Изобретение относится к пегилирующему агенту, содержащему ароматическую диазогруппу и имеющему следующую общую структуру:
,
где Х - О или NH; n - целое число в интервале от 455 до 1140. Технический результат: получен новый пегилирующий агент, который связывается с полипептидами посредством азогруппы, в результате чего образуется ковалентный конъюгат, поглощающий в видимой и ближней УФ-области электронного спектра. 3 ил.
Изобретение относится к области химии, в частности к новым производным монометоксиполиэтиленгликоля, содержащим ароматическую диазогруппу, и может быть использовано при создании новых конъюгатов биологически активных соединений.
Монометоксиполиэтиленгликоль (далее - мПЭГ) представляет собой нейтральный полиэфир с различной молекулярной массой, который применяется для модификации разнообразных полипептидов [Никитин И.Г. Пегилированные препараты: современное состояние проблемы и перспективы / И.Г.Никитин, Г.И.Сторожаков // Вирусные гепатиты, достижения перспективы. - 2001. - №3(13). - С 3-8].
Сам мПЭГ непосредственно с полипептидами не взаимодействует, поэтому к его молекуле «прикрепляют» различные функциональные группы, которые позволяют полимеру связываться с белком [Kozlowski A. Development of Pegylated hiterferons for the Treatment of Chronic Hepatitis С / A.Kozlowski, S.A. Charles, J. M.Harris // BioDrugs - 2001. - №15 (7). P 419-429].
К таким производным мПЭГ относятся мПЭГ-альдегиды [US 5990237], мПЭГ-карбонаты [US 5324844], активированные эфиры [US 5932462] и другие. Как правило, данные пегилирующие агенты взаимодействуют со свободными аминогруппами полипептидов, в результате чего образуется смесь позиционных изомеров, число которых равно количеству свободных аминогрупп в протеине [Блохин Н.П. Особенности фармакологической динамики и кинетики пегилированного α-интерферона (40 kDa) «Пегасис»: новые возможности терапии хронического гепатита C /Н.П.Блохин, И.Г.Никитин // Материалы VII Российской конференции «Гепатология сегодня» РЖГГК, - 2002. - 6].
Поскольку позиционные изомеры протеинов имеют различную биологическую активность [Foser S. Isolation, structural characterization, and antiviral activity of positional isomers of monopegylated interferon alpha-2a (PEGASYS) / S.Foser, A.Schacher A, K.A.Weyer, D.Brugger, E.Dietel, S.Marti, T.Schreitmuller // Protein Expr Purif. - 2003 Jul; - 30 (1), - P.78-87], весьма актуальным становится расширение арсенала пегилирующих агентов, не затрагивающих аминогруппы полипептидов, что позволяет не только изменить места и способы прикрепления полимера к белку, а следовательно, получить новые конъюгаты, но и изменить количество и соотношение позиционных изомеров.
Наиболее близким аналогом изобретения по данной заявке являются пегилирующие агенты по патенту RU 2288212 (C07C 47/12, 2003), которые представляют собой альдегидные производные полиэтиленгликоля. Указанные пегилирующие агенты взаимодействуют с аминогруппами полипептидов.
Задачей данного изобретения является создание новых пегилирующих агентов, взаимодействующих с полипептидами преимущественно по аминокислотным остаткам тирозина и гистидина.
Целью изобретения являются пегилирующие агенты, содержащие ароматическую диазогруппу.
Указанная цель достигается использованием в качестве пегилирующих агентов предварительно диазотированных мПЭГ-эфиров или мПЭГ-амидов аминобензойных кислот с молекулярной массой от 20000 до 50000 Д и общей структурой:
,
где X - O или NH;
n - целое число в интервале от 455 до 1140.
Предложенные пегилирующие агенты взаимодействуют в слабощелочных средах преимущественно с тирозиновыми и гистидиновыми аминокислотными фрагментами полипептидов с образованием азогруппы. В результате образуется хромофор, поглощающий в видимой и ближней УФ-области электронного спектра и сообщающий окраску целевому конъюгату.
Пример 1. Диазотирование ароматической аминогруппы
Соответствующий мПЭГ-эфир или мПЭГ-амид аминобензойной кислоты с молекулярной массой от 20000 до 50000 Д растворяли при охлаждении в разбавленной HBr и приливали избыток раствора NaNO2. По завершении диазотирования, избыток нитрита удаляли мочевиной и полученный бесцветный раствор мПЭГ-диазония ex tempore использовали для модификации пептидов.
Характеристика мПЭГ-диазония
А) Электронные спектры мПЭГ-диазония в 0,1 М растворе HCl относительно растворов нитрита натрия (1) и недиазотированного ПЭГ-амина (2) в 0,1 М HCl приведены на фиг.1.
