня солодки голой в дозе 2,5×10^-4 мг/мл активных веществ рост Mycobacterium tuberculosis был подавлен полностью.

При разведении экстракта корня солодки голой в дозе 1,25×10^-4 мг/мл активных веществ рост Mycobacterium tuberculosis был подавлен полностью.

При разведении экстракта корня солодки голой в дозе 0,625×10^-4 мг/мл активных веществ рост Mycobacterium tuberculosis был подавлен полностью.

При разведении экстракта корня солодки голой в дозе 0,313×10^-4 мг/мл активных веществ рост Mycobacterium tuberculosis был подавлен полностью.

При разведении экстракта корня солодки голой в дозе 0,156×10^-4 мг/мл активных веществ рост Mycobacterium tuberculosis был подавлен полностью.

При разведении экстракта корня солодки голой в дозе 0,078×10^-4 мг/мл активных веществ рост Mycobacterium tuberculosis был подавлен полностью (фиг.2а).

Пример №2. При разведении экстракта стебля солодки голой в дозе 2,5×10^-4 мг/мл активных веществ рост Mycobacterium tuberculosis был подавлен полностью.

При разведении экстракта стебля солодки голой в дозе 1,25×10^-4 мг/мл активных веществ рост Mycobacterium tuberculosis был подавлен полностью.

При разведении экстракта стебля солодки голой в дозе 0,625×10^-4 мг/мл активных веществ рост Mycobacterium tuberculosis был подавлен полностью.

При разведении экстракта стебля солодки голой в дозе 0,313×10^-4 мг/мл активных веществ рост Mycobacterium tuberculosis был подавлен полностью.

При разведении экстракта стебля солодки голой в дозе 0,078×10^-4 мг/мл активных веществ рост Mycobacterium tuberculosis был подавлен полностью.

При разведении экстракта стебля солодки голой в дозе 0,156×10^-4 мг/мл активных веществ рост Mycobacterium tuberculosis был подавлен частично.

Пример №3. При разведении экстракта соцветий солодки голой в дозе 2,5×10^-4 мг/мл активных веществ рост Mycobacterium tuberculosis был подавлен полностью.

При разведении экстракта соцветий солодки голой в дозе 1,25×10^-4 мг/мл активных веществ рост Mycobacterium tuberculosis был подавлен полностью.

При разведении экстракта соцветий солодки голой в дозе 0,625×10^-4 мг/мл активных веществ рост Mycobacterium tuberculosis был подавлен полностью.

При разведении экстракта соцветий солодки голой в дозе 0,313×10^-4 мг/мл активных веществ рост Mycobacterium tuberculosis был подавлен полностью.

При разведении экстракта соцветий солодки голой в дозе 0,156×10^-4 мг/мл активных веществ рост Mycobacterium tuberculosis был подавлен частично.

При разведении экстракта соцветий солодки голой в дозе 0,078×10^-4 мг/мл активных веществ рост Mycobacterium tuberculosis был подавлен частично (фиг.2б).

Пример №4. При разведении экстракта листьев солодки голой в дозе 2,5×10^-4 мг/мл активных веществ рост Mycobacterium tuberculosis был подавлен полностью.

При разведении экстракта листьев солодки голой в дозе 1,25×10^-4 мг/мл активных веществ рост Mycobacterium tuberculosis был подавлен полностью.

При разведении экстракта листьев солодки в дозе 0,625×10^-4 мг/мл активных веществ рост Mycobacterium tuberculosis был подавлен полностью.

При разведении экстракта листьев солодки голой в дозе 0,313×10^-4 мг/мл активных веществ рост Mycobacterium tuberculosis был подавлен полностью.

При разведении экстракта листьев солодки голой в дозе 0,156×10^-4 мг/мл активных веществ рост Mycobacterium tuberculosis был подавлен частично.

При разведении экстракта листьев солодки голой в дозе 0,078×10^-4 мг/мл активных веществ рост Mycobacterium tuberculosis был подавлен частично (фиг.2в).

Пример №5

При разведении экстракта соцветий тысячелистника мелкоцветкового в дозе

0,625×10^-4 мг/мл активных веществ рост Mycobacterium tuberculosis был подавлен полностью.

При разведении экстракта соцветий тысячелистника мелкоцветкового в дозе 1,25×10^-4 мг/мл активных веществ рост Mycobacterium tuberculosis был подавлен частично.

При разведении экстракта соцветий тысячелистника мелкоцветкового в дозе 0,313×10^-4 мг/мл активных веществ рост Mycobacterium tuberculosis был подавлен частично.

При разведении экстракта соцветий тысячелистника мелкоцветкового в дозе 0,156×10^-4 мг/мл активных веществ рост Mycobacterium tuberculosis был подавлен частично.

При разведении экстракта соцветий тысячелистника мелкоцветкового в дозе 0,078××10^-4 мг/мл активных веществ рост Mycobacterium tuberculosis был подавлен частично (фиг.2г).

Пример №6. При разведении экстракта таллома пармелии в дозе 2,5×10^-4 мг/мл активных веществ рост Mycobacterium tuberculosis был подавлен полностью.

При разведении экстракта таллома пармелии в дозе 0,625×10^-4 мг/мл активных веществ рост Mycobacterium tuberculosis был подавлен частично.

