Антитела, связывающиеся с рецепторами kir2dl1,-2,-3 и не связывающиеся с рецептором kir2ds4, и их терапевтическое применение
Владельцы патента RU 2410396:
НОВО НОРДИСК А/С (DK)
ЮНИВЕРСИТИ ОФ ГЕНУЯ (IT)
ИННАТ ФАРМА (FR)
Изобретение относится к биотехнологии. Предложено изолированное человеческое антитело к NK клеткам, которое связывается с каждым одним из KIR2DL1, KIR2DL2 и KIR2DL3, но не связывается с KIR2DS4 и усиливает литическую активность NK клетки по отношению к человеческой клетке-мишени, экспрессирующей молекулу HLA-C класса I. Антитело может быть отобрано из репертуара антител по способности перекрестно реагировать с, по меньшей мере, KIR2DL1 и KIR2DL2/3 и не связывать KIR2DS4, а также восстанавливать лизис NK клетками, экспрессирующими KIR2DL, Cw3+ или Cw4+ клеток-мишеней. Способ продуцирования человеческого антитела к NK клеткам включает культивирование клетки, трансформированной экспрессионным вектором, содержащим кодирующую указанное антитело нуклеиновую кислоту. Также предложена фармацевтическая композиция и способ для усиления цитотоксичности NK клеток у индивидуума, страдающего раком. 7 н. и 21 з.п. ф-лы, 20 ил., 10 табл.
Текст описания приведен в факсимильном виде.
1. Изолированное человеческое антитело к NK клеткам, характеризующееся тем, что оно связывается с каждым одним из KIR2DL1, KIR2DL2 и KIR2DL3, но не связывается с KIR2DS4, и усиливает литическую активность NK клетки по отношению к человеческой клетке-мишени, экспрессирующей молекулу HLA-C класса I, которое может быть получено путем отбора из репертуара антител по способности перекрестно реагировать с по меньшей мере KIR2DL1 и KIR2DL2/3 и не связывать KIR2DS4, а также восстанавливать лизис NK клетками, экспрессирующими KIR2DL, Cw3+ или Cw4+ клеток-мишеней.
2. Изолированное человеческое антитело по п.1, которое дополнительно не связывается с KIR2DS3.
3. Изолированное человеческое антитело по п.1, которое блокирует связывание по меньшей мере одного из KIR2DL1, KIR2DL2 и KIR2DL3 с молекулой I класса HLA-C.
4. Изолированное человеческое антитело по п.1, которое блокирует связывание молекулы HLA-Cw4 с KIR2DL1 и связывание молекулы HLA-Cw3 с по меньшей мере одним из KIR2DL2 или KIR2DL3.
5. Изолированное человеческое антитело по п.1, которое в связывании с по меньшей мере одним из KIR2DL1, KIR2DL2 и KIR2DL3 конкурирует с антителом, содержащим вариабельный участок легкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:15, и вариабельный участок тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:17.
6. Изолированное человеческое антитело по п.1, которое в связывании с каждым из KIR2DL1, KIR2DL2 и KIR2DL3 конкурирует с антителом, содержащим вариабельный участок легкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:15, и вариабельный участок тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:17.
7. Изолированное человеческое антитело по п.1, которое содержит вариабельный участок легкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:15.
8. Изолированное человеческое антитело по п.1, которое содержит:
(a) аминокислотную последовательность CDR1 тяжелой цепи, соответствующую остаткам 31-35 последовательности SEQ ID NO:17;
(b) аминокислотную последовательность CDR2 тяжелой цепи, соответствующую остаткам 50-65 последовательности SEQ ID NO:17; и
(c) аминокислотную последовательность CDR3 тяжелой цепи, соответствующую остаткам 99-112 последовательности SEQ ID NO:17.
9. Изолированное человеческое антитело по п.1, которое содержит вариабельный участок тяжелой цепи, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:17.
10. Изолированное человеческое антитело по п.1, которое имеет константу диссоциации (Kd) для KIR2DL1, не превышающую приблизительно 0,45 нМ.
11. Изолированное человеческое антитело по п.1, которое имеет Kd для KIR2DL3, не превышающую приблизительно 0,025 нМ.
12. Изолированное человеческое антитело по п.1, которое связывается с эпитопом KIR2DL1, по существу, содержащим аминокислотные остатки L38, R41, М44, F45, N46, D47, Т48, L49, R50, 152, F64, D72, Y80, Р87 и Y88.
13. Изолированное человеческое антитело по п.1, которое блокирует связывание молекулы HLA-Cw4 с аминокислотными остатками М44, F45 и D72 внеклеточной части KIR2DL1 (последовательность SEQ ID NO: 23).
14. Изолированное человеческое антитело по п.1, которое является моноклональным антителом.
15. Изолированное человеческое антитело по п.1, которое является антителом IgGI, IgG2, IgG3 или IgG4.
16. Изолированное человеческое антитело по п.1, которое является антителом IgG4.
17. Нуклеиновая кислота, кодирующая человеческое антитело согласно любому из пп.7-9.
18. Вектор для экспрессии, содержащий нуклеиновую кислоту согласно п.17.
19. Клетка для продуцирования антитела к NK клеткам, содержащая вектор согласно п.18.
20. Способ продуцирования человеческого антитела к NK клеткам, включающий культивирование клетки по п.19 в условиях, подходящих для экспрессии анти-KIR антитела.
21. Фармацевтическая композиция для усиления цитотоксичности клеток NK, содержащая человеческие антитела согласно любому из пунктов с 1 по 16 или человеческие антитела, полученные способом согласно п.20, в эффективном количестве, и фармацевтически приемлемый носитель или наполнитель.
22. Фармацевтическая композиция по п.21, отличающаяся тем, что она содержит полисорбат 80, сахарозу или их комбинацию.
23. Способ усиления активности клеток NK у нуждающегося в этом индивидуума, характеризующийся тем, что этот способ включает введение индивидууму эффективного количества композиции согласно любому из пп.21 и 22.
24. Способ по п.23, отличающийся тем, что индивидуумом является пациент, страдающий раком.
25. Способ по п.24, отличающийся тем, что пациент страдает раком, выбранным из острого миелоидного лейкоза, хронического миелоидного лейкоза, множественной миеломы и лимфомы не-Ходжкина.
26. Способ по п.25, отличающийся тем, что пациент страдает раком, выбранным из рака прямой кишки, рака почки, рака яичника, рака легкого, рака молочной железы и злокачественной меланомы.
27. Способ по п.24, отличающийся тем, что индивидуумом является пациент, страдающий инфекционным заболеванием.
28. Способ по любому из пп.23 - 27, отличающийся тем, что он дополнительно включает введение терапевтического средства, выбранного из иммуномодулирующего средства, гормонального средства, химиотерапевтического средства, анти-ангиогенного средства, апоптозного средства, вторичного антитела, которое связывается с ингибиторным KIR, анти-инфекционного средства, адресующего агента и вспомогательного соединения.