Б) мПЭГ-диазоний взаимодействует в щелочной среде с гистидином (желтое окрашивание) и тирозином (красное окрашивание, переходящее при подкислении в желто-оранжевое) с образованием окрашенных соединений. На фиг.2 приведены электронные спектры продуктов азосочетания мПЭГ-диазония с гистидином (1) и тирозином (2) в 0,1 М Na2CO3.
Таким образом, мПЭГ-диазоний взаимодействует с гистидином и тирозином с образованием окрашенных азосоединений.
Пример 2. Пегилирование полипептидов на примере интерферона α-2b.
К охлажденному раствору интерферона α-2b в боратном буфере приливали избыток пегилирующего агента. Процесс пегилирования контролируют обращенно-фазовой ВЭЖХ.
Пегилирование останавливали добавлением избытка тирозина, после чего немодифицированный интерферон и интерфероны с разной степенью пегилирования разделяли с помощью ионообменной или гель-фильтрационной хроматографии. Электронный спектр пегилированного интерферона приведен на фиг.3.
Из указанного спектра видно, что полученный конъюгат мПЭГ с интерфероном содержал:
- хромофор, образовавшийся в результате азосочетания мПЭГ-диазония с полипептидом и поглощавщий в видимой и ближней УФ-области электронного спектра (20000-34000 см-1);
- ароматические фрагменты (35000-40000 см-1), в том числе аминокислотные остатки триптофана, фенилаланина и тирозина, принадлежавщие белковой части конъюгата;
- полиэфирные и полипептидные связи, совместно поглощающие в области 45000-50000 см-1 и, соответственно, принадлежавщие полимерному и белковому фрагментам конъюгата.
Пегилирующие агенты, содержащие ароматическую диазогруппу, представляющие собой диазотированные метоксиполиэтиленгликолевые эфиры или амиды аминобензойных кислот с молекулярной массой от 20000 до 50000 Да и с общей формулой
,
где Х - О или NH;
n - целое число от 455 до 1140.
Похожие патенты:
Изобретение относится к соединениям, обладающим бактерицидной и фунгицидной активностью, а именно к 1,2,3-трис[(аммонио)метилкарбонилоксиполи(алкиленокси)]пропан трихлоридам общей формулы где при R1=R 2=H, R3=алифатический углеводородный радикал, содержащий 10-16 атомов углерода, а+с+е=49, b+d+f=9; при R1=R2=Н, R 3=алифатический углеводородный радикал, содержащий 10-16 атомов углерода, а+с+е=55, b+d+f=10; при R1 =R2=H, R3=С 16H33, а+с+е=49, b+d+f=9; при R 1=R2=H, R3=С 16Н33, а+с+е=55, b+d+f=10; при R 1=R2=CH3, R 3=алифатический углеводородный радикал, содержащий 10-16 атомов углерода, а+с+е=49, b+d+f=9; при R1 =R2=СН3, R 3=алифатический углеводородный радикал, содержащий 10-16 атомов углерода, а+с+е=55, b+d+f=10; при R1 =R2=H, R3=алифатический углеводородный радикал, содержащий 17-20 атомов углерода, а+с+е=66, b+d+f=15; при R1=R2 =H, R3=алифатический углеводородный радикал, содержащий 17-20 атомов углерода, а+с+е=76, b+d+f=18.
Изобретение относится к соединениям, обладающим бактерицидной активностью, а именно к [(аммонио)метилкарбонилоксиполи(алкиленокси)]пропан хлоридам общей формулы где при X=Y=Z=R1R 2R3N+, R 1=R2=H, R3=алифатический углеводородный радикал, содержащий 17-20 атомов углерода, а+с+е=49, b+d+f=9, n=3; при X=Y=Z=R1R 2R3N+, R 1=R2=H, R3=алифатический углеводородный радикал, содержащий 17-20 атомов углерода, а+с+е=55, b+d+f=10, n=3; при X=Y=Z=R1R 2R3N+, R 1=R2=H, R3=С 16H33, а+с+е=49, b+d+f=0, n=3; при X=Y=Z=R1R2R 3N+, R1=R 2=H, R3=С16 H33, а+с+е=55, b+d+f=0, n=3; при X=Y=Z=R 1R2R3N +, R1=R2=H, R3=С16H 33, а+с+е=66, b+d+f=15, n=3; при X=Y=Z=R 1R2R3N +, R1=R2=H, R3=C16H 33, a+c+e=76, b+d+f=18, n=3; при X=Y=Z=R 1R2R3N +, R1=R2=H, R3=C16H 33, a+c+e=49, b+d+f=9, n=1; при X=Y=Z=R 1R2R3N +, R1=R2=H, R3=C16H 33, а+с+е=55, b+d+f=10, n=1; при X=Y=Z=R 1R2R3N +, R1=R2=H, R3=C16H 33, a+c+e=49, b+d+f=0, n=1; при X=Y=Z=R 1R2R3N +, R1=R2=H, R3=C16H 33, a+c+e=55, b+d+f=0, n=1.
