Способ получения протеинов из яичного белка

 

! r.

О П И С А Н И Е 242703

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

Союа Советсеи

Социалистические

Республик

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Зависимое от авт. свидетельства №

Заявлено 02Л.1968 (№ 1206158(28-13) с присоединением заявки №

Приоритет

Опубликовано 04.VI1.1969. Бюллетень ¹ 22

Дата опубликования описания 20,XI,1969

Кл, 45h, 45/00

МПК А Olk

УДК 637.443 (088.8) Комитет по лелем изобретение и открытиЯ ори Совете Министров

СССР

Лвтор изобретсния

А. Я. Степка

Заявитель

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРОТЕИНОВ ИЗ ЯИЧНОГО БЕЛКА

Изобретение относится к способам комплексного получения протеинов (например лизоцима, овоглобулина, овальбумина), которые используются для получения протеиновых фракций из яичного белка путем осаждения 5 содержащихся в нем протеиновых фракций сульфатом аммония. Однако по известному способу в первую очередь выделяют менее ценные фракции, например глобулин, .овальбумин, кональбумин, овомукоид с последую- 10 щим выделением наиболее ценной фракции лузоцима из глобулиновой фракции.

Предложено перед осаждением сульфатом аммония проводить выделение лизоцима из яичного белка в виде кристаллов путем обра- 15 ботки яичного белка растворами хлористого натрия и едкого патра с последующим отделением кристаллов лизоцима из раствора одним из известных способов, например центрифугированием. Осаждение сульфатом аммония ос- 20 тальных фракций производить в следующем порядке.

Ф

Сначала осаждают овоглобулин из раствора, отделенного от кристаллов лизоцима, затем — овальбумин из раствора, отделенного 2s от осажденного овоглобулина в присутствии серной кислоты, а затем — кональбумин и овомукоид аналогичным методом. Лизоцим выделяют при рН 9,5 и температуре, равной

4 С, в течение 48 — 72 час, а овальбумин при 30

pEI раствора 5,1 — 5,6 в течение 12 — 24 час.

Соотношение сульфата аммония к яичному белку преимущественно может быть равно

1,05 — 1,07: 1.

Это способствует выделению более ценных фракций, например лизоцима, овоглобулина, овальбумина, повышению чистоты этих фракций, а также ускорению и упрощенгпо процесса нх выделения.

Способ заключается в следующем.

К яичному белку добавляют хлористый натрий до получения 5о о-,ного раствора и раствор едкого натра до установления рН 9,5 при температуре 4 С. В течение 48 — 92 час осаждается кристаллический лизоцим путем центрифугирования.

К центрифугату добавляют насыщенный раствор сульфата аммония в соотношении

1: 1,05 — 1,07 для осаждения авоглобулина, который собирают центрифугированием. Следующая операция — выделение овальбумина.

К центрифугату добавляют насыщенный раствор сульфата аммония и раствор серной кислоты до установления рН 5,1 — 56. Кристаллизация овальбумина завершается в течен не 12 — 24 ча с.

Центрифугат используют для получения кональбумина и овомукоида.

Предлагаемый способ по сравнению с известными обеспечивает получение более ценных фракций протеинов и максимальный выход лизоцима (75 — 80% из общего количества в

247703 пр. Сапунова, 2

Типография, яичном белке), упрощает процесс, снижает трудоемкость, поскольку при его применении не требуется повторная фильтрация и центрифугирование при удалении овоглобулина, также диализ и экстракция при отделении лизоцима. Способ обеспечивает 100О/о-ную кристаллизацию овальбумина.

Пример 1. Получение лизоцима, Яичный белок в количестве 2,5 л гомогенпзируют и добавляют 1 н. раствора едкого патра до рН 9,5. Добавляют хлорпстый натрий, для того чтобы получить окончательную

5 /о -ную концентрацию. Смесь выдерживают при 4 С после предварительного введения нескольких кристаллов лизоцима для обеспечения .кристаллизации. Кристаллизация происходит:в течение 48 — 72 час. Кристаллы собирают центрифугированием при 4"С и перекристаллизовывают путем растворения кристаллов в 0,05 н. раствора уксусной кислоты, удаления нерастворимого материала и снова доведения рН до 9,5 и добавления хлористого натрия до 5 /о-ной концентрации. После третьей перекристаллизации кристаллы высушивают в вакууме над фосфорным ангидридом.

Выход лизоцима 6,25 г, т. е. 80 — 85 из общего количества лизоцима в яичном белке.