При разведении экстракта таллома пармелии в дозе 1,25×10^-4 мг/мл активных веществ рост Mycobacterium tuberculosis был подавлен частично.

При разведении экстракта таллома пармелии в дозе 0.313×10^-4 мг/мл активных веществ рост Mycobacterium tuberculosis был подавлен частично.

При разведении экстракта таллома пармелии в дозе 0,156×10^-4 мг/мл активных веществ рост Mycobacterium tuberculosis был подавлен частично.

При разведении экстракта таллома пармелии в дозе 0,078×10^-4 мг/мл активных веществ рост Mycobacterium tuberculosis был подавлен частично (фиг.2д).

Пример №7. При разведении экстракта соцветий цмина песчаного в дозе 2,5×10^-4 мг/мл активных веществ рост Mycobacterium tuberculosis был подавлен полностью.

При разведении экстракта соцветий цмина песчаного в дозе 1,25×10^-4 мг/мл активных веществ рост Mycobacterium tuberculosis был подавлен частично.

При разведении экстракта соцветий цмина песчаного в дозе 0,625×10^-4 мг/мл активных веществ рост Mycobacterium tuberculosis был подавлен полностью.

При разведении экстракта соцветий цмина песчаного в дозе 0,313×10^-4 мг/мл активных веществ рост Mycobacterium tuberculosis был подавлен частично.

При разведении экстракта соцветий цмина песчаного в дозе 0,156×10^-4 мг/мл активных веществ рост Mycobacterium tuberculosis был подавлен частично.

При разведении экстракта соцветий цмина песчаного в дозе 0,078×10^-4 мг/мл активных веществ рост Mycobacterium tuberculosis был подавлен частично (фиг.2е).

Таким образом, исследования показали, что наиболее высокий ингибирующий эффект зарегистрирован у экстракта из корня солодки, затем экстрактов стебля, соцветий и листьев солодки голой Glycyrrhiza glabra (варианты) по сравнению с экстрактами растений, взятых для сравнения (лишайник - пармелия блуждающая Parmelia vagans, тысячелистник мелкоцветковый - Achillea micrantha М.В, цмин песчаный - Helichrysum arenarium L.).

Активность растительных препаратов из трех растений Glycyrrhiza glabra - заявленный препарат из смеси экстракта корня и др. частей солодки голой (варианты), Helichrysum arenarium, Achillea micrantha (сравнительные препараты) против Mycobacterium tuberculosis (H37RV) далее была изучена в методе диффузии в питательную среду, на которой были засеяны микобактерии туберкулеза (фиг.1). Контрольными в этом методе для сравнения активности были взяты диски, пропитанные известными антибиотиками: левомицетином, фурагином, пенициллином. В результате экстракты, помещенные в лунки зараженной питательной среды в дозе 0,625×10^-4 мг/мл, показали противотуберкулезную активность в этом методе на уровне наиболее активного антибиотика. Левомицетин образовал диаметр зоны задержки роста микроорганизма - 32 мм; фурагин - 23,5 мм; пенициллин - 4,5 мм; экстракты Achillea micrantha - 21,5 мм; Glycyrrhiza glabra - 32,5 мм; Helichrysum arenarium - 25 мм).

Результаты этого метода отражены на фиг.1.

На фиг.2 представлены фотографии результатов подавления формирования колоний микобактерий туберкулеза под воздействием экстрагируемого препарата корня и других частей растения солодки голой в сравнении с экстрактами других растений, помещенных в таблицу №1 и описанных здесь.

Предлагаемые препараты - экстракт Glycyrrhiza glabra (варианты) обладают выраженной противотуберкулезной активностью и могут служить готовыми препаратами для использования в комплексной противотуберкулезной терапии, а также профилактическим средством и в качестве биодобавок при длительном течении болезни и для лучшего эффекта выздоровления больных.

1. Экстракт солодки голой, обладающий противотуберкулезной активностью, характеризующийся тем, что он получен путем экстракции наземной или подземной частей солодки голой Glycyrrhiza glabra 40%-ным этиловым спиртом при соотношении 1:5 и выдерживанием экстракта в темном месте при комнатной температуре в течение 10 дней с последующим фильтрованием и автоклавированием, при этом экстракт из подземной части содержит 20-30% глицирризина и солей Cа и К глицирризиновой кислоты, 10-20% глицирретиновой кислоты, 40-50% флавоноидов (ликвиритин, флавин, флавонолы, флавоны), 10-15% дубильных веществ, лектиновых белков и углеводов и экстракт из наземной части содержит 20-25% тритерпенового сапонина, 30-45% флавонолов (кверцетин, темпферол), 25-40% флавоноидов (халканы, ауроны), 10-15% С-гликозидов, кумаринов и лектиновых белков.

2. Применение экстракта солодки голой по п.1 в качестве средства, обладающего противотуберкулезной активностью.

3. Способ получения экстракта солодки голой по п.1, характеризующийся тем, что наземную или подземную части солодки голой Glycyrrhiza glabra экстрагируют 40%-ным этиловым спиртом при соотношении 1:5, далее экстракт выдерживают в темном месте при комнатной температуре в течение 10 дней, фильтруют и автоклавируют под давлением 0,3-0,5 атм в течение 15-30 мин.