Изобретение относится к соединениям, обладающим фунгицидной активностью, а именно к [(гетерилонио)(аммонио)метилкарбонилоксиполи(алкиленокси)]пропанхлоридам, общей формулы: где: при , а+с+е=49, b+d+f=9, x=3; при , а+с+е=55, b+d+f=10, x=3; при , , а+с+е=49, b+d+f=9, х=3; при , , а+с+е=55, b+d+f=10, x=3; при , а+с+е=49, b+d+f=9, x=3; при , а+с+е=55,b+d+f=10, x=3; при G=Q=M=-N +H2CH2CH 2NH2, а+с+е=49, b+d+f=9, x=3; при G=Q=M=-N+H2CH 2CH2NH2, а+с+е=55, b+d+f=10, x=3; при G=Q=-N+H 2CH2CH2NH 2, M=-Cl, a+c+e=49, b+d+f=9, x=2; при G=Q=-N +H2CH2CH 2NH2, М=-Cl, а+с+е=55, b+d+f=10, x=2; при G=Q=M=-N+H2 CH2CH2OH, а+с+е=49, b+d+f=9, х=3; при G=Q=M=-N+H 2CH2CH2OH, а+с+е=55, b+d+f=10, x=3; при , , а+с+е=49, b+d+f=0, х=3; при , , а+с+е=55, b+d+f=0, x=3.
Изобретение относится к соединениям, обладающим свойствами эмульгаторов водобитумных эмульсий, а именно трис[(аммонио)метилкарбонилоксиполи(2-метилэтиленокси)]пропан трихлоридам общей формулы: где: при X+=Y +=Z+=R1R 2R3N, R1=R 2=СН3, R3 = бензил, а+с+е=49;при X+=Y +=Z+=R1R 2R3N, R1=R 2=CH3, R3 = бензил, а+с+е=55;при a+c+e=49;при a+c+e=55.
Изобретение относится к новым [(гетерилонио)метилкарбонилокси-поли(алкиленокси)]-[(аммонио)метилкарбонилоксиполи(алкиленокси)]пропан трихлоридам, общей формулы: где: при X+=Y+= Z+=-N+R1R2 R3, R1=R2=H, R3=алифатический углеводородный радикал, содержащий 10-16 атомов углерода, а+с+е (общая степень оксипропилирования)=49, b+d+f (общая степень оксиэтилирования)=9; при X+=Y+= Z+=-N+R1R2 R3, R1=R2=H, R3=алифатический углеводородный радикал, содержащий 10-16 атомов углерода, а+с+е=55, b+d+f=10; при X+= Y+=Z+=-N+R1 R2R3, R1=R2=H, R 3=алифатический углеводородный радикал, содержащий 10-16 атомов углерода, а+с+е=49, b+d+f=9; при X+= Y+=Z+=-N+R1 R2R3, R1=R2=H, R 3=алифатический углеводородный радикал, содержащий 10-16 атомов углерода, а+с+е=55, b+d+f=10; при X+= Y+=Z+=-N+R1 R2R3, R1=R2=H, R 3=алифатический углеводородный радикал, содержащий 10-16 атомов углерода, а+с+е=49, b+d+f=0; X+= Y+=Z+=-N+R1 R2R3, R1=R2=H, R 3=алифатический углеводородный радикал, содержащий 10-16 атомов углерода, а+с+е=55, b+d+f=0; при X+=Y+ = Z+=-N+R1R2 R3, R1=R2=H, R3=алифатический углеводородный радикал, содержащий 10-16 атомов углерода, а+с+е=49, b+d+f=0; при X+= Z+=-N+R1R2 R3, R1=R2=H, R3=алифатический углеводородный радикал, содержащий 10-16 атомов углерода, а+с+е=55, b+d+f=0, и к способу их получения.
Изобретение относится к способу получения новых присадок-регуляторов вязкоупругих свойств ассоциированных мультикомпонентных нефтяных систем, которые могут быть использованы в нефтяной и нефтехимической промышленности.