Получение овоглобулина. К 1 л белка после выделения лизоцима добавляют насыщенный раствор сульфата аммония в соотношении

1: 1,06 — 1,0. Осадок, состоящий из овоглобулина, через 24 час собирают центрифугированием, растворяют в воде и снова осаждают сульфатом аммония для очистки препарата и высушивают. Выход овоглобулина 3,8 г.

Получение овальбумина. К центрифугату после отделения овоглобулина добавляют насыщенный раствор сульфата аммония, серную кислоту до рН 5,5 и раствор оставляют при

20 С для кристаллизации. Кристаллизация овальбумина идет 12 — 24 час. Кристаллы собирают центрифугированием и перекристаллизовывают растворением в воде и осаждением сульфатом аммония. После перекристаллизации диализируют и высушивают лиофилизацией. Выход овальбумина 27,8 г или примерно 50О/о из общего количества в яичном белке.

Центрифугат используется для получения кональбумина и овомукоида.

Пример 2. Получение лизоцима.

Яичный белок в количестве 15,0 л гомогенизируют и добавляют 135 мл 1 н. раствор едкого натра до рН 9,5. Добавляют 796,5 г хлористого натрия, для того чтобы получить окончательную 5/о-ную концентрацию. В раствор вносят кристаллическую заправку лизоцима и смесь выдерживают 48 — 72 час при температуре 4 С. Кристаллы собирают центрифугированием при температуре 4 С и перекрпсталлизовывают с растворением кристаллов в

0,05 н. раствора уксусной кислоты с удалением нерастворимого материала и снова доведением рН до 9,5 и добавлением хлористого натрия до 5О/о-ной концентрации. После третьей перекристаллизации лизоцим высушивают в

ЫНИИПИ Заказ 3052/14 вакууме над хлористым кальцием. Выход лизопима 36 г, т, е. более 80 /о из общего содержания лизоцима в яичном белке.

Получение овоглобулина. К 7 л белка после выделения лизоцима добавляют насыщенный раствор сульфата аммония в соотношении

1: 1,7 (7,49 л) и оставляют при 20 С. Осадок через 24 час собирают центрифугированием, растворяют в воде и снова осаживают суль10 фатом аммония для очистки препарата. Овоглобулин высушивают. Выход овоглобулина

28,0 г.

Получение овальбумина. К центрифугату после удаления овоглобулина добавляют на15 сыщенный раствор сульфата аммония до помутнения 0,2 н., серную кислоту до рН 52 и раствор оставляют при температуре 20 С для кристаллизации.

Кристаллизация овальбумина завершается

20 в течение 12 — 24 час. Кристаллы собирают центрифугированием и перекристаллизовывают с растворением в воде и с осаждением сульфатом аммония. После перекристаллизации диализируют и высушивают лиофилиза25 цпей. Выход овальбумина 227,5 г материала, т. е. 55 /О из общего содержания овальбумина в яичном белке.

Центрифугат после удаления овальбумина используют для получения кональбумина и

30 овомукоида.

Предмет изобретения

1. Способ получения протеинов из яичного

35 белка путем осаждения содержащихся .в нем протеиновых фракций, например глобулина, овальбумина, кональбумина, овомукоида, сульфатом аммония, отличающийся тем, что, с целью выделения в первую очередь более

40 ценных фракций, например лизоцима, овоглобулина, овальбумина, повышения чистоты этих фракций, а также ускорения и упрощения процесса их выделения, перед осаждением сульфатом аммония проводят:выделение лизоцима

45 пз яичного белка в виде кристаллов путем обработки яичного белка растворами хлористого натрия и едкого натра с последующим отделением кристаллов лизоцима из раствора одним из известных способов, например цен50 трифугированием, а осаждение сульфатом аммония остальных фракций производят в следующем порядке: сначала осаждают овоглобулин из раствора, отделенного от кристаллов лизоцима, затем — овальбумин из раствора, 55 отделенного от осажденного овоглобулина в присутствии серной кислоты, а затем — кональбумин и овомукоид аналогичным методом.

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что лизоцим выделяют при рН 9,5 и температуре, 60 равной 4 С, в течение 48 — 72 час, а овальбумин при рН раствора 5,1 — 5,6 в течение 12-—

24 час.

3. Способ по п. 1, отличающийся тем, что соотношение сульфата аммония к яичному

65 белку преимущественно равно 1,05 — 1,07: 1.

Тира>к 480 Подписное