Изобретение относится к новым 1,2,3-трис[(аммонио)метилкарбонил-оксиполи(алкиленокси)]пропан трихлоридам где при R1=R2=R3 =-СН2СН2ОН а+с+е (общая степень оксипропилирования) = 49, b+d+f (общая степень оксиэтилирования) = 9; при R1 =R2=R3=-СН2СН2ОН а+с+е=55, b+d+f=10; при R1=R2=R3 =-CH2CH2OH а+с+е=66, b+d+f=15; при R 1=R2=R3=-CH2CH2 OH а+с+е=76, b+d+f=18; при R1=R2=H R 3 = алифатический углеводородный радикал, содержащий 10-16 атомов углерода, а+с+е=66, b+d+f=15; при R1=R 2=H R3 = алифатический углеводородный радикал, содержащий 10-16 атомов углерода, а+с+е=76, b+d+f=18; при R 1=R2=H R3 = алифатический углеводородный радикал, содержащий 17-20 атомов углерода, а+с+е=49, b+d+f=0; при R1=R2=H R3 = алифатический углеводородный радикал, содержащий 17-20 атомов углерода, а+с+е=55, b+d+f=0; при R1=R2=H R3= , а+с+е=49, b+d+f=9; при R1=R2 =H R3= , а+с+е=55, b+d+f=10, и к способу их получения.
Изобретение относится к новым 1,2,3-трис{[аминополи(этилен-амино)этиламмонио]метилкарбонилоксиполи(алкиленокси)]}пропан трихлори-дам формулы: где: при а+с+е (общая степень оксипропилирования) = 49, b+d+f (общая степень оксиэтилирования) = 0, n=1-6; при а+с+е=55, b+d+f=0, n=1-6; при а+с+е=49, b+d+f=9, n=1-6; при а+с+е=55, b+d+f=10, n=1-6; при а+с+е=66, b+d+f=15, n=1-6; при а+с+е 76, b+d+f=18, n=1-6, и к способу их получения.
Изобретение относится к новым 1,2,3-трис[(аммонио)метил-карбонилоксиполи(алкиленокси)]пропан трихлоридам, общей формулы: где при: -Х+=-N+R 1R2R3, R1=R2 =H, R3 = алифатический углеводородный радикал, содержащий 10-16 атомов углерода, а+с+е (общая степень оксипропилирования)=49, b+d+f (общая степень оксиэтилирования)=0; при: -Х+ =-N+R1R2R3, R 1=R2=H, R3 = алифатический углеводородный радикал, содержащий 10-16 атомов углерода, а+с+е=55, b+d+f=0; при: -Х+=-N+R1R2R 3, R1=R2=H, R3 = алифатический углеводородный радикал, содержащий 10-16 атомов углерода, а+с+е=80, b+d+f=24; при: -X+=-N+R1R 2R3, R1=R2=H, R3 = алифатический углеводородный радикал, содержащий 10-16 атомов углерода, а+с+е=90, b+d+f=27; при: -X+=-N +R1R2R3, R1 =R2=H, R3 = фенил, а+с+е=80, b+d+f=24; при: -X+=-N+R1R2R 3, R1=R2=H, R3 = фенил, а+с+е=90, b+d+f=27; при: -X+= , а+с+е=80, b+d+f=24; при: -X+= , а+с+е=90, b+d+f=27, и к способу их получения.
Изобретение относится к полиалкиленгликолевым кислотам и к их связыванию с терапевтически активными биофармацевтическими препаратами, такими как полипептиды, сахара, белки и терапевтически активные низкомолекулярные соединения, с целью получения терапевтически активных коньюгатов полиалкиленгликоля с указанными биофармацевтическими препаратами.
Изобретение относится к новым [(гетерилонио)метилкарбонилокси-поли(алкиленокси)]-[(аммонио)метилкарбонилоксиполи(алкиленокси)]пропан трихлоридам, общей формулы: где: при X+=Y+= Z+=-N+R1R2 R3, R1=R2=H, R3=алифатический углеводородный радикал, содержащий 10-16 атомов углерода, а+с+е (общая степень оксипропилирования)=49, b+d+f (общая степень оксиэтилирования)=9; при X+=Y+= Z+=-N+R1R2 R3, R1=R2=H, R3=алифатический углеводородный радикал, содержащий 10-16 атомов углерода, а+с+е=55, b+d+f=10; при X+= Y+=Z+=-N+R1 R2R3, R1=R2=H, R 3=алифатический углеводородный радикал, содержащий 10-16 атомов углерода, а+с+е=49, b+d+f=9; при X+= Y+=Z+=-N+R1 R2R3, R1=R2=H, R 3=алифатический углеводородный радикал, содержащий 10-16 атомов углерода, а+с+е=55, b+d+f=10; при X+= Y+=Z+=-N+R1 R2R3, R1=R2=H, R 3=алифатический углеводородный радикал, содержащий 10-16 атомов углерода, а+с+е=49, b+d+f=0; X+= Y+=Z+=-N+R1 R2R3, R1=R2=H, R 3=алифатический углеводородный радикал, содержащий 10-16 атомов углерода, а+с+е=55, b+d+f=0; при X+=Y+ = Z+=-N+R1R2 R3, R1=R2=H, R3=алифатический углеводородный радикал, содержащий 10-16 атомов углерода, а+с+е=49, b+d+f=0; при X+= Z+=-N+R1R2 R3, R1=R2=H, R3=алифатический углеводородный радикал, содержащий 10-16 атомов углерода, а+с+е=55, b+d+f=0, и к способу их получения.
Изобретение относится к способу получения новых присадок-регуляторов вязкоупругих свойств ассоциированных мультикомпонентных нефтяных систем, которые могут быть использованы в нефтяной и нефтехимической промышленности.
Изобретение относится к новым 1,2,3-трис[(аммонио)метилкарбонил-оксиполи(алкиленокси)]пропан трихлоридам где при R1=R2=R3 =-СН2СН2ОН а+с+е (общая степень оксипропилирования) = 49, b+d+f (общая степень оксиэтилирования) = 9; при R1 =R2=R3=-СН2СН2ОН а+с+е=55, b+d+f=10; при R1=R2=R3 =-CH2CH2OH а+с+е=66, b+d+f=15; при R 1=R2=R3=-CH2CH2 OH а+с+е=76, b+d+f=18; при R1=R2=H R 3 = алифатический углеводородный радикал, содержащий 10-16 атомов углерода, а+с+е=66, b+d+f=15; при R1=R 2=H R3 = алифатический углеводородный радикал, содержащий 10-16 атомов углерода, а+с+е=76, b+d+f=18; при R 1=R2=H R3 = алифатический углеводородный радикал, содержащий 17-20 атомов углерода, а+с+е=49, b+d+f=0; при R1=R2=H R3 = алифатический углеводородный радикал, содержащий 17-20 атомов углерода, а+с+е=55, b+d+f=0; при R1=R2=H R3= , а+с+е=49, b+d+f=9; при R1=R2 =H R3= , а+с+е=55, b+d+f=10, и к способу их получения.
Изобретение относится к новым 1,2,3-трис{[аминополи(этилен-амино)этиламмонио]метилкарбонилоксиполи(алкиленокси)]}пропан трихлори-дам формулы: где: при а+с+е (общая степень оксипропилирования) = 49, b+d+f (общая степень оксиэтилирования) = 0, n=1-6; при а+с+е=55, b+d+f=0, n=1-6; при а+с+е=49, b+d+f=9, n=1-6; при а+с+е=55, b+d+f=10, n=1-6; при а+с+е=66, b+d+f=15, n=1-6; при а+с+е 76, b+d+f=18, n=1-6, и к способу их получения.
Изобретение относится к новым 1,2,3-трис[(аммонио)метил-карбонилоксиполи(алкиленокси)]пропан трихлоридам, общей формулы: где при: -Х+=-N+R 1R2R3, R1=R2 =H, R3 = алифатический углеводородный радикал, содержащий 10-16 атомов углерода, а+с+е (общая степень оксипропилирования)=49, b+d+f (общая степень оксиэтилирования)=0; при: -Х+ =-N+R1R2R3, R 1=R2=H, R3 = алифатический углеводородный радикал, содержащий 10-16 атомов углерода, а+с+е=55, b+d+f=0; при: -Х+=-N+R1R2R 3, R1=R2=H, R3 = алифатический углеводородный радикал, содержащий 10-16 атомов углерода, а+с+е=80, b+d+f=24; при: -X+=-N+R1R 2R3, R1=R2=H, R3 = алифатический углеводородный радикал, содержащий 10-16 атомов углерода, а+с+е=90, b+d+f=27; при: -X+=-N +R1R2R3, R1 =R2=H, R3 = фенил, а+с+е=80, b+d+f=24; при: -X+=-N+R1R2R 3, R1=R2=H, R3 = фенил, а+с+е=90, b+d+f=27; при: -X+= , а+с+е=80, b+d+f=24; при: -X+= , а+с+е=90, b+d+f=27, и к способу их получения.
Изобретение относится к способу получения флуоресцентных производных декстранов, предназначенных для изучения транспорта биологически активных веществ через клеточные мембраны и изучения механизмов действия лекарственных препаратов на клеточном и субклеточном уровнях.
